儿童川崎病抗核抗体及抗核抗体谱检测结果分析

胡晓璐，赖雨田，刘志强，柯江维

（1.江西省儿童医院检验科，江西 南昌330006；2.赣州市妇幼保健院重症医学科，江西 赣州341000）

川崎病(Kawasaki disease，KD)是以全身血管炎为主要病变的一种急性发热性疾病[1]，主要累及中小动脉， 又称皮肤黏膜淋巴结综合征，KD 为自身免疫性疾病，纳入风湿性疾病范畴[2]。 KD 是导致我国小儿后天性心脏病的主要病因[3]。 抗核抗体(antinuclear antibodies，ANA）检测广泛应用于风湿免疫疾病的临床诊断。 本研究通过分析急性期KD患儿ANA 核型及ANAs 检出情况， 评估ANA 及ANAs 在KD 患者疾病筛查中的意义及相关核型与特异性自身抗体检出率。 现报告如下。

1 对象及方法

1.1 研究对象 选取2018 年6 月至2021 年6 月江西省儿童医院住院的135 例急性期KD 患儿，入院前未接受丙球蛋白和激素治疗，纳入标准：符合美国心脏病学会修定的2017 年版指南诊断标准[4]；排除标准：入组对象均排除合并其他自身免性疾病、心血管疾病、肝肾功能不全、严重贫血或凝血功能障碍及其它发热性疾病。 所有样本均在受试对象或监护人知情同意条件下获得。 选取60例健康体检儿童作为对照组进行分析。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 利用间接免疫荧光法测定ANA，按照说明书严格操作， 荧光滴度≥1∶100 判为阳性。 免疫印迹法测定ANAs，以EUROBlotMaster 软件判读结果。ANAs 谱包括抗AMA- M2、抗AnuA、抗Histon、抗Jo -1、抗CENP、 抗PCNA、 抗dsDNA、抗PM-Scl、抗Rib P、抗Ro-52、抗SS-A、 抗SS-B、抗Scl-70、抗Sm、抗RNP/Sm 抗体。 所用试剂盒均由德国欧蒙生物技术有限公司提供。

1.2.2 标本采集 空腹采集肝素促凝血3 mL。 肝素促凝血静置30 min，3000 rpm，离心15 min，分离血清，-80℃冰箱保存。

1.3 统计分析 采用SPSS 20.0 统计软件进行统计分析。 采用K-S 检验和Levene 检验分析计量资料正态性和方差齐性。 正态分布计量资料以均值±标准差(±s)表示，组间比较采用t 检验；计数资料组间比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究对象比较 共纳入KD 患儿135 例， 男女比例78∶57， 平均年龄 (2.61±0.93) 岁， 男性占57.78%，女性占42.22%。健康对照组60 例，男女比例35∶25，平均年龄(2.43±1.02)岁，男性占58.33%，女性占41.67%。 两组性别构成差异无统计学意义（ χ2=0.053，P=0.942），年龄差异无统计学意义（t=1.210，P=0.228）。 见表1。

表1 各组一般资料比较

2.2 两组ANA 阳性率比较 通过对两组入选患儿血清进行间接免疫荧光法ANA 测定， 以荧光滴度≥1∶100 判为阳性。 KD 组ANA 滴度≥1∶100 有16 例，阳性率为11.85%。 NC 组ANA 滴度≥1∶100有1 例，阳性率为1.67%。 KD 组ANA 阳性率高于NC 组，差异具有统计学意义（ χ2=5.359，P=0.021）。见表2。

表2 各组ANA 阳性率比较

2.3 两组ANA 核型分布 两组ANA 核型进行判读，KD 组16 例阳性核型分布为：2 例核点型，占12.50%；12 例核颗粒型，占75.00%；1 例核仁型，占6.25%；1 例核均质型，占6.25%。60 例NC 组中有1例阳性，为核颗粒型，阳性率为1.67%。 见表3。 荧光核型，见图1。

图1 KD 组HEP-2 抗核抗体荧光核型（×40）

表3 各组荧光法ANA 核型分布表

2.4 两组ANA 检测滴度对比 两组ANA 滴度进行比较，KD 组有16 例阳性，其中15 例ANA 滴度为1∶100， 占93.75%；1 例ANA 滴度为1∶320，占6.25%。NC 组有1 例阳性，ANA 滴度为1∶100。两组ANA 滴度分布具有差异，差异具有统计学意义（Z=2.323，P=0.020）。 见表4。

表4 各组荧光法ANA 检测滴度对比

2.5 两组ANAs 检测结果对比 对两组ANAs 进行比较，发现NC 组全为阴性。 135 例KD 组中，有6例患者ANAs 阳性，阳性率为4.44%，其中3 例标本为SSA 阳性，2 例标本为Ro-52 阳性，1 例AM2为阳性。 但KD 组ENA 阳性率与NC 组无显著性差异（ χ2=1.463，P=0.227）。见表5。免疫印迹法条带见图2。

图2 KD 组ANAs 免疫印迹条带

表5 各组荧光法ANA 检测滴度对比

2.6 检测结果对比 两种方法学对KD 检测结果具有差异性，ANA 检测阳性率高于ANAs， 差异具有统计学意义（ χ2=4.948，P=0.026），见表6。两种方法检测结果均为阳性的6 例ANA 核型与ANAs 检测结果对比分析， 核颗粒型多为抗SS-A 抗体、抗Ro-52 抗体阳性。

表6 两种方法检测结果对比

3 讨论

抗 核 抗 体( antinuclear antibodies，ANA)，又 称抗细胞抗体( anti-cellular antibody，AC)[5]，是包括针对真核细胞内各种抗原成分的自身抗体总称，其对自身免疫病具有较高的诊断敏感性[6]。 人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2 ( Human epithelial type 2)细胞含有数百种天然抗原， 以Hep-2 细胞为底物的间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay，IFA)可检测患者血清中不同自身抗体，并呈现相应的荧光核型[7]。 IFA 法检测抗核抗体对自身免疫病筛查具有重要作用， 其检测结果中包括抗体滴度和荧光核型[8]。 其中，抗体滴度与患者体内ANA 含量呈一定相关性， 而荧光核型则与特定样本中所含的特异性自身抗体有关， 有助于自身免疫病的诊断与鉴别诊断[9]。

抗核抗体的靶抗原为多种细胞核成分， 其中ANA 主用于对风湿免疫病筛查，ANA 则主要针对于风湿免疫病诊断和鉴别[10]。通过对两组入选患儿血清进行间接免疫荧光法ANA 测定，KD 组ANA滴度≥1∶100 有16 例阳性，阳性率为11.85%。 NC组ANA 滴 度≥1 ∶100 有1 例 阳 性， 阳 性 率 为1.67%。KD 组ANA 阳性率高于NC 组，差异具有统计学意义（ χ2=5.359，P=0.021）。 再对入选患儿血清进行间接免疫荧光法ANA 核型进行判读，KD 组16 例阳性核型分布为：2 例核点型， 占12.50%；12例核颗粒型， 占75.00%；1 例核仁型， 占6.25%；1例核均质型，占6.25%，说明KD 患儿核型以核颗粒型为主。 60 例NC 组中有1 例阳性， 为核颗粒型。 对各组ANA 滴度进行比较， 发现16 例阳性KD 组中，15 例ANA 滴度为1∶100，占93.75%；1 例ANA 滴度为1∶320，占6.25%，两组ANA 滴度分布具有差异， 差异具有统计学意义 （Z=2.323，P=0.020）。对各组ANAs 进行比较，发现NC 组全为阴性，KD 组中有6 例患者抗体阳性， 阳性率为4.44%，3 例标本为SSA 阳性，2 例标本为Ro-52 阳性，1 例AM2 为阳性，说明以SSA 和Ro-52 为主。两种方法学对KD 检测结果具有差异性，ANA 检测阳性率高于ANAs， 差异具有统计学意义 （ χ2=4.948，P=0.026）。 说 明 对 于KD 诊 断，ANA 优 于ANAs。 研究再对两种方法检测结果均为阳性的6例ANA 核型与ANAs 检测结果分析， 发现核颗粒型多为抗SS-A 抗体、抗Ro-52 抗体阳性。

综上所述， ANA 及ANAs 检测在KD 诊断中具有一定的临床诊断价值，且研究KD 患儿核型以核颗粒型为主，ANAs 以SSA 和Ro-52 为主， 临床判读时应多注意， 但本研究ANAs 阳性抗体较低，标本量少，应多纳入标本，才能得到最后的结论。