荆芥中有机磷类农药残留测定方法的建立及残留状况调查

周国威 贾月梅 赵亚文 李海鹰

摘要：目的研究中药材荆芥中有机磷类农药的残留情况，为荆芥的绿色种植和监管提供参考依据。方法通过建立气相色谱-火焰光度检测器（GC-FPD）同时分析测定9种有机磷类农药的方法，并用于20批次荆芥中农药残留状况研究，然后对检测结果进行分析。结果在检测的20批次样品中，有4批样品检出了3种有机磷类农药，分别是氧化乐果、久效磷和对硫磷，其中有2批样品检测出对硫磷残留，检出浓度分别为0.083 mg/kg和0.090 mg/kg，氧化乐果和久效磷残留的检出浓度分别为0.065 mg/kg和0.068 mg/kg。结论建立的方法操作簡便、快速和准确，可用于荆芥中9种有机磷类农药残留的测定，所测荆芥虽不同程度受到有机磷类农药污染，但未超过欧洲药典（EP9.0）中的最大农药残留限量标准。

关键词：荆芥;有机磷;农药残留;GC-FPD

中图分类号：R282  文献标志码：A  文章编号：1007-2349（2022）06-0062-04

荆芥，始记于《神农本草经》，常作为解表药，应用于中医临床治疗中，现代药理研究发现，它有解热、抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用[1-3]，用途十分广泛。随着野生中药资源的匮乏，人工种植逐渐成为中药材的主要来源[4]，与传统农作物相似，规模化种植过程中，会使用农药防治病虫害，因此可能导致中药材中存在农药残留。

有机磷类农药作为一种广谱的杀虫剂，因其具有廉价、高效等优点，有不少种类被广泛应用[5]，但因其急性毒性强，在环境和作物中的农药残留可通过食物富集作用而影响人类健康[6]，因此，为加强对中药材中此类农药残留的监控力度，建立快速、有效、灵敏度高和多残留同时检测的农药残留检测方法已经成为评控中药材中农药残留量的重要任务。

本研究建立了快速、有效、低成本的气相色谱-火焰光度检测器（GC-FPD）法，可同时测定荆芥中9种有机磷农药的残留量，并调查分析荆芥中有机磷类农药残留状况，为荆芥的绿色规范种植和监管提供农药残留监控依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 GC-2010plus 型气相色谱分析仪（带火焰光度检测器）和AOC-20i 型自动进样器（日本SHIMADZU公司）;2-6型离心机（德国Sigma公司）;AG204型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 试药 乙腈（批号：20181202001，纯度：色谱纯），天津赛孚瑞科技有限公司;正己烷（批号：20180715001，纯度：色谱纯），天津赛孚瑞科技有限公司;甲苯（批号：2018032101，纯度：色谱纯），上海安谱实验科技股份有限公司;敌敌畏标准品（批号：20181222）、甲胺磷标准品（批号：20180906）、灭线磷标准品（批号：20181011）、甲拌磷标准品（批号：20181011）、氧化乐果标准品（批号：20180906）、久效磷标准品（批号：20180906）、乐果标准品（批号：20180906）、毒死蜱标准品（批号：20181210）、对硫磷标准品（批号：20180906），以上9种农药标准品规格均为：100 μg/mL，购自农业部环境保护科研监测所。

1.3 试样 荆芥样品信息及其对应序号，见表1。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合标准品储备液制备 精密量取各农药标准溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，摇匀，得1 μg/mL的9种有机磷农药混合标准溶液，置于0～4 ℃下，避光保存。

2.1.2 供试品溶液制备 将荆芥样品粉碎，过3号    筛，精密称定1.0 g样品，置于20 mL离心管中，加入乙腈5 mL，涡旋提取5 min，4000 r/min离心10 min，将上层清液转入鸡心瓶中，再用乙腈5 mL提取一次，合并提取液，减压浓缩至2 mL，待净化。

固定好石墨化碳/氨基固相萃取柱，加约1 cm高无水硫酸钠，用乙腈∶甲苯（3∶1）溶剂3 mL预淋洗，当柱内液面即将到达硫酸钠顶部时，将上述浓缩液倒入柱中，用2 mL乙腈：甲苯（3∶1）洗脱液洗涤三次后，再用10 mL乙腈：甲苯（3∶1）洗脱2次，用鸡心瓶收集流出液，于旋转蒸发仪上40 ℃浓缩至干，加1 mL正己烷溶解，即得。

2.2 色谱条件 毛细管色谱柱：DB-1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）;进样口温度：250 ℃;检测器温度：250 ℃;程序升温：初始柱温50 ℃，以30 ℃/min升至130 ℃，以8 ℃/min升至220 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至250 ℃，保持3 min;载气为氢气（纯度≥99.999 %），其流量：65 mL/min;空气流量：90 mL/min;进样方式：不分流进样;进样量：1 μL。该条件下9种农药分离良好，其混合标准溶液的GC-FPD色谱图见图1。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密量取“2.1”项下储备液适量，用正己烷为溶剂，配制9种有机磷类农药浓度依次为0.05，0.1，0.2，0.5和1 μg/mL的混合标准品溶液，进行GC-FPD测定，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归计算，结果见表2。

2.3.2 精密度试验 精密量取“2.1”项下农药标准品储备液，配制浓度为0.5 μg/mL的9种农药混合标准溶液，在上述色谱条件下进行测定，连续进样6次，根据峰面积，计算各农药的精密度值，结果表明：各目标农药峰面积的RSD值为1.10 %～3.76%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 加样回收率试验 准确称取空白荆芥样品1.0 g，精密加入农药标准品适量，使其分别成0.2、0.5和1 mg·kg-1低、中、高3个浓度水平样品，每个水平下分别制备3份供试品溶液，进行GC-FPD测定，结果见表3。

2.4 荆芥样品测定 按“2.1.2”项下方法制备，在“2.2”项所述色谱条件下，对20批荆芥进行GC-FPD测定，根据峰面积，计算其中的农药残留量，并对测出农药残留的样品，用气相色谱-质谱法联用仪（GC-MS）法进行验证，结果见表4。

3 讨论

3.1 方法适应性情况 在方法建立过程中，采用在中药材农药残留检测中常用的乙腈作为提取溶剂，并以溶剂消耗少、回收率高的涡旋提取、离心分离作为提取方式[7-9]。未净化的荆芥基质成分比较复杂，故采用农药残留检测中操作简单、重现性好的固相萃取技术[10，11]，以石墨化碳/氨基固相萃取柱对荆芥样品进行净化，结果显示，9种有机磷类农药标准曲线相关系数R2在0.9984～0.9999之间，说明9种有机磷类农药在0.05～1 μg/mL之间线性关系良好;三个添加水平的平均回收率在75.8 %～114.5 %之间，RSD在1.76 %～5.43 %之间，表明该方法准确度高，重现性好，适合荆芥中9种有机磷类农药残留的测定。

3.2 荆芥样品中有机磷类农药残留情况 为保证检测的结果具有指导意义，荆芥样品采自市场流通最大的河北安国市及其周边地区[12]，经过实地调研，选取荆芥中最后可能存在的9种农药作为检测目标，检测结果显示，20批荆芥样品中，有4批检出了有机磷类农药残留，其中样品中检测出的2批对硫磷残留的浓度分别为0.083 mg/kg和0.090 mg/kg，检出的氧化乐果和久效磷残留浓度分别为0.065 mg/kg和0.068 mg/kg。

现在，我国还没有关于此3种有机磷类农药在中药材中的最大残留限量标准，参照最新版欧洲药典（EP 9.0）中的标准，氧化乐果（以氧化乐果和乐果的总和为计）、对硫磷和久效磷的限量标准分别为0.1 mg/kg，0.5 mg/kg和0.1 mg/kg，由此可见，荆芥样品中这三种农药残留量符合欧洲药典（EP 9.0）中的限量要求。

本研究建立的GC-FPD法操作简便、快速和准确，可用于荆芥中9种有机磷类农药残留的测定;所测荆芥样品总检出率（4/20）不高，检出的有机磷类农药残留符合欧洲药典（EP 9.0）中对中药材中农药残留限量标准;但是与欧洲药典相比，我国的药典对中药材农药残留的限量标准不够完善，因此，还需国家相关部门制定合适的标准，为荆芥的规范化种植进行有效的监控和管理，以保障荆芥食用和药用安全。

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（收稿日期：2021-09-06）