Dvl-3在结肠癌中的表达及与结肠癌生物学行为的关系

李俊,郭旭利,郭晓红（广东省惠州市中心人民医院,广东 惠州 516008）

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发病率及死亡率逐年上升，据2018年全球癌症数据统计，其发病率位于第四，死亡率位于第三[1]。大量研究表明[2]，结肠癌的预后与肿瘤大小、分期、分化程度有一定关系。近期一些研究表明[3]，WNT通路的失调与恶性肿瘤的发生有一定关系，Dvl家族蛋白是WNT通路的重要成员，在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、脑胶质瘤等肿瘤中异常表达。但Dvl-3与结肠癌的关系国内目前尚无相关报道，本研究的目的是探讨Dvl-3的表达在癌组织及癌旁组织中是否存在差异，并探讨Dvl-3表达水平与结肠癌生物学行为的关系，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 研究对象 收集2019年1月-2019年12月期间在我院手术切除的结肠癌组织标本及癌旁正常组织标本，90份结肠癌组织标本作为观察组，76份癌旁正常组织标本作为对照组。标本对象年龄在35-70岁，男性58例，女性32例。纳入标准：标本所系患者均经病理诊断为结肠癌[参考中国结直肠癌诊疗规范(2020年版)][4]。排除标准：①标本对象术前已接受化疗、放疗、生物靶向治疗等治疗措施；②临床资料不完整或可信度不高。

1.2 检查方法 ①Dvl-3水平检测：手术切除的新鲜标本置于-80℃冰箱保存。分别运用实时荧光定量PCR方法检测结肠癌组织及癌旁组织Dvl-3 mRNA水平，然后采用酶联免疫吸附法检测结肠癌组织及癌旁组织Dvl-3水平。②血CEA水平检测：采集实验对象空腹静脉血3mL，送至检验科离心取得血清备用，使用罗氏全自动电化学发光仪（型号：cobas® e411）检测样本血CEA水平。

1.3 评价方法 根据上述指标检测结果，比较两组标本Dvl-3表达水平的差异性，并分析Dvl-3的表达水平与肿瘤大小、分期、分化程度、性别、年龄、血CEA的关系。

1.4 统计学分析 采用SPSS19.0软件包进行统计学分析，计量数据以平均值±标准差(±s)表示，采用t检验分析。计数数据用百分比表示，采用卡方检验分析，相关分析采用Pearson法，当P＜0.05时，认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组标本中Dvl-3表达水平比较 对照组标本中，Dvl-3多数呈现阴性或弱阳性表达，无强阳性表达；而观察组标本中Dvl-3表达阳性率远高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组标本中Dvl-3的表达水平[n(%)]

2.2 Dvl-3的表达水平与临床病理资料的关系 Dvl-3表达水平在直径较大组、未分化和低分化组、Ⅲ与Ⅳ分期组、CEA水平较高组阳性率明显高于直径较小组、肿瘤中度以上分化组、Ⅰ与Ⅱ分期组、CEA水平较低组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 Dvl-3在结肠癌组织中的表达水平与临床病理资料的关系[n(%)]

2.3 Dvl-3表达水平与肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤分化程度及血CEA的相关性分析 Dvl-3表达水平与肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤分化程度及血CEA水平呈正相关（r：0.502；0.433；0.479；0.517，P＜0.001），见表3。

表3 Dvl-3表达水平与肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤分化程度及血CEA的相关性分析

3 讨论

结肠癌是发生于结肠部位较常见的消化道恶性肿瘤，好发于41-51岁年龄段[5]。随着社会的发展，人类饮食生活习惯的改变，导致胃肠道肿瘤发病率攀升。相关统计表明[6]，结肠癌的发病率仅次于胃癌和食管癌，位列胃肠道肿瘤发病率第三，发病率亦呈上升趋势。结肠癌由于起病隐匿，早期症状不典型，缺乏特异性，患者在就诊时多为中晚期，预后较差，病死率高。为提高结肠癌患者生存率，改善预后，早期发现和明确诊断具有重要临床价值[7]。近年来大量研究表明[2,8-10]，结肠癌的预后与肿瘤大小、分期、分化程度有一定关系。目前国内外研究均提示[11]，Wnt通路转录调控细胞增殖、分化、肿瘤发生的基因，Wnt通路的过度激活常容易诱导肿瘤的发生，而Dvl家族蛋白是Wnt通路的重要成员，对肿瘤的发生发展有着重要的研究价值。

Dishevelled是机体组织细胞中广泛存在的胞浆蛋白，有Dvl-1、Dvl-2和Dvl-3 三个成员，是Wnt途径正调控因子，其N端的DIX域，可结合Axin，中央区的PDZ域，为蛋白-蛋白相互作用的位点，可结合多种蛋白质，而其C端DEP域则具有调节细胞的极性及移动的作用[12]。Dvl可被DIX、PDZ、DEP三个结构域激活，进而参与调节多个信号通路激活过程，是Wnt通路中重要的蛋白，而Wnt通路中各种蛋白最终汇集到β-catenin上，当Wnt信号通路关闭时，其会与其他的蛋白形成一种复合体后降解，Wnt信号通路被激活后，使GSK-3β失去活性，进而抑制β-catenin的磷酸化，使胞浆内β-catenin含量升高，并与胞质内的TCF/LEF形成免疫复合物，激活其他的细胞周期基因，导致细胞周期发生异常，最终发展为恶性肿瘤[13]。本实验结果显示，观察组标本中Dvl-3表达阳性率远高于对照组，与上述结论一致。本研究结果显示，Dvl-3表达水平在直径较大组、未分化和低分化组、Ⅲ与Ⅳ分期组阳性率明显高于直径较小组、肿瘤中度以上分化组、Ⅰ与Ⅱ分期组；经Pearson相关性分析得出，Dvl-3表达水平与肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤分化程度呈正相关。提示Dvl-3阳性表达在低分化、肿瘤较大、中晚期的结肠癌显著高于在中高分化、肿瘤较小、早期的结肠癌，可见Dvl-3通过某一机制影响着肿瘤的增殖、侵袭、迁移，由于其与其他信号转导通路存在交叉，具体通过哪一条信号通路影响着肿瘤细胞的发展，还有待进一步研究确认。张心怡[14]等研究显示，Dvl蛋白在食管鳞癌组织中存在过度表达，Dvl蛋白阳性表达在低分化、中晚期的结肠癌显著高于在中高分化、早期的结肠癌；Dvl蛋白通过Wnt/B-catenin信号通路，参与调节癌细胞的增长、迁移和凋亡等过程。本实验结果与上述实验研究结果相似。本实验结果显示，Dvl-3表达水平在不同血CEA水平分组中，CEA水平较高组阳性率高于CEA水平较低组，经Pearson相关性分析得出，Dvl-3表达水平与血CEA水平呈正相关。CEA是常见的且较早发现的肿瘤标志物，对于消化道肿瘤具有很好的诊断价值，但特异性表现欠佳。在结肠癌患者中，血CEA水平会明显升高[15]，本实验结果显示Dvl-3表达水平与血CEA水平呈正相关，说明血CEA和Dvl-3表达水平在提示结肠癌信息中起协同作用，可联合检测辅助诊断结肠癌。

综上所述，Dvl-3在结肠癌组织中呈现高度表达，且Dvl-3阳性表达在低分化、肿瘤较大、中晚期的结肠癌显著高于在中高分化、肿瘤较小、早期的结肠癌，表明Dvl-3表达水平可能与结肠癌的发生，肿瘤的增殖、侵袭、迁移密切相关，可联合血CEA辅助早期诊断结肠癌，并可尝试将其作为评估结肠癌预后的指标，但是有效性有待临床进一步验证。