血清miR-29a、miR-20a水平预测老年STEMI患者PCI治疗后缺血再灌注损伤

李鑫柠 王学超 白世茹 党懿 杜荣品

(河北省人民医院心内科，河北 石家庄 050000)

经皮冠状动脉介入(PCI)术是治疗ST段抬高型心肌梗死(STEMI)有效方式，通过心导管技术，恢复患者心肌供血〔1〕。由于STEMI好发于老年群体，老年患者身体普遍较弱，常合并多种基础疾病，PCI术后易出现缺血再灌注损伤(IRI)，威胁患者生命安全〔2〕。因此如能有效预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI风险，针对性干预，对改善患者预后有积极意义。微小核糖核酸(miRNA)参与多种心血管系统疾病的病理过程〔3〕。miR-29a、miR-20a均属于miRNA的一种，其中miR-29a可调控心肌细胞凋亡，而miR-20a可抑制血管内皮生长因子表达，减少血管生成〔4〕。如能发现miR-29a、miR-20a与IRI的关系，通过miR-29a、miR-20a预测IRI风险，对挽救老年STEMI患者生命有积极意义。鉴于此，本研究着重分析血清miR-29a、miR-20a水平预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2020年4月至2021年4月河北省人民医院收治的100例行PCI治疗的老年STEMI患者临床资料，男57例，女43例；年龄60～78岁，平均年龄(67.18±3.57)岁；体重指数18～26 kg/m2，平均(22.10±1.28)kg/m2；纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级：Ⅰ级23例，Ⅱ级49例，Ⅲ级20例，Ⅳ级8例。100例老年STEMI患者PCI治疗后发生IRI 46例(46.00%，发生组)，其中再灌注性心律失常17例(36.96%)，再灌注低血压29例(63.04%)。未发生IRI 54例为未发生组。

1.2入选标准 纳入标准：①STEMI符合《内科学(第九版)》〔5〕中的诊断标准，并经冠状动脉造影确诊；②初次发病；③发病24 h内接受PCI治疗；④临床资料完整。排除标准：①合并肝肾功能不全；②合并周围血管疾病；③长期大量吸烟、饮酒；④合并恶性肿瘤。

1.3IRI诊断标准 参考《中国经皮冠状动脉介入治疗指南(2016)》〔6〕，① PCI术后开通冠状血管≤4 h，继发严重心动过缓伴低血压、频发室性期前收缩；②药物治疗或电复律及电除颤后伴有严重室性心律失常；③冠状动脉造影诊断冠状动脉前向血流心肌梗死溶栓治疗0～2级，可见血栓、夹层及痉挛等血管闭塞。

1.4方法 取患者PCI术前静脉血5 ml，离心(转速3 000 r/min，离心15 min)取血清，20℃保存待检，取血清样本，37℃水中复溶，加入Trizol裂解液，提取血清总RNA，并测定RNA浓度与纯度。采用逆转录试剂盒进行逆转录反应，取cDNA作为模板，使用实时荧光定量PCR仪7300Plus(国械注进20163220767，Life Technologies Holdings Pte Ltd)进行实时荧光定量聚合酶反应。miR-29a引物序列：上游：5′-GCCCTAGCACCATCTGAAAT-3′，下游：5′-GTGCAG GGTCCGAGG-3′；miR-20a上游：5′-GGGGTGTTTACGTAGACCAGAACCAC-3′，下游：5′-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′；内参小分子U6上游：5′-ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG-3′，下游：5′-GCCATCACGCCAGTT TC-3′。反应条件为95℃，5 min预变形，95℃，5 s变性、60℃，30 s退火循环36次，从60℃缓慢升至97℃，充分延伸收集荧光信号，绘制溶解曲线。以2-ΔΔCt表示miR-29a、miR-20a的相对表达量。

1.5一般资料收集 查阅老年STEMI患者临床资料，记录患者性别、年龄、体重指数、高血压(参照相关指南〔7〕)、糖尿病(参照相关指南〔8〕)。取患者入院时静脉血5 ml，离心(转速3 000 r/min，离心15 min)取血清，使用血糖与血脂监测仪LipidPro(国械注进20152222771，OSANG Heaithcare Co.，Ltd.)检测并记录患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。

1.6统计学方法 采用SPSS23.0软件进行独立样本t检验、χ2检验、Logistic回归分析；绘制受试者工作特征(ROC)曲线得到曲线下面积(AUC)，检验血清miR-29a、miR-20a水平预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生的价值：AUC<0.50无价值，0.50≤AUC<0.70诊断价值较低，0.70≤AUC<0.85诊断价值中等，>0.85诊断价值高。

2 结 果

2.1基线资料 发生组与未发生组性别、年龄、体重指数、高血压、糖尿病、TC、TG、HDL-C、LDL-C比较差异无统计学意义(P>0.05)；发生组与未发生组NYHA心功能分级差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2两组血清miR-29a、miR-20a水平比较 发生组miR-29a水平高于未发生组，miR-20a水平低于未发生组，差异有统计学意义(P<0.001)。见表2。

表2 两组血清miR-29a、miR-20a水平比较

2.3血清miR-29a、miR-20a水平与老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生的关系分析 将血清miR-29a、miR-20a水平作为协变量，老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生情况作为因变量(0=未发生，1=发生)，经Logistic回归分析结果显示，血清mi-29a水平过表达(OR>1，P<0.05)，miR-20a水平低表达与老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生相关(OR<1，P<0.05)。见表3。

2.4血清miR-29a、miR-20a水平预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI的价值分析 将血清miR-29a、miR-20a水平作为检验变量，将老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生情况作为状态变量(0=未发生，1=发生)，绘制ROC曲线，结果显示，血清miR-29a、miR-20a水平及联合检查预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI的AUC均>0.70，均有一定预测价值，其中联合检测诊断价值最高。见表4、图1。

表4 血清miR-29a、miR-20a水平预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI的价值分析

图1 血清miR-29a、miR-20a水平及联合检测预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI的ROC曲线

3 讨 论

IRI是STEMI患者PCI治疗后常见并发症，主要因STEMI患者冠状动脉突然开通恢复血流，易导致血管内皮细胞功能异常，氧自由基生成过多，攻击细胞膜，使细胞膜功能单位结构与功能障碍，造成心肌细胞坏死，诱发IRI〔9〕。韩婷婷等〔10〕研究显示，PCI术后IRI发生率约47.00%与本研究46.00%较为相似。提示STEMI患者PCI治疗后IRI发生率较高。

miRNA是小分子非编码RNA，在心肌梗死、心律失常等心脏疾病发生与发展过程中发挥重要作用〔11〕。miR-29a是miR-29家族中重要一员，在多种恶性肿瘤疾病的发生与发展中起到重要作用〔12〕。miR-20a是miR1-17-92基因簇产物，在血清中表达较为稳定，同时在血管生成中发挥重要作用〔13〕。本研究结果提示发生组老年STEMI患者miR-29a、miR-20a表达异常。进一步经Logistic回归分析结果显示，血清miR-29a水平过表达，miR-20a水平低表达与老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生相关。分析其原因为STEMI患者多存在血脂异常，患者机体中低浓度的氧化LDL可诱导miR-29a表达上调，使平滑肌细胞迁移能力增强，诱发急性冠状动脉综合征，增加IRI风险〔14〕。B细胞淋巴瘤(Bcl)-2是一种重要的抗凋亡蛋白，在细胞凋亡调控中，Bcl-2可通过阻止细胞色素(Cyt)-C释放至细胞质中，抑制凋亡下游级联反应〔15〕。而miR-29a可通过降解mRNA或抑制蛋白反应，抑制心肌细胞中细胞存活促进因子水平，促进心肌细胞凋亡，诱发IRI。同时据相关研究显示，miR-29a可负向调节转化生长因子(TGF)-β1因子的表达，促进多种疾病纤维化进程〔16〕。但TGF-β1也对心脏具有保护作用，TGF-β1可通过在缺氧条件下的抗氧化机制在心房肌细胞中发挥保护作用。因此miR-29a升高可导致STEMI患者心肌细胞凋亡，降低机体对心肌细胞的保护作用。

miR-20a可通过促进血管内皮生长因子(VEGF)的大量释放，调节血管生成，加速侧支循环建立，改善患者心肌缺血缺氧状况〔17〕。如miR-20a水平降低，导致VEGF分泌量较少，无法有效建立侧支循环，导致病情恶化。同时miR-20a是自噬相关基因(ATG)7典型的上游靶基因，与ATG7表达呈负相关，如miR-20a水平下降，则ATG7呈高表达，促进心肌细胞自噬，导致心肌受损，诱发IRI〔18〕。因此miR-20a可有效促进STEMI患者侧支循环建立，降低心肌细胞自噬，起到保护心肌细胞的作用。此外本研究进一步绘制ROC曲线结果提示STEMI患者血清miR-29a、miR-20a水平可有效预测PCI术后IRI风险。

综上所述，血清miR-29a、miR-20a水平能够有效预测老年STEMI患者PCI治疗后IRI发生风险，临床可通过检测血清miR-29a、miR-20a水平，为早期防治IRI发生提供依据。