高海拔大马士革玫瑰的黄酮类化学成分

刘梦影, 俞雅芮, 黄 娇, 张 艺, 黄 静*

(1. 四川大学 华西药学院,四川 成都 610041； 2. 成都中医药大学 民族医药学院,四川 成都 610041)

蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)植物大马士革玫瑰(Rosadamascena)是世界公认的优质玫瑰品种,具有大的观赏和药用价值。大马士革玫瑰精油具有舒缓镇静[1]、抗菌、抗炎、抗氧化和抗血栓形成的药理活性[2],其非挥发性提取物具有止咳、降血糖、抗衰老、肝保护和中枢神经系统抑制作用等[3]。然而,上述研究的原料均为中低海拔(500～1500 m)地区栽培的大马士革玫瑰[4],并且有研究指出海拔高度对大马士革玫瑰叶片中叶绿素含量[5]及甲醇提取物抗氧化活性[6]有显著影响。因此,本研究以高海拔大马士革玫瑰为研究对象,探究其化学成分。

本文从高海拔大马士革玫瑰花蕾的95%乙醇提取物中分离得到了9个黄酮醇类化合物(1,3,5～11),以及两个黄酮类化合物(2和4),分别鉴定为5,7-二羟基-3,6,4′-三甲氧基黄酮醇(1)、 5,7-二羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(2)、 5,7,4′-三羟基-3,6-二甲氧基黄酮醇(3)、 5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮(4)、 5,4′-二羟基-3,6,7-三甲氧基黄酮醇(5)、 5,7-二羟基-3,6,8,4′-四甲氧基黄酮醇(6)、 8-甲氧基取代山奈酚(7)、山奈酚(8)、槲皮素(9)、槲皮素 3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(10)和银锻苷(11)。化合物1～5为首次从蔷薇属植物中分离得到,化合物1～7、10、11为首次从大马士革玫瑰中分离得到(Chart 1)。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Bruker AV-400 MHz型核磁共振仪；GL-3000制备型高效液相色谱仪；Agela Technologies C18型反相柱；GF254型薄层色谱硅胶、G型柱色谱硅胶；柱层析聚酰胺。

实验所用植物材料于2020年06月购自四川省盐源县玫瑰基地,经四川大学华西药学院天然药物学系黄静教授鉴定为大马士革玫瑰Rosedamascena的花蕾,凭证标本(MG202006)现存于四川大学天然药物化学系；其余所用试剂均为分析纯或化学纯。

1.2 提取分离

取干燥大马士革玫瑰花蕾4.0 kg,粉碎后用95%乙醇连续回流提取2 h,过滤,滤液减压浓缩得总浸膏1.0 kg；总浸膏加入丙酮(10 L),加热至56 ℃溶解,过滤,滤液减压浓缩得丙酮浸膏400.0 g。丙酮浸膏(400.0 g)经硅胶柱层析纯化(梯度洗脱剂：石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮和甲醇),TLC检查并合并相同部分,得到6部分(Frs.1～6)。 Fr.3经硅胶柱层析(梯度洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=10/1～0/1,V/V)纯化得8部分(Frs.3-1～3-8)； Fr.3-4先后经聚酰胺柱层析、反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱,依次得到化合物1(175.0 mg),2(17.0 mg),3(81.0 mg),4(16.0 mg),5(67.0 mg),6(12.0 mg)和7(3.0 mg)。 Fr.4经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(8:1～0:1)梯度洗脱,得7部分(Frs.4-1～4-7)； Fr.4-6先后经聚酰胺柱层析得5部分(Frs.4-6-1～4-6-5)； Fr.4-6-2经C18反相柱、反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱,得化合物8(87.0 mg)和9(35.0 mg)。 Fr.4-6-3经C18反相柱、反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱,得化合物10(8.0 mg)和11(5.0 mg)。

1： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了1组活泼氢信号：δH12.91(1H, s, 5-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.01(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1个芳香氢单峰信号：δH6.54(1H, s, 8-H)； 3组甲氧基的氢信号：δH3.06(3H, s, C4′-OCH3),2.98(3H, s, C6-OCH3)和2.76(3H, s, C3-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC155.2(C2)和138.5(C3)； 1个羰基碳信号：δC179.3(C4)； 12个芳香碳信号：δC152.3(C5), 130.2(C6), 156.3(C7), 93.3(C8), 151.9(C9), 106.3(C10), 122.9(C1′), 130.3(C2′), 114.2(C3′), 161.8(C4′), 114.2(C5′)和130.3(C6′)； 3个甲氧基碳信号：δC60.3(C3-OCH3), 61.0(C6-OCH3)和55.6(C4′-OCH3)。以上数据与文献[7]报道基本一致,故鉴定1为5,7-二羟基-3,6,4′-三甲氧基黄酮醇。

2： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了2组活泼氢信号：δH13.01(1H, s, 5-OH)和10.70(1H, s, 7-OH)；1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：

Chart 1

δH8.00(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.07(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 2个芳香氢单峰信号：δH6.83(1H, s, 3-H)和6.59(1H, s, 8-H)； 2个甲氧基氢信号：δH3.83(3H, s, 4′-OCH3)和3.74(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC163.3(C2)和103.1(C3)； 1个羰基碳信号：δC182.2(C4)； 12个芳香碳信号：δC152.8(C5), 131.4(C6), 157.4(C7),94.3(C8), 152.4(C9), 104.2(C10),122.9(C1′),128.3(C2′), 114.6(C3′), 162.3(C4′), 114.6(C5′)和128.3(C6′)；2个甲氧基碳信号：δC59.9(C6-OCH3)和55.5(C4′-OCH3)。以上数据与文献[8]报道基本一致,故鉴定2为5,7-二羟基-6,4′-二甲氧基黄酮。

3： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了2个活泼氢信号：δH12.77(H, s, 5-OH)和10.45(H, s, 7-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH7.93(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.94(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)；1个芳香氢单峰信号：δH6.91(1H, s, 8-H)； 2个甲氧基氢信号：δH3.77(3H, s, 3-OCH3)和3.75(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC155.7(C2)和137.3(C3)； 1个羰基碳信号：δC178.2(C4)； 12个芳香碳信号：δC151.6(C5), 131.2(C6), 157.4(C7), 91.0(C8), 151.5(C9), 104.6(C10), 120.6(C1′), 130.1(C2′), 115.7(C3′), 160.3(C4′), 115.7(C5′)和130.1(C6′)； 2个甲氧基碳信号：δC59.7(C3-OCH3)和60.0(C6-OCH3)。以上数据与文献[9]报道基本一致,故鉴定3为5,7,4′-三羟基-3,6-二甲氧基黄酮醇。

4： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz ,DMSO-d6)显示了1个活泼氢信号：δH12.76(H, s, 5-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH8.02(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.14(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1个芳香氢单峰信号：δH6.87(1H, s, 3-H)； 3个甲氧基氢信号：δH3.87(3H, s, 4′-OCH3), 3.85(3H, s, 8-OCH3)和3.78(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC163.1(C2)和103.0(C3)； 1个羰基碳信号：δC182.2(C4)； 12个芳香碳信号：δC148.3(C5), 131.5(C6), 150.9(C7), 127.9(C8), 145.4(C9), 102.9(C10), 122.9(C1′), 128.1(C2′), 114.7(C3), 162.3(C4′), 114.7(C5′)和128.1(C6′)； 3个甲氧基碳信号：δC60.1(C6-OCH3), 61.2(C8-OCH3)和55.5(C4′-OCH3)。以上数据与文献[9]报道基本一致,故鉴定4为5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮。

5： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了2个活泼氢信号：δH12.63(H, s, 5-OH)和10.30(1H, s, 4′-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH7.99(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H), 6.96(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1个芳香氢单峰信号：δH6.91(1H, s, 8-H)； 3组甲氧基氢信号：δH3.92(3H, s, 3-OCH3), 3.80(3H, s, 6-OCH3)和3.74(3H, s, 7-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC158.6(C2)和137.6(C3)； 1个羰基碳信号：δC178.2(C4)； 12个芳香碳信号：δC151.7(C5), 131.6(C6), 155.9(C7), 91.4(C8), 151.6(C9), 105.5(C10), 120.5(C1′), 130.2(C2′), 115.6(C3′), 160.3(C4′), 115.6(C5′)和130.2(C6′)； 3个甲氧基碳信号：δC59.6(C3-OCH3), 60.0(C6-OCH3)和56.5(C7-OCH3)。以上数据与文献[10]报道基本一致,故鉴定5为5,4′-二羟基-3,6,7-二甲氧基黄酮醇。

6： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了1个活泼氢信号：δH12.47(H, s, 5-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH8.04(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H), 7.17(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 4个甲氧基氢信号：δH3.86(3H, s, 4′-OCH3), 3.84(3H, s, 3-OCH3), 3.80(3H, s, 8-OCH3)和3.78(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC155.1(C2)和137.6(C3)；1个羰基碳信号：δC178.4(C4)； 12个芳香碳信号：δC147.9(C5), 131.4(C6), 150.9(C7), 127.8(C8), 144.6(C9), 103.5(C10), 122.3(C1′), 129.8(C2′), 114.4(C3′), 161.4(C4′),114.4(C5′)和129.8(C6′)；4个甲氧基碳信号：δC59.7(C3-OCH3),60.2(C6-OCH3), 61.2(C8-OCH3)和55.4(C4′-OCH3)。以上数据与文献[9]报道基本一致,故鉴定6为5,7-二羟基-3,6,8,4′-四甲氧基黄酮醇。

7： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了4个活泼氢信号：δH12.16(1H, s, 5-OH), 10.65(1H, s, 3-OH), 10.13(1H, s, 7-OH)和9.44(1H, s, 4′-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.96(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1个芳香氢单峰信号：δH6.27(1H, s, 6-H)； 1个甲氧基的氢信号：δH3.82(3H, s, 8-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC146.7(C2)和135.7(C3)； 1个羰基碳信号：δC176.1(C4)； 12个芳香碳信号：δC155.4(C5), 98.3(C6), 156.4(C7), 127.4(C8), 148.4(C9), 102.9(C10), 121.8(C1′), 129.3(C2′), 115.5(C3′), 159.2(C4′), 115.5(C5′)和129.3(C6′)； 1个甲氧基碳信号：δC60.9(C8-OCH3)。以上数据与文献[11]报道基本一致,故鉴定7为8-甲氧基山奈酚。

8： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了4个活泼氢信号：δH12.50(1H, s, 5-OH), 10.77(1H, s, 3-OH), 10.13(1H, s, 7-OH)和9.39(1H, s, 4′-OH)； 1组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.94(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1组间位偶合的芳香氢信号：δH6.45(1H, d,J=1.7 Hz, 8-H)和6.21(1H, d,J=1.7 Hz, 6-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC146.8(C2)和135.6(C3)； 1个羰基碳信号：δC175.9(C4)； 12个芳香碳信号：δC160.7(C5), 98.2(C6), 163.9(C7), 93.5(C8), 156.2(C9), 103.0(C10), 121.6(C1′), 129.5(C2′), 115.4(C3′), 159.2(C4′), 115.4(C5′)和129.5(C6′)。以上数据与文献[12]报道基本一致,故鉴定8为山奈酚。

9： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了5个活泼氢信号：δH12.49(1H, s, 5-OH), 10.77(1H, s, 7-OH), 9.56～9.35(3H, brs, 3-OH, 3′-OH, 4′-OH)；1组ABX偶合的芳香氢信号：δH7.62(1H, d,J=2.0 Hz, 2′-H), 7.54(1H, dd,J=8.8 Hz, 2.0 Hz, 6′-H)和6.88(1H, d,J=8.8 Hz, 5′-H)； 1组间位偶合的芳香氢信号：δH6.40(1H, d,J=1.2 Hz, 6-H)和6.18(1H, d,J=1.2 Hz, 8-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC147.2(C2)和136.1(C3)；1个羰基碳信号：δC176.3(C4)；12个芳香碳信号：δC161.1(C5), 98.6(C6), 164.3(C7), 93.8(C8), 156.5(C9), 103.4(C10), 122.4(C1′), 115.5(C2′), 145.5(C3′), 148.1(C4′), 116.0(C5′)和120.4(C6′)。以上数据与文献[13]报道基本一致,故鉴定9为槲皮素。

10： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)显示了4个活泼氢信号：δH12.65(1H, s, 5-OH), 10.87(1H, brs, 7-OH), 9.72(1H, brs, 4′-OH)和9.26(1H, brs, 3′-OH)； 1组ABX偶合的芳香氢信号：δH7.56(1H, d,J=8.4, 2.0 Hz, 6′-H), 7.49(1H, d,J=2.0 Hz, 2′-H)和6.86(1H, d,J=8.4 Hz, 5′-H)； 1组间位偶合的芳香氢信号：δH6.42(1H, d,J=2.1 Hz, 8-H)和6.21(1H, d,J=2.1 Hz, 6-H)； 1组糖端基的氢信号：δH5.51(1H, d,J=4.4 Hz, 1″-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)显示了2个烯碳信号：δC157.0(C2)和133.4(C3)；1个羰基碳信号：δC177.7(C4)； 12个芳香碳信号：δC161.2(C5), 98.7(C6), 164.2(C7), 93.5(C8), 156.3(C9), 104.0(C10), 121.7(C1′), 115.5(C2′), 145.1(C3′), 148.5(C4′), 115.5(C5′)和120.9(C6′)； 1组五碳糖的碳信号：δC107.8(C1″), 82.1(C2″), 76.9(C3″), 85.8(C4″)和60.6(C5″)。以上数据与文献[14]报道基本一致,故鉴定10为槲皮素 3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷。

11： 黄色粉末状固体,10%硫酸乙醇显黄色,HCl-Mg反应呈现阳性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反应呈现阳性。1H NMR(400 MHz, CD3OD)显示了2组AA′BB′偶合的芳香氢信号：δH7.98(2H, d,J=8.7 Hz, 2′-H, 6′-H), 6.81(2H, d,J=8.7 Hz, 3′-H, 5′-H)和7.30(2H, d,J=8.9 Hz, 2‴-H, 6‴-H), 6.79(2H, d,J=8.9 Hz, 4‴-H, 5‴-H)；1组间位偶合的芳香氢信号：δH6.30(1H, d,J=2.0 Hz, 8-H)和6.13(1H, d,J=2.0 Hz, 6-H)；1组反式烯烃氢信号：δH7.40(1H, d,J=15.9 Hz, 3‴-H)和6.07(1H, d,J=15.9 Hz, 2‴-H)； 1组糖端基的氢信号：δH5.25(1H, d,J=7.5 Hz, 1″-H)。13C NMR(100 MHz, CD3OD)显示了4个烯碳信号：δC159.3(C2),135.1(C3), 114.7(C7‴), 146.5(C8‴)；2个羰基碳信号：δC179.4(C4), 168.8(C9‴)； 18个芳香碳信号：δC158.3(C5), 94.81(C6), 165.8(C7), 99.9(C8), 162.9(C9), 105.5(C10), 122.6(C1′), 132.2(C2′), 116.7(C3′), 161.5(C4′), 116.7(C5′), 132.2(C6′), 127.0(C1‴), 131.1(C2‴), 116.0(C3‴), 161.1(C4‴), 116.0(C5‴)和131.1(C6‴)； 1组六碳糖的碳信号：δC103.9(C1″), 77.9(C2″), 75.7(C3″), 71.7(C4″), 75.7(C5″)和64.3(C6″)。以上数据与文献[15]报道基本一致,故鉴定11为银锻苷。

从高海拔大马士革玫瑰中分离得到了9个黄酮醇类化合物,以及两个黄酮类化合物,其中化合物1～5为首次从蔷薇属植物中分离得到,化合物1～7、10、11为首次从大马士革玫瑰中分离得到。在分离得到的11个个黄酮类化合物中,有9个化合物以前未在大马士革玫瑰中分离得到过,推测可能是种植海拔影响了其生长代谢,使其化学成分与中低海拔大马士革玫瑰相比略有差异,但具体的影响过程还有待研究。