刺梨叶提取工艺优化及其抗氧化活性研究

刘 丹，丁小艳

（1.贵州省食品药品检验所，贵州贵阳 550004；2.贵州省材料产业技术研究院，贵州贵阳 550016）

实验中所用刺梨叶，被2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收录，是药食同源植物，在贵州省等地分布较为广泛，目前在贵州多地有种植基地，为贵州的优势经济作物[1-3]。近年来，刺梨产业的发展得到了贵州省委、省政府的高度重视，大力支持相关的科学研究。

刺梨叶中的成分对自由基有清除作用。刺梨中的多酚类、黄酮类成分，已被研究证明具有很好的抗氧化作用[4-6]。在近年来的研究中发现刺梨叶有α-葡萄糖苷酶抑制活性，对2型糖尿病大鼠脂代谢也起一定的治疗作用[7-11]，这都与刺梨叶的抗氧化机制相关，说明刺梨叶中的抗氧化活性物质值得被深入研究，可制成茶叶等饮品，具有广阔的食品、保健食品应用前景。本实验优化刺梨叶活性成分提取工艺，再比较刺梨叶不同极性部位提取物的抗氧化活性。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

刺梨叶样品为蔷薇科蔷薇属植物缫丝花的干燥叶；Folin-Ciocalteu试剂（F-C试剂，自制）；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110831-201204）；芦丁对照品（成都曼斯特生物有限公司，批号MUST-11040302）；水为去离子水；试剂均为分析纯。

CARY100-Bio紫外-可见分光光度计（美国瓦里安中国有限公司）；DY-H4-型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；KQ-500DB超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；ACCULAB型万分之一电子天平（深圳市郎普电子科技有限公司）；高速中药粉碎机（上海精宏试验设备有限公司）；高效液相色谱仪（美国沃特世中国有限公司）；ALC-210.4电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；GZX-GFC-101-2-BS型电热恒温鼓风干燥箱（上海博泰实验设备有限公司）；80-2台式低速离心机（上海医疗器械集团有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液制备

（1）提取工艺优化供试品溶液制备。刺梨叶干燥后粉碎，过筛，得刺梨叶供试品。称取适量刺梨叶供试品，加入10倍量的石油醚浸泡达24 h脱色后，过滤，用石油醚洗涤，干燥后称取1 g样品于50 mL锥形瓶中，精密称定，设置60%乙醇超声提取，3 000 r/min离心10 min，取上清液稀释后待测。

（2）对照品溶液制备。①芦丁标准溶液的配制。准确称取芦丁对照品116.84 mg置于50 mL容量瓶中，用60%乙醇稀释并定容至刻度，制得2.29 mg/mL对照品储备液。精密吸取2.5 mL对照品储备液于25 mL容量瓶中，60%乙醇稀释至刻度，制得229.0 μg/mL芦丁标准液[12]。②没食子酸标准溶液配制。精密称取没食子酸对照品50.0 mg于50 mL容量瓶中，去离子水溶解定容至50 mL，得质量浓度为0.899 mg/mL没食子酸储备液。精密吸取该储备液5 mL于50 mL容量瓶中并用去离子水定容至刻度，制得89.9 μg/mL的没食子酸标准溶液[13]。

（3）抗氧化活性比较供试液制备。精密称取1.2.1项下脱色并干燥后的刺梨粉20 g，60%乙醇溶液，料液比1∶10（g∶mL），超声提取60 min，提取2次，过滤。精密吸取滤液50 mL，为醇层，其他滤液减压蒸发回收乙醇，剩余水溶液分别采用极性增大的乙酸乙酯和水饱和正丁醇依次萃取，最后为水相部位。

1.2.2 正交实验

根据前期的单因素实验，各条件最佳点为液料比25∶1，超声时间30 min，乙醇浓度60%。以各最佳点为中心设计正交实验。以目标函数确定达到总黄酮和总多酚的最佳提取条件，选择加权综合评分法，以总黄酮和总多酚各占50%来确定最佳提取工艺[14]，因素水平见表1。

表1 因素水平表

1.2.3 总抗氧化力和DPPH自由基清除率测定

（1）总抗氧化力测定。精密称取不同极性部位提取物于25 mL容量瓶中，制成浓度为2.6 mg/mL的样品液，将样品液稀释10倍，则制得待测液。分别加入待测液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.5 mL、3.5 mL和4.5 mL于10 mL具塞试管中（空白不加样液，以同体积超纯水代替），加超纯水至体积为1.5 mL，加 入0.6 mol/L的H2SO4溶 液1 mL，28 mmol/L的Na3PO4溶液1.5 mL，4 mmol/L的钼酸铵溶液1.5 mL，再加超纯水至总体积为10 mL，摇匀后置于95 ℃恒温水浴中1.5 h，取出，冷至室温，在695 nm波长处测定吸光度。每个样品平行3次实验。

（2）DPPH自由基清除率测定。将上述总抗氧化力测定中制成的样品液稀释100倍则制得待测液，分别取0.7 mL、1.0 mL、1.3 mL、1.6 mL、1.9 mL和2.2 mL待测液，加超纯水至4 mL，再加0.25 mmol/L的DPPH乙醇溶液2 mL，置暗箱中反应30 min，于517 nm处测定吸光度。对照不加供试液。每个样品平行3次实验。

2 结果与分析

2.1 正交实验优化

由表2可知，极差分析结果显示，提取条件中对测定结果影响程度由大到小的顺序为乙醇浓度、料液比、超声时间；由k值得，最优组合为A1B3C2，得分为664.20分，低于正交实验表中的最佳组合A3B3C2（684.89分）。因此当料液比1∶30、超声时间60 min，乙醇浓度60%时，综合评分最高，提取工艺最佳。

表2 正交实验结果

2.2 刺梨叶不同极性部位抗氧化力比较

由表3可知，刺梨叶不同部位的抗氧化能力大小均为水饱和正丁醇层>乙酸乙酯层>醇层>水层。

表3 不同部位抗氧化能力测定

3 结论

刺梨叶的药理活性与其抗氧化机制有关，可开发相关的保健食品。实验前期研究中发现刺梨叶有很高的抗氧化活性，对刺梨叶的各个极性部位提取物的抗氧化活性进行对比，发现刺梨叶中起抗氧化作用的物质主要在正丁醇层，其次乙酸乙酯层，研究结果表明有必要对抗氧化能力强的极性部位进行深入研究。