HPLC法测定含乳饮料中的三聚氰胺

张淑芳，崔婷婷

（1.乌兰察布市产品质量计量检验检测中心，内蒙古乌兰察布 012000；2.乌兰察布市检验检测中心，内蒙古乌兰察布 012000）

三聚氰胺（Melamine）是一种白色粉末状物质，是一种化工原料，用于制造三聚氰胺树脂，严禁人为添加到食品中[1]。三聚氰胺虽有低毒性，但同时摄入三聚氰胺和三聚氰酸会导致严重的肾毒性[2-3]。在传统的检验检测方法中，主要采用凯氏定氮法对待测物质进行含氮量的测定，最终确定蛋白质的含量。这种检验检测方法只能测得含氮量的多少，忽略了氮的来源和种类，一些不法商家添加三聚氰胺，从而提高含氮量，造成食品中蛋白质含量高的假象。此类不合格食品被人食用后严重影响人体健康，在社会上也造成了恶劣影响[4]。本实验中，利用高效液相色谱仪检测三聚氰胺的含量，为保障食品安全提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

6种含乳饮料样品随机市购；三聚氰胺标准品（纯度为99.5%，坛墨质检科技股份有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市北联精细化学品开发有限公司）；乙腈（色谱纯，天津市风船化学试剂有限公司）；柠檬酸（河北省保定化学试剂厂）；辛烷磺酸钠（色谱纯，天津市北联精细化学品开发有限公司）；试验用水为自制超纯水。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260高效液相色谱仪系统，配有可变波长紫外检测器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD）；电子分析天平（赛多利斯）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

色 谱 柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；进样量：20μL；流速 1.0 mL/min；检测波长：240 nm；离子对试剂缓冲液-乙腈（90∶10，V/V）为流动相。

1.3.2 样品处理

按照《食品安全国家标准 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T 22388—2008）第一法处理样品[5]。

1.3.3 标准溶液配制

取三聚氰胺标准品用甲醇溶液稀释，得到1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL 及20.0 μg/mL的混合标准曲线溶液。

2 结果与分析

2.1 线性范围

利用上述方法进行实验，以峰面积y为纵坐标，质量浓度C（μg/mL）为横坐标x绘制标准曲线。线性方程为y=61.304 179 9x-36.316 309、相关系数为0.999 89、线性范围为1.0～20.0 μg/mL。三聚氰胺的相关系数R2大于0.99，具有良好的线性关系。

图1 三聚氰胺标准曲线

2.2 精密度试验

取三聚氰胺标准溶液，各进样6次，计算精密度，见表1。实验结果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 相对标准偏差分别为5.15%、8.87%、4.04%、2.56%及2.53%，均小于10%，实验重现性好，精密度符合要求。

表1 三聚氰胺标准溶液精密度试验

2.3 加标回收率试验

取空白样品，加入已知浓度的三聚氰胺标准溶液，测3次，结果如表2。由表2可知，三聚氰胺标准溶液的平均回收率为87.974%，准确度好。

表2 三聚氰胺加标回收率试验（n=3）

2.4 部分市售样品检测

如图2所示，三聚氰胺的标准品保留时间为20.963 min。随机选取部分市售含乳饮料样品6种，按照上述的实验方法进行。图3是该6种市售含乳饮料样品其中一种三聚氰胺色谱图，在20.963 min时，没有任何峰出现，说明该样品不含三聚氰胺。其他5个样品图和图3相似，都没有在20.963 min出现峰。结果表明，这6种含乳饮料样品均没有非法添加剂三聚氰胺检出，符合国家标准要求。该方法简单方便，可以用于含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺的检测。

图2 三聚氰胺标准品（浓度1.0μg/mL）

图3 某含乳饮料样品中三聚氰胺色谱图

3 结论

本文利用高效液相色谱法检测含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺，该方法简单方便，重复性与准确度好，方便实验室检测含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺。