史辛夷,封云倩,李云萍,罗国勇, ,张敬杰,
(1.贵州中医药大学药学院,贵州贵阳 550025;2.黔南民族师范学院化学化工学院,贵州都匀 558000)
福建观音座莲(Angiopteris fokiensis),别名马蹄蕨,马蹄风,是观音座莲科观音座莲属植物,分布于我国福建、贵州、浙江、广东和广西等地[1]。作为药食同源植物,福建观音座莲的根茎可取淀粉,为山区一种食粮的来源[1]。同时,福建观音座莲作为常见民族药,常以根茎入药,具有清热凉血、疏风散淤、凉血止血之功效,主治风湿关节炎、腮腺炎、乳腺炎和跌打损伤等炎症相关疾病[2−3]。研究表明,福建观音座莲含有有机酸、黄酮、甾体、内酯、多糖和变型二肽等多样的成分类型[4−7]。其中,变型二肽金色酰胺醇酯和内酯类成分紫其内酯苷更是被证实具有抗炎活性[8−9]。但整体而言,福建观音座莲的抗炎活性缺乏有效的现代药理学数据支撑;抗炎作用机制尚不明确;抗炎活性物质基础有待系统阐明。
大量研究表明,因机体内自由基的产生与消除失衡而造成的氧化应激(Oxidative stress)[10−11],是包括炎症在内的多种疾病的发病和进展机制[12−13]。因此,抗氧化治疗(Antioxidant therapy)逐渐成为治疗炎症相关疾病的有效策略[14−15]。目前,已有研究证实,福建观音座莲的叶和粗黄酮提取物均表现出较好的抗氧化活性[16−17]。这表明,福建观音座莲的抗炎功效或与其抗氧化能力相关。然而,关于福建观音座莲根茎抗氧化成分的提取工艺尚未见报道。因此,本项目以福建观音座莲的根茎为研究对象,以VC当量抗氧化能力为指标,在优化其抗氧化活性成分提取工艺的基础上,进一步评价了不同批次福建观音座莲的抗氧化活性,并测定了与抗氧化活性相关的总酚和总黄酮含量。旨在为福建观音座莲根茎的抗炎机制阐明以及进一步的开发与利用奠定基础。
福建观音座莲根茎 2020 年10 月采自贵州省赤水市和三都县(详见表1);DPPH 和ABTS(98%)
表1 11 批福建观音座莲药材的来源信息Table 1 Sources of 11 batches ofA. fokiensisHieron
上海阿拉丁生化科技股份有限公司;过硫酸钾(99.5%) 上海麦克林生化科技有限公司;芦丁对照品(99.5%)、没食子酸对照品(99%) 成都曼斯特生物科技有限公司;硝酸铝(99%) 天津市科密欧化学试剂有限公司;福林酚试剂(2N) 西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司;氢氧化钠(96%) 重庆川东化工集团有限公司;亚硝酸钠(99%) 天津市致远化学试剂有限公司;所有溶剂均为国产分析纯。
Synergy2 荧光吸收光酶标仪 美国BioTek 有限公司;KQ-400KDB 超声波清洗仪 昆山市超声仪器有限公司;ME204 分析天平 瑞士梅特勒-托利多国际有限公司;HH-4 数显恒温水浴锅 上海梅香仪器有限公司;UV-5900 紫外-可见分光光度计 上海元析仪器有限公司。
1.2.1 抗氧化活性成分提取 采集福建观音座莲的根茎,洗净去泥,切片,自然阴干后粉碎备用。取0.5 g样品粉末,精密称定,于100 mL 圆底烧瓶中,再加入适量溶剂后,加热提取一定时间。完毕,冷却后补重,过滤,收集续滤液,并用对应溶剂稀释10 倍,即得抗氧化活性成分样品液。样品液置于4 ℃下保存备用,24 h 内完成其VC当量抗氧化能力评价。
1.2.2 抗氧化活性成分的提取工艺优化
1.2.2.1 VC当量抗氧化能力的测定 称取VC粉末10 mg,精密称定,用蒸馏水溶解并定容至10 mL,即得VC对照品溶液储备液。使用时,分别取VC储备液400、600、800、1000、1200 μL,用蒸馏水定容至10 mL,即得不同浓度的VC对照品工作液。
称取2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)粉末96 mg 与过硫酸钾16 mg,精密称定,用蒸馏水溶解并定容至25 mL,避光反应16 h后,即为ABTS+储备液,4 ℃保存备用。使用时,取此液用80%乙醇稀释20 倍,即得ABTS+工作液,即配即用[18]。
参照文献[19]的方法并稍加改动,评价样品的VC当量抗氧化能力(Vitamin C equivalent antioxidant capacity,VCEAC)。具体操作如下:向96 孔板中分别加入不同浓度的VC对照品工作液10 μL 后,再依次加入ABTS+工作液250 μL。室温下避光反应6 min 后,于734 nm 处用多功能读数仪测定反应液的吸收值,即可建立ABTS+溶液吸光度降低值(ΔA)与VC浓度之间的标准曲线:Y734nm=4.2144X−0.0338,R2=0.9986。
同样方法测定福建观音座莲根茎抗氧化活性成分样品液相对应的ABTS+溶液吸光度降低值,即测定福建观音座莲根茎的VCEAC 值(mg VC/g 样品),计算公式如下:
式中:Y 为对应的ABTS+溶液吸光度降低值;20 为按1 g 样品进行提取时的稀释系数;V 为加入的提取溶剂体积,mL。
1.2.2.2 单因素实验 取批次为GY-1 的样品,参照 1.2.1 的样品制备方法,分别考察提取溶剂种类、样品粒度、甲醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比6 个因素对福建观音座莲根茎VCEAC 值的影响。
提取溶剂种类:取过2 号筛样品0.5 g,精密称定,70 ℃下,料液比为1:20 g/mL,分别以甲醇、乙醇、水溶液作为提取溶剂,水浴加热提取1 h。完毕,按照 1.2.1 进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值,以确定最佳溶剂。
样品粒度:分别取过2 号筛(24 目)、3 号筛(50 目)、4 号筛(65 目)的样品0.5 g,精密称定,70 ℃下,以甲醇为提取溶剂,料液比为1:20 g/mL,水浴加热提取1 h。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值,以确定最佳样品粒度。
甲醇体积分数:取过3 号筛样品0.5 g,精密称定,70 ℃下,料液比为1:20 g/mL,以不同体积分数的甲醇水溶液(0、30%、50%、70%、90%、100%;v/v,下同)水浴加热提取1 h。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC值,以确定最佳甲醇体积分数。
提取温度:取过3 号筛样品0.5 g,精密称定,以50%甲醇为溶剂,料液比为1:20 g/mL,以不同温度(30、40、50、60、70、80、90 ℃)水浴加热提取1 h。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值,以确定最佳提取温度。
提取时间:取过3 号筛样品0.5 g,精密称定,以50%甲醇为溶剂,料液比为1:20 g/mL,60 ℃下,以不同时间(0.5、1、1.5、2、2.5、3 h)水浴加热提取。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值,以确定最佳提取时间。
料液比:取过3 号筛样品0.5 g,精密称定,以50%甲醇为溶剂,以不同料液比(1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:40、1:50、1:60 g/mL)在60 ℃下,水浴加热提取1 h。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值,以确定最佳料液比。
1.2.2.3 正交试验 基于单因素实验结果,以甲醇体积分数(A)、料液比(B)和提取温度(C)为考察因素,VCEAC 值为评价指标,进一步通过正交试验优化福建观音座莲根茎抗氧化活性成分的提取工艺,因素水平设计见表2。
表2 正交试验因素水平设计Table 2 Factors and levels of the orthogonal test
1.2.3 不同批次样品的VCEAC 值测定 11 个批次的样品粉碎后过3 号筛,分别取0.5 g,精密称定,按确定的最优条件进行提取。完毕,按照 1.2.1 进行后处理,并按 1.2.2.1 方法进行测定,即可得11 个批次样品的VCEAC 值。
1.2.4 不同批次样品的抗氧化活性
1.2.4.1 样品的制备 11 个批次的样品粉碎后过3 号筛,分别取0.5 g,精密称定,按确定的最优条件进行提取。完毕,过滤,收集滤液,在水浴锅上挥干溶剂后进行恒重,得总浸膏。用50%甲醇进行溶解,稀释并定容,即得到质量浓度分别为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/mL 的抗氧化活性样品液。
1.2.4.2 DPPH 自由基清除活性 样品的DPPH 自由基清除活性测定参照文献方法并稍加修改[20]:称取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)粉末58 mg,精密称定,用无水乙醇溶解并定容至100 mL,即得DPPH 储备液,4 ℃保存备用。临用前,取该储备液4.5 mL,用无水乙醇稀释并定容至100 mL,即得DPPH 工作液,现配现用。空白组:50%甲醇100 μL+DPPH 工作液2.9 mL;样品组:不同质量浓度的抗氧化活性样品液各100 μL+DPPH 工作液2.9 mL;对照组:不同质量浓度的抗氧化活性样品液各100 μL+无水乙醇2.9 mL。上述混合液在具塞试管中摇匀后室温下避光反应20 min。完毕,以空白溶剂为参比,于517 nm 波长处分别测定其吸光度,并依次记录吸光度值:A0(空白组);A1(样品组);A2(对照组)。按下式计算自由基清除率:
1.2.4.3 ABTS 自由基清除活性 ABTS+工作液参照 1.2.2.1 方法进行配制。样品的ABTS 自由基清除活性测定参照文献方法并稍加修改[18]:空白组:50%甲醇50 μL+ABTS+工作液3.0 mL(空白组);样品组:不同质量浓度的抗氧化活性样品液各50 μL+ABTS+工作液3.0 mL;对照组:不同质量浓度的抗氧化活性样品液各50 μL+80%乙醇3.0 mL。上述混合液在具塞试管中摇匀后,室温下避光反应6 min。完毕,于734 nm 波长处分别测定其吸光度,并依次记录吸光度值:A0(空白组);A1(样品组)和A2(对照组)。按 1.2.4.2 计算ABTS 自由基的清除率。
1.2.5 不同批次样品的总黄酮与总酚含量测定
1.2.5.1 总黄酮含量的测定 采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法测定样品的总黄酮含量[21]。称取芦丁对照品10 mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至10 mL,即为芦丁对照品工作液。分别取不同体积(200、300、400、500、600、700、800 μL)的芦丁对照品工作液于10 mL 容量瓶中,加入300 μL 5% NaNO2,摇匀后静置5 min,加入300 μL 10% Al(NO3)3混匀后静置6 min,再加入2 mL 4% NaOH 并用蒸馏水定容至刻度。将反应液混匀,静置15 min 后,取250 μL上述反应液置于96 孔板中,于510 nm 下用多功能读数仪测定吸收值。以空白试剂为参比,即可建立吸光度值与芦丁对照品浓度之间的标准曲线,回归方程为:Y510nm=8.0344X−0.0124,R2=0.9991。
11 个批次的样品粉碎后过3 号筛,分别取0.5 g,精密称定,按确定的最优条件进行提取,过滤即得福建观音座莲根茎抗氧化活性成分样品液。取样品液1 mL 于10 mL 容量瓶中,按上述操作进行显色反应。完毕,取250 μL 反应液置于96 孔板中,于510 nm 下用多功能读数仪测定吸收值,即可得被测样品液的总黄酮含量(mg/g 福建观音座莲根茎样品),计算公式如下:
式中:Y 为1 mL 福建观音座莲根茎抗氧化活性成分样品液相应的酶标仪的吸收值;10 为样品液显色的稀释倍数;40 为按照1 g 样品提取时加入的溶剂体积,mL。
1.2.5.2 总酚含量的测定 以没食子酸为对照品,采用福林酚显色法测定样品中总酚的含量[22]。取没食子酸对照品1 mg,精密称定,用蒸馏水溶解并定容至10 mL,即为没食子酸对照品工作液。分别取不同体积(200、400、600、800、1000 μL)的没食子酸对照品工作液于10 mL 容量瓶中,加入1 mL 稀释10 倍的福林酚试剂,混匀后室温下避光反应5 min,再加入2 mL 15% Na2CO3溶液,混匀,用蒸馏水定容至刻度。将此反应液置于室温下避光反应2 h 后,取250 μL上述反应液置于96 孔板中,于760 nm 下用多功能读数仪测定吸收值。以空白试剂为参比,即可建立吸光度与没食子酸对照品浓度之间的标准曲线,回归方程为:Y760nm=60.587X+0.0229,R2=0.9992。11 个批次的样品粉碎后过3 号筛,分别取0.5 g,精密称定,按确定的最优条件进行提取,过滤即得福建观音座莲根茎抗氧化活性成分样品液。取样品液100 μL,用蒸馏水稀释10 倍后置于10 mL 容量瓶中,按上述操作进行显色。完毕,取250 μL 反应液置于96 孔板中,于760 nm 下用多功能读数仪测定吸收值,即可得最佳工艺条件下所提取的总酚含量(mg/g 福建观音座莲根茎样品),计算公式如下:
式中:Y 为100 μL 福建观音座莲根茎抗氧化活性成分样品液相应的酶标仪的吸收值;100 为样品液显色的稀释倍数;40 为按照1 g 样品提取时加入的溶剂体积,mL。
分别考察了提取溶剂、样品粒度、甲醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比6 个因素对样品VCEAC 值的影响,结果如图1 所示。其中,提取溶剂方面(图1A),甲醇有利于抗氧化活性成分的提取,对应VCEAC 值为11.58 mg/g,并显著优于乙醇和水(P<0.05),故选择甲醇为提取溶剂进行进一步试验;样品粒度方面(图1B),在所考察的范围内,样品粒度对VCEAC 的影响并未显示出显著性差异(P>0.05),故选择了3 号筛进行进一步试验;甲醇体积分数方面(图1C),显然,甲醇与水的比例对样品抗氧化活性成分的提取影响显著,随着水的比例增加,对应VCEAC 值呈现先升后降的趋势,以70%甲醇为最优,对应VCEAC值为17.87 mg/g。张勇等[17]的研究表明,福建观音座莲叶的抗氧化活性成分主要集中于中等极性的乙酸乙酯部位,应是甲醇更有利于提取。一定比例的水有助于抗氧化活性成分的提取,或与降低叶绿素、脂类等非极性物质的提取率有关[23]。提取温度方面(图1D),在30~90 ℃的考察范围内,VCEAC 值随提取温度升高,整体呈缓慢上升趋势,90 ℃对应的VCEAC 值最优。考虑温度过高可能会导致抗氧化成分因氧化和降解而失活,故选择与90 ℃无显著差异的60 ℃进行进一步试验(P>0.05)。提取时间方面(图1E),在2.5 h 以内,提取时间对VCEAC 值的影响无显著性差异(P>0.05);超过2.5 h,样品的VCEAC 值显著降低(P<0.05),这或与长时间加热导致抗氧化成分失活有关[24]。综合考虑,最终选择1 h 作为提取时间进行进一步试验。料液比方面(图1F),在1:20~1:40 g/mL 的范围内,VCEAC 值呈显著升高趋势(P<0.05);料液比超过1:40 g/mL,反而不利于抗氧化活性成分的提取。
图1 提取溶剂(A)、样品粒度(B)、甲醇体积分数(C)、提取温度(D)、提取时间(E)、料液比(F)对福建观音座莲根茎VCEAC 值的影响Fig.1 Effects of solvents (A), particle size (B), methanol concentration (C), extraction temperature (D), extraction duration (E), ratio of solid to liquid (F) on VCEAC values of rhizomes ofA. fokiensis注:图中小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。
显然,甲醇体积分数、提取温度和料液比这3 个因素对样品的VCEAC 值影响最为显著,故选为考察因素用于进一步的正交试验。
2.2.1 正交试验 根据单因素实验结果,选取过3 号筛样品水浴加热提取1 h,以提取溶剂的甲醇体积分数(A)、料液比(B)、提取温度(C)为考察因素,以VCEAC 为评价指标,通过正交试验优化福建观音座莲根茎抗氧化活性成分的提取工艺,结果如表3 所示。极差分析结果显示,空列D 的R 值最小,佐证了正交设计试验数据的可靠性。同时,在所考察的水平范围内,各因素影响福建观音座莲根茎中抗氧化活性成分提取的主次顺序为A>B>C,由此可得出最佳提取工艺为A2B3C3,进一步的方差分析结果显示(表4),因素A 和B 对VCEAC 值的影响具有显著性意义(P<0.05),结合比较因素各水平之间的差异性,发现因素A 水平1 和水平2 之间并无显著差别(表5);因素B 各水平之间差异显著(P<0.05);因素C 各水平间均无显著性差别(P>0.05)。因此,综合考虑,最终确定福建观音座莲根茎抗氧化活性成分的最佳提取工艺为A1B3C3,即选取过3 号筛样品,60 ℃下,料液比为1:40 g/mL,以50%甲醇水浴加热提取1 h。
表3 正交试验结果Table 3 Results of orthogonal experiments
表4 方差分析Table 4 Analysis of variance
表5 因素各水平之间差异分析Table 5 Variation analysis between factor levels
2.2.2 验证试验 GY-1 样品经粉碎后过3 号筛,取相应样品粉末0.5 g,精密称定,60 ℃下,用20 mL 50%甲醇水浴加热提取1 h。平行三次。完毕,按照 1.2.1 项进行后处理,并按 1.2.2.1 方法测定待测液的VCEAC 值。结果显示,三次平行实验确定的VCEAC平均值为24.44 mg/g,是所有实验的最优水平,验证了所建立的最佳提取工艺的合理性。同时,结合RSD=0.5%,进一步证明了最佳提取工艺的稳定性。
VCEAC,即VC当量抗氧化能力,其实质是以VC为参照测定被测样品抗氧化活性成分的含量,被广泛用于抗氧化能力的直观评价[19,25−26]。基于建立的最佳提取工艺,通过测定11 个批次的福建观音座莲根茎的VCEAC 值,评价其抗氧化能力。由表6可知,福建观音座莲根茎的VCEAC 值介于9.41~29.32 mg/g 之间,意味着不同批次福建观音座莲根茎的抗氧化能力差异明显。其中,批号为GY-4 和GY-5 的样品的抗氧化能力最强,VCEAC 值分别为29.21 mg/g 和29.32 mg/g。
表6 11 个批次福建观音座莲根茎的VCEAC 值Table 6 VCEAC values of 11 batches ofA. fokiensis
通过DPPH 和ABTS 自由基清除试验评价11个批次福建观音座莲根茎的抗氧化活性,结果如图2 和图3 所示。从图中可以看出,在所考察的浓度范围内,各样品对DPPH 和ABTS 自由基的清除能力随其质量浓度的升高而增大。进一步运用SPSS 26.0 软件计算各样品的抗氧化能力,以半数抑制浓度(IC50,mg/mL)表示。如表7 所示,各批次福建观音座莲根茎的自由基清除活性存在明显差异。其中,基于DPPH 法测定的IC50值介于0.85~3.03 mg/mL之间,ABTS 法测定的IC50值介于1.02~3.81 mg/mL之间。此外,样品对DPPH 自由基的清除活性略强于对ABTS 自由基的清除活性。
表7 DPPH 法和ABTS 法测定的11 批福建观音座莲的IC50值Table 7 IC50values of 11 batches ofA. fokiensisdetermined by DPPH and ABTS scavenging assay
图2 11 个批次福建观音座莲根茎提取物对DPPH自由基清除作用Fig.2 Scavenging effect of root extract from 11 bathes ofA.fokiensison DPPH radicals
图3 11 个批次福建观 音座莲根茎提取物对ABTS自由基清除作用Fig.3 Scavenging effect of root extract from 11 bathes ofA.fokiensison ABTS radicals
总酚与总黄酮既是公认的与抗氧化活性密切相关的天然组分[27−29],也是福建观音座莲中已报道的成分类型[16−17]。为进一步明确福建观音座莲根茎抗氧化提取物的有效组分,测定了11 个批次福建观音座莲根茎抗氧化提取物的总酚和总黄酮含量。结果表明(表8),各批次福建观音座莲根茎抗氧化提取物的总酚和总黄酮含量差异明显,且明显高于叶提取物中总酚与总黄酮的含量[17]。其中,总酚含量介于5.19~17.84 mg/g 之间,总黄酮含量介于8.75~30.18 mg/g之间。此外,样品间总酚和总黄酮的含量差异与对应的VCEAC 值和IC50值(DPPH 法和ABTS 法)均表现出类似的变化趋势,提示我们总酚和总黄酮的含量与福建观音座莲根茎的抗氧化能力密切相关。进一步计算样品的VCEAC 值和IC50值与相应总酚和总黄酮含量之间的皮尔逊相关系数,发现福建观音座莲根茎的VCEAC 值与其所含总酚或总黄酮均呈极显著正相关,IC50值与其所含总酚或总黄酮均呈显著负相关(表9),表明总酚和总黄酮是福建观音座莲根茎的主要抗氧化活性物质。
表8 11 个批次福建观音座莲根茎抗氧化提取物的总酚和总黄酮含量Table 8 Contents of total phenols and flavonoids of antioxidant extract from 11 batches ofA. fokiensis
表9 VCEAC 值、IC50值与总酚或总黄酮含量的相关系数Table 9 Correlation coefficient between antioxidant capacity and content of total phenols or flavonoids
本实验以VC当量抗氧化能力(VCEAC)为指标,测定福建观音座莲根茎中抗氧化活性成分的量。通过单因素及正交试验,确定福建观音座莲抗氧化活性成分的最佳提取工艺:选取过3 号筛的样品,60 ℃下,料液比为1:40 g/mL,以50%甲醇水浴加热提取1 h。此工艺条件下所得样品液的VCEAC 值为24.44 mg/g。
为福建观音座莲的品质评价奠定基础,本实验基于构建的最佳提取工艺,以VCEAC 值与IC50值(DPPH 法和ABTS 法)为指标直观地评价不同批次福建观音座莲根茎的抗氧化能力。结果显示,各批次样品的VCEAC 值在9.41~29.32 mg/g 之间;DPPH法和ABTS 法测定的IC50值分别在0.85~3.03 mg/mL和1.02~3.81 mg/mL 之间。这表明不同批次的福建观音座莲根茎的抗氧化能力存在明显的差异。福建观音座莲为药食两用资源,以根茎为食用和药用部位。因此,有必要对福建观音座莲开展品质评价研究。
为阐明福建观音座莲的抗氧化活性组分,本实验对各批次样品的VCEAC 值和IC50值与其所含总酚和总黄酮的含量进行了相关分析。结果显示福建观音座莲根茎的VCEAC 值与其所含总酚或总黄酮均呈极显著正相关(P<0.01),IC50值与其所含总酚或总黄酮均呈显著负相关(P<0.05),表明总酚和总黄酮是福建观音座莲根茎中主要的抗氧化活性组分,这与张勇等[17]等的研究结论一致:总酚与总黄酮是福建观音座莲叶提取物的主要抗氧化活性组分。本实验11 个批次福建观音座莲根茎中总酚和总黄酮的含量均显著高于叶中总酚和总黄酮的含量[17],根茎较叶应表现出更强的抗氧化能力。但通过数据分析发现,就DPPH 自由基清除活性而言,仅有GY-2 样品的根茎与叶活性相当(0.85 vs 0.80 mg/mL);就ABTS自由基清除活性而言,GY-9 和GY-10 样品根茎的活性显著弱于叶。这提示福建观音座莲的抗氧化作用并非是仅仅依靠总酚或总黄酮,而是多种成分共同作用的复杂过程[30]。
随着抗氧化疗法的兴起,天然抗氧化剂逐渐得到了人民的青睐。作为药食两用植物资源,福建观音座莲表现出良好的抗氧化潜力。进一步筛选抗氧化活性部位、阐明具体活性单体成分、明确抗氧化活性与抗炎活性的相关性,有助于提升福建观音座莲的科技内涵,并促进资源高效合理利用。