藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变与临床病理特征的相关性研究

结直肠癌是全球性健康难题，2020年全球癌症报告显示，2018年全球结直肠癌新发例数193万，死亡例数93万，位居第3位常见癌症和第2位常见癌症死亡原因

。随着居民生活水平提高和饮食习惯的改变，我国结直肠癌的发病率和死亡率均呈上升趋势，位居第3位常见癌症和第5位常见癌症死亡原因

。2015年我国约37万人被新确诊为结直肠癌，约19万人死于结直肠癌

。与结直肠癌发病相关的主要基因突变靶点和信号调控通路中，研究最多且最典型的是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)所介导的信号传导通路，下游主要的两条信号通路RAS/MAPK和PI3K/AKT的持续激活与结直肠癌的形成、发展具有密切关系，而K-ras、PIK3CA基因正是导致上述信号传导通路持续激活的主要原因之一

。西藏属于高海拔地区，特殊的地理环境及饮食文化背景下，本地藏族人群中结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因的突变情况值得探究，但目前鲜见相关研究报道。本研究探讨了藏族结直肠癌患者K-ras和PIK3CA基因突变及其与临床病理因素的相关性，旨在为藏族结直肠癌患者的分子靶向治疗提供理论依据，也为后期完善西藏藏族人群肿瘤患者存在的基因突变情况提供研究参考。

1 资料与方法

选取2020年9月至2021年9月于西藏大学附属阜康医院住院诊治的藏族结直肠癌患者70例。纳入标准：(1)经手术标本/内镜活检组织确诊结直肠癌；(2)首次入院治疗，未曾行放疗或化疗；(3)未合并其他恶性肿瘤；(4)临床资料完整；(5)世居西藏。

“到底是怎么回事，部队撤退为什么不通知我们？师长啊，你这是在拿我们兄弟们的命在开玩笑！”夏国忠气得一口鲜血涌上喉咙，接着从嘴里喷了出来。

将石蜡包埋的结直肠癌组织5 μm厚切片，连续切10张(每张切片癌细胞含量>60%)。运用DNA提取试剂盒(厦门艾德生物医药科技股份有限公司)提取切片中的结直肠癌组织DNA，运用K-ras基因突变检测试剂盒和PIK3CA基因突变检测试剂盒(荧光PCR法，厦门艾德生物医药科技股份有限公司)检测K-ras基因第2、3、4外显子和PIK3CA基因第20外显子突变情况。K-ras上游引物：5′-AGCGTCACTGGCACTTTCAAA-3′，下游引物：5′-CACCCACATAGAAGACCTGGT-3′；PIK3CA上游引物：5′-CACACACTACATCAGTGGCTCAAAG-3′，下游引物：5′-TCCAGCACATGAACGTGTAAACAG-3′；GAPDH上游引物：5′-TCCTCATGCCTTCTTGCCTCTTGT-3′，下游引物：5′-AGGCGCCCAATACGACCAAATCTA-3′。

长期以来，SEC储量评估工作一般由集团公司和油田分公司两级负责，采油厂只是参与。SEC储量评估由总部负责组织、协调、对外披露、技术培训、考核等工作；油田分公司负责具体承担预评估、与外方评估师具体对接、按照评估期限和评估单元进行具体评估与分析、相关课题研究等工作，还要完成被考核的任务指标。采油厂除了提供必要的基础资料外，暂时还没有承担相关指标任务、参加更多的储量评估工作。

分析藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变情况，分析K-ras和PIK3CA基因突变与临床病理特征的关系，及K-ras和PIK3CA基因突变之间的相关性。

进一步分析K-ras、PIK3CA基因突变与临床病理特征的关系，本研究结果显示，右半结肠癌患者较左半结肠癌患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者相较Ⅰ～Ⅱ期患者，K-ras基因突变率更高。本研究结果与美国国家癌症数据库分析的19 877例无转移结直肠癌患者的相关研究结论相一致

。有研究

表明K-ras基因突变同结直肠癌的转移密切相关。而Sinicrope等

在一项包含2 720例结直肠癌患者的队列研究中也得出了类似的结果，并且发现野生型K-ras患者的5年生存率为70.7%，突变型K-ras患者的5年生存率为61%。就生存期方面，Ye等

研究结果与此不同，其研究了国内1 190例结直肠癌患者，得出野生型K-ras患者和突变型K-ras患者的总体生存期无差异。

2 结果

5例患者存在K-ras基因和PIK3CA基因共同突变，突变率为7.1%。K-ras基因突变与PIK3CA基因突变之间呈正相关(

=0

271，

=0.023)(见表2)。

PI3K/AKT是EGFR激活的第2个主要信号通路。EGFR与配体结合后，激活PI3K。PI3K由催化亚基p110和调节亚基p85组成。p110可以使PIP2磷酸化生成PIP3，PIP3随后激活AKT，而AKT可促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。PIK3CA是编码p110的基因，正常细胞中，p110处于低活性，当PIK3CA突变可通过激活p110，刺激AKT信号，导致细胞的增殖和侵袭

。本研究中PIK3CA基因突变率为8.6%，低于文献报道

，该差异可能与民族、环境有关。刘超

研究结果显示，维吾尔族结直肠癌患者K-ras基因12密码子突变率高于汉族突变率。不同民族K-ras和PIK3CA基因突变情况是否一致目前尚无大样本对照研究。

不同原发部位(分为左半结肠和右半结肠)和TNM分期结直肠癌患者之间K-ras基因突变率差异有统计学意义(

均<0.05)，具体为右半结肠癌患者较左半结肠癌患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者较Ⅰ～Ⅱ期患者，K-ras基因突变率更高。而不同的年龄分层、性别、肿瘤直径和分化程度之间K-ras基因突变率差异无统计学意义(

均>0.05)。不同分化程度和TNM分期的结直肠癌患者之间PIK3CA基因突变率差异有统计学意义(

均<0.05)，具体为低分化结直肠癌患者较中-高分化患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者较Ⅰ～Ⅱ期患者，PIK3CA基因突变率更高。而不同的年龄分层、性别、原发部位和肿瘤直径之间PIK3CA基因突变率差异无统计学意义(

均>0.05)(见表1)。

70例藏族结直肠癌患者年龄(53±11.8)岁(34～75岁)，男43例，女27例。有28例存在K-ras基因突变，突变率为40.0%，其中第2外显子突变22例，占突变基因的78.6%；第3外显子突变4例，占突变基因的14.3%；第4外显子突变2例，占突变基因的7.1%。6例患者存在PIK3CA基因突变，突变率为8.6%。

3 讨论

K-ras属于RAS基因家族，是癌症中最常突变的癌基因

。K-ras基因编码的K-ras蛋白具有GTP酶活性，并如同一个分子开关，在活化和非活化的信号传导结构之间循环。K-ras蛋白结合GTP时为活化态，其与下游信号分子结合并激活相应的效应分子，信号实现传递；当GTP水解且K-ras蛋白结合GDP时为失活态，信号被阻止。这两种状态受到鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor，GEF)和GTP酶激活蛋白(GTPase activating protein，GAP)的严格调控，GEF促进GDP从K-ras蛋白上释放，取而代之的是GTP以激活K-ras；而GAP能激活K-ras蛋白的GTP酶属性，加速GTP水解，导致K-ras失活。当K-ras基因突变后K-ras蛋白的GTP酶活性降低，K-ras蛋白水解GTP能力下降，与GTP牢固结合，持续处于活化态，从而放大下游信号通路。这导致细胞内信号传导紊乱，细胞不依赖于EGFR的激活信号，持续增殖甚至癌变

。本研究结果显示，K-ras基因突变率较高，为40.0%，与文献报道基本一致

。

总而言之，旅游管理想要更好地应用新媒体，就必须认真分析和研究新媒体的特点，寻找两者的最佳结合点，只有这样才能达到预期的应用效果。

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本研究结果显示，K-ras基因突变与年龄、性别、肿瘤直径和分化程度无关。朱凤伟等

研究发现，K-ras基因突变与患者年龄、性别、肿瘤大小无关，与本研究结果一致。但与本研究结果不同的是，其研究结果显示,K-ras基因突变与肝转移和临床分期亦无关。但也有研究发现K-ras基因突变率随着年龄增加而升高

。分析上述不同，可能与样本量及民族地域差异有关。石宇婷等

研究发现，汉族右半结肠癌K-ras基因突变率高于蒙古族右半结肠癌突变率。

本研究结果显示，低分化结直肠癌患者较中-高分化患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者较Ⅰ～Ⅱ期患者，PIK3CA基因突变率更高。研究发现Ⅲ～Ⅳ期及发生远处转移的结直肠癌患者其PIK3CA基因突变率更高

。但另有研究显示，PIK3CA基因突变与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度及临床分期均无关

，该差异可能与肿瘤异质性有关，还需进一步研究验证。

本研究中，有5例患者存在K-ras基因和PIK3CA基因共同突变(突变率为7.1%)，两者基因突变之间存在正相关，与一些报道一致

。在临床治疗中，抗EGFR单克隆抗体药物联合FOLFIRI或FOLFOX方案在治疗晚期结直肠癌患者中显示出显著的优势。K-ras基因突变可直接影响结直肠癌患者靶点药物的选择，K-ras基因突变后可抵抗EGFR单抗，导致EGFR单抗治疗无效

。在EGFR单抗治疗无效的患者中，K-ras基因突变占30%～40%，有研究提出PIK3CA基因突变可能是导致K-ras野生型患者EGFR单抗治疗无效的原因

。Xu等

研究发现，K-ras基因或PIK3CA基因突变的结直肠癌对EGFR单抗治疗无反应。目前，多数学者认为K-ras和PIK3CA基因突变状态与化疗疗效相关。美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)指南

建议所有转移性结直肠癌患者进行K-ras基因突变检测，且K-ras基因突变的患者不建议应用西妥昔单抗和帕尼单抗。西藏藏族人群长期居于独特的高原环境，饮食习惯与低海拔地区人群亦有明显不同，藏族人群结直肠癌疾病特征及K-ras、PIK3CA基因突变情况自有特点，本地藏族结直肠癌患者有必要进行K-ras和PIK3CA基因突变检测，用于预测靶向治疗反应及指导EGFR单抗药物选择。本研究存在样本量小、缺乏生存随访等缺陷，需进一步探究。

综上所述，70例藏族结直肠癌患者中K-ras基因突变率为40.0%，PIK3CA基因突变率为8.6%，K-ras基因和PIK3CA基因共同突变率为7.1%，K-ras基因突变和PIK3CA基因突变之间存在正相关。与此同时，右半结肠癌患者相较左半结肠癌患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者相较Ⅰ～Ⅱ期患者，K-ras基因突变率更高；而低分化结直肠癌患者相较中-高分化患者、TNM Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌患者相较Ⅰ～Ⅱ期患者，PIK3CA基因突变率更高。对藏族结直肠癌患者进行K-ras和PIK3CA基因突变检测，有利于精准治疗，改善患者预后。

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