ST段抬高型心肌梗死病人外周血miR-155、HIF1α表达与预后的关系

修明文，边毓尧

ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction，STEMI)是具有心电图典型特征的ST段抬高的心肌梗死[1-2]，病理基础是在冠状动脉斑块损伤基础上诱发急性闭塞性血栓，病变累积范围为左心室前壁、心尖部、下侧壁、前间隔、后间隔和右心室等。我国每年约40万例病人因STEMI入院，起病突然，危险性大，病人30 d心肌梗死发生率为8%～10%，心力衰竭发生率为15%～30%，死亡率为6%～8%，致死率及致残率均较高，严重影响了病人生活和生存质量[3-6]。miR-155可激活蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)信号通路，诱导心血管内皮细胞增殖和集落形成，急性心肌炎、类风湿关节炎、骨关节炎病人miR-155表达升高，且miR-155具有兴奋交感神经及刺激心肌纤维细胞增殖的作用[7-8]。缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alph，HIF1α)在STEMI中表达增加，可诱导糖酵解酶、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)过表达，调节机体细胞和组织对缺氧状态的适应，HIF1α可损伤血管内皮，暴露胶原组织，激活凝血反应链，增加血液黏滞性及凝固性，机体处于高凝状态或血栓前状态，诱发急性心肌梗死发生[9]。本研究探讨STEMI病人外周血miR-155、HIF1α表达与预后的关系，并与肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)等评价STEMI的传统指标进行比较，以期为STEMI早期诊断及治疗提供理论及实践基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年7月—2019年9月在我院心内科确诊的STEMI病人200例为观察组，经临床表现、实验室检查(血常规、血生化)及冠状动脉造影确诊，均符合中华医学会心血管病学分会制定的急性STEMI诊断和治疗指南[10]，其中男100例，女100例，年龄(58.7±12.8)岁；冠状动脉前降支闭塞42例，右冠状动脉闭塞68例，左冠状动脉回旋支闭塞30例，左冠状动脉主干闭塞60例。选择同期于我院门诊健康体检者192名作为对照组。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：STEMI发病<24 h；肢体导联ST段抬高≥0.1 mV，或胸导联ST段抬高≥0.2 mV，或有新发生的左束支传导阻滞；本研究经医院医学伦理委员会审批；所有病人(或病人直系亲属)均签署知情同意书。排除标准：严重心血管疾病病人。

1.3 观察指标 抽取所有研究对象空腹血清，贝克曼AU-4680全自动生化分析仪测定三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、CK-MB、糖化血红蛋白(HbA1c)，南京德铁HBS-1096B酶标仪测定NT-proBNP。剩余血清用于测定miR-155基因的表达，使用Trizol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)从血清中分离总RNA，之后使用SYBR Green PCR试剂(Qiagen，Valencia，CA，USA)行实时酶联免疫吸附法(RT-PCR)测定。连续荧光检测系统(美国MJ Research)。采用△△Ct方法计算miR-155表达相对定量。β-actin、miR-155引物序列及RT-PCR反应体系见表1、表2。

表1 β-actin、miR-155引物序列

表2 RT-PCR反应体系 单位：μL

1.4 miR-155、HIF1α表达与不良心脑血管事件(MACCE)关系分析 根据miR-155、HIF1α表达情况，以均值为界值分为miR-155低表达组(≤2.98)、miR-155高表达组(>2.98)，HIF1α低表达组(≤609.76 ng/mL)、HIF1α高表达组(>609.76 ng/mL)[11]，分析miR-155、HIF1α表达与MACCE的关系。MACCE随访起始日期为出院第1天，随访期限为1年；随访方式为电话，内容包括生存质量、心因性死亡、心力衰竭、非致死性脑卒中、非致死性STEMI。所有研究对象依从性好，研究过程无病人退出及失访。

2 结 果

2.1 两组一般资料比较 观察组高血压、高脂血症、外周血管疾病、糖尿病病人比例高于对照组，差异有统计学意义(P<0.001)。详见表3。

表3 两组一般资料比较

2.2 两组miR-155、HIF1α表达比较 观察组miR-155、HIF1α表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.001)。详见表4。

表4 两组miR-155、HIF1α表达比较(±s)

2.3 两组TG、TC、LDL-C水平比较 观察组TG、TC、LDL-C水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表5。

表5 两组TG、TC、LDL-C水平比较(±s) 单位：mmol/L

2.4 两组CK-MB、NT-proBNP、HbA1c表达比较 观察组CK-MB、NT-proBNP、HbA1c水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表6。

表6 两组CK-MB、NT-proBNP、HbA1c表达比较(±s)

2.5 miR-155、HIF1α与各临床指标的相关性分析 相关性分析结果显示：miR-155、HIF1α与TG、TC、LDL-C、CK-MB、NT-proBNP、HbA1c呈正相关(P<0.05)。详见表7。

表7 miR-155、HIF1α与各临床指标的相关性分析

2.6 ROC曲线及灵敏度、特异度分析 CK-MB、miR-155、HIF1α的AUC分别为0.865[95%CI(0.806，0.892)]，0.815[95%CI(0.735，0.889)]，0.790[95%CI(0.750，0.890)]；miR-155、HIF1α两者的AUC相近，均小于CK-MB。miR-155、HIF1α诊断STEMI的灵敏度、特异度相近(χ2值分别为1.614，1.047，P>0.05)，皆小于CK-MB(χ2值分别为12.974，13.954，P<0.05)。详见表8、图1。

表8 ROC曲线及灵敏度、特异度分析

图1 CK-MB、miR-155、HIF1α的ROC曲线图(红色曲线为CK-MB；紫色曲线为miR-155；绿色曲线为HIF1α)

2.7 不同miR-155表达组与不同HIF1α表达组1年MACCE发生率比较 miR-155高表达组1年MACCE发生率高于miR-155低表达组(χ2=29.026，P<0.001)；HIF1α高表达组1年MACCE发生率高于HIF1α低表达组(χ2=25.854，P<0.001)。详见表9。

表9 不同miR-155表达组和不同HIF1α表达组1年MACCE发生率比较 单位：例(%)

2.8 STEMI发生MACCE的多因素Logistic回归分析 以STEMI是否发生MACCE为因变量(是=1，否=0)，以病人一般资料、血清学指标及miR-155、HIF1α为自变量，进行多因素Logistic逐步回归分析，结果显示：高水平miR-155、CK-MB、HIF1α均为STEMI发生MACCE的危险因素。详见表10。

表10 STEMI发生MACCE的多因素Logistic回归分析

2.9 miR-155、HIF1α表达与STEMI病人预后分析 miR-155低表达组、HIF1α低表达组1年生存率及生存期均高于miR-155高表达组、HIF1α高表达组(χ2值分别为11.126，16.084，P<0.001；Z值分别为16.549，17.087，P<0.001)。详见表11。

表11 miR-155、HIF1α表达水平与STEMI病人预后分析

3 讨 论

炎症反应是引起STEMI病人不稳定斑块破裂的主要原因，miR-155可趋化中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞，动脉粥样硬化不稳定斑块结构改变及斑块内炎症反应加重[11-13]，miR-155与金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)形成复合体降低其活性，导致细胞外基质(EMC)在血管内壁沉淀[14]。有研究显示，STEMI病人病变部位血管平滑肌细胞中miR-155、组织因子抗原过表达，激活凝血酶原形成，加速血栓沉积于血管内皮细胞表面[15]。大鼠STEMI模型中，心脏血管内皮细胞miR-155异常高表达[16]。本研究结果显示，观察组miR-155表达水平高于对照组。高表达的miR-155导致脂质代谢紊乱，TG、TC、LDL-C大量沉淀于血管内皮，引起血管内壁增粗狭窄，进一步诱发STEMI[17]。CK-MB、NT-proBNP是评价心肌梗死的指标，高水平HbA1c提示体内糖基化终末产物水平升高，糖基化终末产物同时可诱导自由基生成，加剧STEMI程度。本研究结果显示，观察组TG、TC、LDL-C水平高于对照组；miR-155与TG、TC、LDL-C、CK-MB、NT-proBNP、HbA1c呈正相关，提示miR-155能加剧STEMI疾病程度。

HIF1α能诱导机体对缺氧耐受力增加，导致单位时间内血流速度增加，机体血流动力学改变是STEMI的重要诱因[18]。HIF1α可促进VEGF和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1)表达，导致内皮结构破坏，加剧动脉粥样程度硬化，进而发生心肌缺血[19-20]。本研究结果显示，观察组HIF1α水平高于对照组。HIF1α可损害内皮细胞，诱导脂肪细胞强力吸附于血管内壁，并释放相当水平的TG、TC[21]。本研究结果显示，HIF1α与TG、TC、LDL-C、CK-MB、NT-proBNP、HbA1c呈正相关。

本研究结果显示，miR-155高表达组、HIF1α高表达组1年MACCE发生率高于miR-155低表达组、HIF1α低表达组，miR-155高表达组、HIF1α低表达组1年生存率及生存期均高于miR-155高表达组、HIF1α高表达组，结合STEMI发生MACCE的多元Logistic回归分析，高水平miR-155、HIF1α、CK-MB均为STEMI发生MACCE的危险因素。说明高水平miR-155、HIF1α的STEMI病人预后不良。ROC分析结果显示，CK-MB、miR-155、HIF1α的AUC分别为0.865[95%CI(0.806，0.892)]，0.815[95%CI(0.735，0.889)]，0.790[95%CI(0.750，0.890)]。miR-155、HIF1α的AUC相近，均小于CK-MB。miR-155、HIF1α诊断STEMI的灵敏度、特异度相近，均小于CK-MB。本研究结果提示miR-155、HIF1α可作为判断STEMI预后的敏感生物学标志物。

综上所述，STEMI病人外周血miR-155、HIF1α升高，与STEMI损伤程度密切相关，高水平miR-155、HIF1α、CK-MB均为STEMI发生MACCE的危险因素；miR-155、HIF1α诊断STEMI灵敏度、特异度较高，二者可作为临床判定STEMI的生物学标志物。本研究未对STEMI病人miR-155、HIF1α升高的具体机制进行深入研究，今后将通过构建动物模型深入探讨miR-155、HIF1α与STEMI的具体机制。