津力达颗粒中具有降糖功效的多糖含量测定*

符必述，刘 应，王迎香，周 波，彭 腾△

1.达州市中西医结合医院(达州 635002)；2.成都中医药大学 药学院(成都 611137)

糖尿病发病率呈逐年增高趋势，2型糖尿病占糖尿病患者90%以上。2型糖尿病控制欠佳易导致多种并发症，甚至危及患者生命；控制好血糖，减少并发症的发生是治疗糖尿病的首要任务。目前，临床上用于治疗2型糖尿病的药物种类较多，主要集中在化学药物、天然药物、中药提取物和中成药等。尽管药物的临床疗效与不良反应交互出现，但天然药物和中成药因具有温和的降糖作用或胰岛素增敏作用，因而在临床上的应用也日益广泛[1-4]。中药多糖因具有良好的降血糖作用[5]，在糖尿病的临床治疗中受到一定关注。

津力达颗粒是一种治疗2型糖尿病的中成药，是石家庄以岭药业股份有限公司研究开发的中药8类新药[6]，由人参、黄精、麸炒苍术、苦参和麦冬等17味中药组成，诸药协同发挥脉络通、脾津运、津自生、力自达的作用，以实现益气养阴、健脾运津的功效。津力达颗粒治疗2型糖尿病的主要机制为抗氧化应激、调节脂肪和蛋白质代谢紊乱、保护胰岛β细胞和改善胰岛β细胞功能缺陷，从而改善胰岛素抵抗以控制血糖。该制剂在调节血糖的同时，以中医整体观念为理论指导进行治疗，以延缓2型糖尿病并发症的发生，对糖尿病所致心血管病变、周围神经病变、肾脏病变等均有较好的临床疗效。津力达颗粒中含有人参多糖[7]、黄精多糖[8]、麦冬多糖[9]、地黄多糖[10]、茯苓多糖[11]等中药多糖，该制剂临床疗效的发挥有赖于上述多糖的协同作用。本研究通过测定津力达颗粒多糖含量，旨在对其质量控制提供一定参考价值。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

UV-3100PC型可见光-紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；BAS124S-CW型电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。津力达颗粒(国药准字Z20050845，生产批号B2002001，规格每袋9 g)，购自石家庄以岭药业股份有限公司；无水葡萄糖(批号wkq20021305，纯度≥98%)，购自四川省维克奇生物科技有限公司；乙醇均为分析纯；水为蒸馏水。

1.2 实验方法

1.2.1 多糖含量测定 1)对照品溶液制备：取无水葡萄糖对照品17.5 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，制得1 mL含无水葡萄糖0.175 mg的溶液。2)供试品溶液制备：精密称定津力达颗粒0.25 g，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇10 mL洗涤3次，将残渣及滤纸置于烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水10 mL洗涤4次，合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。3)最大吸收波长确定：精密吸取对照品溶液1 mL于10 mL具塞试管中，加蒸馏水至2 mL，摇匀，分别加5%苯酚溶液1 mL，混匀，在冰水浴中迅速加入硫酸7 mL，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，放入冰水浴中5 min，取出后恢复至室温备用。取供试品溶液1 mL，按以上方法显色。用紫外-可见分光光度仪扫描最大吸收波长。4)标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分别置于编号为1～7的10 mL具塞试管中，加蒸馏水至2 mL，同“3)”项操作方法。以相应试剂为空白，在最大波长吸收处测定吸光度。5)样品测定：精密量取供试品溶液1 mL，置于编号为8的具塞试管中，加蒸馏水至2 mL，同“3)”项操作方法。以相应试剂为空白，在最大波长吸收处测定吸光度。

1.2.2 方法学考察 1)精密度考察：精密吸取对照品溶液0.2 mL按照相应方法显色，连续测定6次，计算RSD值。2)稳定性实验：精密吸取供试品溶液0.2 mL按照相应方法显色，在第0、30、60、90、100、120 min测定吸光度，计算RSD值。3)重复性考察：精密称取0.25 g津力达颗粒6份，按照相应方法显色，测定吸光度，计算RSD值。4)加样回收率考察：精密吸取已知多糖含量的供试品溶液6份，分别加入葡萄糖标准品溶液，按照相应方法显色，测定吸光度，计算回收率和RSD值。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计软件对津力达颗粒的多糖含量测定数据进行单因素方差分析。标准曲线线性回归方程及其他描述性分析(均值及相对标准偏差RSD)采用Excel 2010软件处理，RSD值应符合《中国药典》2020版第四部药品质量标准分析方法验证指导原则相关要求。检验水准α除特别说明外均设定为0.05。

2 结果

2.1 最大吸收波长

以相应试剂为空白，于分光光度计上进行波长扫描。在400～800 nm 的可见光范围内最大吸收波长为495 nm。

2.2 线性关系

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为Y=0.059 4X+0.144 5，R2=0.999 4，表明无水葡萄糖对照品在浓度4.6～32.2 mg/L范围内与吸光度线性关系良好(图1)。

图1 葡萄糖对照品标准曲线

2.3 方法学验证

2.3.1 精密度实验 精密吸取对照品溶液0.2 mL,按照相应方法显色，连续测定6次吸光度;其中RSD值为0.02%，表明仪器精密度良好(表1)。

表1 津力达颗粒多糖含量测定精密度实验结果

2.3.2 稳定性实验 精密吸取供试品溶液0.2 mL,按照相应方法显色，在第0、30、60、90、100、120 min测定吸光度;其中RSD值为0.37%，表明显色120 min内较稳定(表2)。

表2 津力达颗粒多糖含量测定稳定性实验结果

2.3.3 重复性考察 精密称取0.25 g津力达颗粒6份，按照相应方法显色，测定吸光度。其中RSD值为1.63%，表明该方法重复性好(表3)。

表3 津力达颗粒多糖含量测定重复性实验结果

2.3.4 加标回收率考察 精密吸取已知多糖含量的供试品溶液6份，分别加入葡萄糖标准品溶液，按照相应方法显色，测定吸光度。计算出平均加样回收率为98.42%，RSD值为1.46%(表4)。

表4 津力达颗粒多糖含量测定加样回收率实验结果

2.4 样品含量测定

分别精密量取3份供试品溶液1 mL置于10 mL具塞试管中，按照1.2.1 4)方法项下的显色方法显色，测定吸光度，测定结果采用方差分析，平均吸光度值为0.145 1(P<0.05)。将3次测得样品的吸光度平均值带入线性方程Y=0.059 4X+0.144 5计算，即测得津力达颗粒多糖含量为9.26%(表5)。

表5 供试品吸光度测定结果

3 讨论

植物多糖是一种广泛存在于植物组织中的生物大分子，其是由多个单糖分子通过糖苷键聚合、脱水所形成的含酮基或醛基的多羟基聚合物，多以纤维素、淀粉、果胶等形式存在于植物体内[12]。目前，报道来源于药用植物的中药多糖种类已多达200种[13]。随着多糖与糖尿病关系研究[14]逐渐深入，发现一些中药多糖类成分在治疗糖尿病方面具有安全性好、疗效确切和不良反应少的优势，并对糖尿病并发症具有改善作用；其降糖机制可能为植物多糖能促进胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗，调节糖代谢酶的活性，促使外周组织对葡萄糖的作用从而抑制糖异生、促进肝糖元合成，增进免疫系统功能和抗氧化作用，上述多种途径的协同作用提高了津力达颗粒的降血糖功效[15]。

2型糖尿病在祖国医学中被称为消渴病，认为主要病机为阴津耗伤、燥热耗气伤津，临床治疗则应以益气养阴为主。津力达颗粒由人参、黄精、麸炒苍术、苦参、麦冬、地黄、制何首乌、山茱萸、茯苓、佩兰、黄连、知母、炙淫羊藿、丹参、粉葛、荔枝核和地骨皮17味中药组成，方中人参健脾益气，为全方君药；黄精补脾益气，黄连、苦参、苍术滋阴清热共为臣药；丹参养阴畅脉，佩兰、茯苓、麦冬、知母芳香化湿、养阴化瘀共为佐药；使药荔枝核可畅达脾气，引药上行；同时配伍淫羊藿、何首乌、山茱萸补肝肾之阴，固护下焦[16]。全方具有益脾气、养脾阴、畅脾气、温脾阳、泄脾热，通脉络的配伍特点，诸药协同作用共同发挥脉络通、脾津运、津自生、力自达的作用[17]，从而实现益气养阴，健脾运津的功效[18-21]。

目前津力达颗粒广泛应用于2型糖尿病的临床治疗，对于轻型2型糖尿病，有单用津力达颗粒治疗的成功案例[22]，也有联合二甲双胍、西格列汀、达格列净及各类型胰岛素治疗的研究报道[23-26]，主要通过抗氧化应激、调节脂肪和蛋白质代谢紊乱、保护胰岛β细胞和改善胰岛β细胞功能缺陷，从而改善胰岛素抵抗等机制控制血糖；同时对于高血脂、口干口渴等症状均有较好的临床疗效。有研究[27-30]报道，津力达颗粒发挥血糖调节作用的同时，联合通心络胶囊、贝那普利、羟苯磺酸钙、硫辛酸等治疗，可改善和延缓2型糖尿病的并发症，对糖尿病所致的心血管病变、周围神经病变、肾脏病变等均有较好的临床疗效。

本研究采用紫外-可见分光光度法测定了津力达颗粒多糖含量为9.26%。该方法在葡萄糖浓度4.6～32.2 mg/L范围内，葡萄糖质量与峰面积线性关系良好，平均回收率为98.42%。本研究所建立的津力达颗粒多糖含量测定法简单可行，稳定性和重现性好。

综上所述，津力达颗粒多糖含量较高，说明该制剂中的多糖类成分在用于临床治疗2型糖尿病中发挥了较大的作用。17味中药组成的津力达颗粒除含有多糖类成分外，还含有较丰富黄酮类、皂苷类等成分。但本研究仅测定了津力达颗粒的多糖含量，因此，对制剂中黄酮类、皂苷类等成分的研究有待进一步深入。