Toll样受体4、色素瘤核蛋白18、HMBOX1表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级的关系

张涛涛，任志敏，吕祥瑞

（1.焦作市人民医院病理科，河南 焦作 454350；2.郑州市妇幼保健院病理科，河南 郑州 450000）

子宫内膜癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，严重威胁患者生命健康。目前关于子宫内膜癌发生机制尚未完全明确，可能与分子调控机制有关。Toll样受体4（toll-like receptor 4，TLR4）是最早发现的Toll样受体亚型之一，与炎症感染、组织纤维化疾病、恶性肿瘤发生和发展有关［1-2］。黑色素瘤核蛋白18（melanoma nuclear protein 18，Mel-18）是PcG家族重要成员之一，在恶性肿瘤发生和发展中起到重要作用。HMBOX1是2006年从人胰腺cDNA文库分离出来的新基因，是一种潜在的核转录因子，能发挥转录抑制活性［3-4］。目前我国关于HMBOX1研究较少，其与恶性肿瘤的研究尚处于探索中［5］。本研究选取子宫内膜癌患者作为研究对象，分析TLR4、Mel-18、HMBOX1表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取焦作市人民医院2018年6月至2020年1月收诊的42例子宫内膜癌患者。子宫内膜癌病理分期Ⅰ期23例，Ⅱ期10例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例。组织学分级G1级30例，G2级8例，G3级4例。年龄21～69岁，中位年龄为43.58岁。

1.2 选取标准纳入标准：（1）经病理诊断确诊为子宫内膜；（2）首次确诊；（3）未接受治疗；（4）既往病史清晰。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤；（2）抑郁症；（3）妊娠期、哺乳期或有计划妊娠；（4）全身免疫性疾病；（5）活动性出血。

1.3 研究方法

1.3.1 收集患者年龄、病理分期和组织学分级。

1.3.2 Mel-18表达 获取患者子宫内膜癌组织，常规处理标本，构建Mel-18过表达细胞系及对照组细胞系，PBS洗涤3次，更换培养基，使用Western blot法检测Mel-18在细胞中的表达量。

1.3.3 TLR4表达 石蜡包裹子宫内膜癌组织标本，进行4μm连续切片，室内孵育20 min，PBS洗涤3次，加入二抗，使用免疫组化法检测TLR4水平。

1.3.4 HMBOX1表达 子宫内膜癌组织常规处理后，建立HMBOX1细胞系（北京生物有限公司），使用免疫组化法和流式细胞仪检测HMBOX1表达。

1.3.5 TLR4、Mel-18、HMBOX1表达阳性标准 选择5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，根据阳性细胞比例和着色情况积分［6］判断。1分为阳性细胞比例≤25%；2分为阳性细胞比例为26% ～50%；3分为阳性细胞比例＞50%。着色程度：无为0分；淡黄色为1分；棕黄色为2分；深棕色为3分。二者乘积≥2分为阳性（+），≤1分为阴性（-）。

1.4 统计学方法采用SPSS 19.00统计软件处理数据。TLR4、Mel-18、HMBOX1、分期和分级以例数和百分数（%）表示，采用χ2检验；采用Spearman相关性分析进行相关性检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫内膜癌患者TLR4表达不同组织学分级和病理分期的子宫内膜癌患者TLR4阳性和阴性率表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 子宫内膜癌患者TLR4表达比较［n（%）］

2.2 子宫内膜癌患者Mel-18表达不同组织学分级的子宫内膜癌患者Mel-18表达阳性和阴性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。不同病理分期的子宫内膜癌患者Mel-18阳性和阴性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 子宫内膜癌患者Mel-18表达比较［n（%）］

2.3 子宫内膜癌患者HMBOX1表达不同组织学分级的子宫内膜癌患者HMBOX1阳性和阴性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。不同病理学分期的子宫内膜癌患者HMBOX1阳性和阴性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 子宫内膜癌患者HMBOX1表达比较［n（%）］

2.4 TLR4、Mel-18、HMBOX1表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级的关系TLR4表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级无关（P＞0.05）。Mel-18表达与子宫内膜癌病理学分期关系密切（P＜0.05），与组织学分级无关（P＞0.05）。HMBOX1表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级关系密切（P＜0.05）。见表4。

表4 TLR4、Mel-18、HMBOX1表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级的关系

2.5 TLR4、Mel-18、HMBOX1阳性表达相关性分析TLR4、Mel-18、HMBOX1两两分析结果显示，TLR4、Mel-18、HMBOX1之间呈正相关（P＜0.05）。见表5。

表5 TLR4、Mel-18、HMBOX1阳性表达相关性分析

3 讨论

子宫内膜癌是临床常见恶性肿瘤，严重影响女性患者生命健康。子宫内膜癌的发生由多种因素共同导致［7-11］。HMBOX1基因通过同源分子共同来调节其他基因的转录，从而发挥其分子生物学效应，与器官发育关系密切。其作用机制是通过调控其他部位发育基因，包括细胞分裂和纺锤体等，并在恶性肿瘤中表达［12-13］。TLR是Ⅰ类跨膜受体，属病原相关分子模式受体，主要分布在中性粒细胞和单核吞噬细胞中。TLR4主要分布在各类免疫细胞，介导免疫和炎症反应，在多种恶性肿瘤中高表达［14］。Mel-18主要表达于各种来源的肿瘤细胞和转化细胞，其基因产物可能与细胞增殖有关，可能促进肿瘤细胞的增殖［15］。

本研究结果显示，不同组织学分级和病理分期的子宫内膜癌患者TLR4表达无差异。不同组织学分级的子宫内膜癌患者Mel-18表达无差异，但不同病理分期的子宫内膜癌患者Mel-18表达差异有统计学意义。不同组织学分级和病理分期的子宫内膜癌患者HMBOX1表达差异有统计学意义。Mel-18最初是由B16小鼠黑色素瘤细胞克隆而来，主要表达在各种来源肿瘤细胞和转化细胞中，参与细胞增殖和肿瘤发生及发展。随着对Mel-18研究的不断深入，发现Mel-18和Bmi-1基因在功能上存在重叠效应，均可发挥促癌、促炎作用［16-17］。在子宫内膜中单独抑制Mel-18表达可抑制肿瘤细胞增殖和克隆形成，进而影响病理分期。TLR4表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级无关，Mel-18表达与病理学分期关系密切。原因可能是Mel-18包含342个氨基酸，与Bmi-1基因产物结构高度相似，同源性高达93%，参与细胞增殖和肿瘤的发生发展，主要表达于肿瘤细胞和转化细胞中，能够促进肿瘤细胞的增殖。HMBOX1阳性表达与子宫内膜癌病理分期、组织学分级关系密切。TLR4主要介导内毒素的信号转导，外来刺激与靶细胞会促使其大量释放，进而引发炎症因子的“瀑链式”释放，进而加重病情。Mel-18、HMBOX1能促使子宫内膜癌细胞的生长，促使细胞浸润，故而与病理分期关系密切。TLR4可以介导病毒、炎症因子、肿瘤细胞的信号传导。本研究结果显示，TLR4、Mel-18、HMBOX1两两之间呈正相关。TLR4介导天然免疫，参与多种疾病发生和发展，其在部分恶性肿瘤组织及血清中高表达，能促使肿瘤细胞脱离本体，进行远处转移。Mel-18基因在恶性肿瘤组织中表达异常，其产物会促使癌细胞增殖能力增强。肿瘤细胞游走能力、增殖能力增强会促使病情进展，使得宫颈组织病变加重，HMBOX1表达随之升高。

综上所述，Mel-18、HMBOX1及TLR4表达协同影响子宫内膜癌病理分期、组织学分级，密切观察Mel-18、HMBOX1表达情况可预测病情。