超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉中的6种磺胺类药物

王红梅

摘要：本试验旨在建立同时快速检测鸡肉中6种磺胺类药物含量的超高效液相色谱串联质谱法。鸡肉样品用乙腈超声提取，经Thermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold （100×2.1mm，1.9μm）色谱柱分离，流动相A：乙腈;流动相B：0.1%甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱。电喷雾离子源正离子多反应监测模式定量分析。结果表明，6种磺胺类药物在浓度10～500 ng/mL范围内线性关系很好，相关系数R2≥0.9998。6种磺胺类药物在含量为8和60μg/kg的样品中，回收率为73%～88%，相对标准偏差RSD为0.9%～6%。综上，该方法高效、快速、高分辨，可以用于鸡肉样品中磺胺类药的定性、定量分析。

关键词：鸡肉;磺胺类药物;超高效液相色谱-串联质谱

磺胺类药物（ sulfonamides，SAs）是指一类具有对氨基苯磺酰胺结构化学药物的总称，用于预防和治疗全身性细菌感染性疾病，是当前畜禽生产中常用的抗菌、抗原虫药物，具有抗菌谱广、价格低、化学性质稳定、高效、低毒、使用方便等优点。其低剂量使用时，可提高饲料的利用率，促进畜禽的生长，但不正确的用药量、用药时间、方式以及用药部位会导致磺胺在畜禽体内及其排泄物的过量残留，导致磺胺类在人体中蓄积，因此产生过敏反应、泌尿系统损害、抑制白细胞生成等危害，重者导致急性血管性水肿、休克甚至死亡[1]。因此，我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》对SAs总量及单个SAs残留量做了明确规定，均不得超过100 μg/kg。

目前，测定动物源性食品中磺胺类药物的方法不止一种，但超高效液相色谱-串联质谱法背景干扰少，能高效、快速、高分辨的定性、定量检测和自动分析微量物质，为高灵敏测定磺胺类药物提供了支持。本文建立了比较优化的前处理方法，以提高超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中磺胺类药物的检测效率。

1 材料与方法

1.1 材料

肌肉样品购于本地超市。

1.2 仪器与试剂

高效液相三重四级杆串联质谱联用仪（美国赛默飞世尔公司）;粉质仪（中储粮成都储藏研究院）;低温离心机（德国Sigma离心机公司）;数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;分液漏斗振荡器（上海申贤恒温设备厂）;混匀器（德国Heidoph）;电子微量天平（德国赛多利斯股份公司）;电子天平（ 常熟市双杰测试仪器厂）;涡旋振荡器（美国安胜）;氮气发生器（山东滕州鲁南新科仪器有限公司）;Thermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold 色谱柱（美国赛默飞世尔公司）;Milli-QIQ 7000超纯水机（默克密理博实验室设备有限公司）。

6种磺胺类标准物质：磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺甲基嘧啶（SMR）、磺胺间二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺地索辛（SDT）（纯度均大于99.5%，北京振翔科技有限公司）;乙腈（色谱纯，德国Merck公司）;甲酸（色谱纯，上海安普实验科技有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1标准溶液的配制

分别准确称取适量的SMR、SMD、SDM、SMZ、SMM、SDT标准品各2 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成浓度为200 mg/L的标准储备液。

1.3.2样品前处理

称取均质后的鸡肉样品5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈溶液，涡旋震荡2 min，超声10 min，4，000 r/min离心5 min，将乙腈层移入100 mL分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入20 mL乙腈溶液，涡旋震荡2 min，超声10 min，4，000 r/min离心5 min，合并乙腈提取液。

提取液中加入20 mL乙腈饱和正己烷溶液，振摇5 min，将底层乙腈溶液移入100 mL鸡心瓶中，45℃水浴中氮气吹干，准确加入1mL乙腈-水溶液（1+1），超声溶解残渣，将溶解液转入10 mL离心管中，用5 mL乙腈饱和正己烷溶液洗涤旋蒸瓶，洗涤液并入离心管中，4，000 r/min冷冻离心5 min，取下层乙腈-水溶液经0.22μm滤膜过滤后，供高效液相三重四级杆串联质谱联用仪测定。

1.3.3仪器条件

（1）液相色谱条件

色谱柱为Thermo Fisher Scientific Hyperis11 Gold （100×2.1mm，1.9μm），流动相A：乙腈;流动相B：0.1%甲酸水溶液;柱温：20℃;进样量：2μL，流动相梯度洗脱条件见表1。

（2）质谱条件

电喷雾正离子电离源（H-ESI）;采集方式：多反应监测（MRM）;离子传输管温度：350℃;离子蒸发温度：300℃;碰撞气：1.5 mTorr;鞘气：35 Arb、辅助气：10 Arb、反吹气：0 Arb;离子喷雾电压：3500 V。多反应监测、碰撞能量及透镜电压见表2。

2 结果与分析

2.1 定性结果

6种磺胺类药物的提取离子色谱图间图1。在检测目标物中，SMR、SMD、SMZ、SMM极性较弱，SDM、SDT极性较强。如图1所示，在方法条件下7 min之内，6种磺胺类药物全部出峰，且峰形较好，易于定性、定量。

2.2 线性相关性与检出限

制备混合标准浓度系列，分别为10 、50 、100 、250和500 ng/mL（分别相当于被测组分的含量为2、10、20、50和100μg/kg）。将标准工作液按照2.3.3的方法进样测试。以进样浓度为横坐标，以峰面积的响应值为纵坐标绘制标准曲线，结果如表3所。6种磺胺类药物在浓度10～500 ng/mL范围内线性关系很好，相关系数R2≥0.9998。

2.3 回收率与精密度

取鸡肉样品，称完样品后分别加入40和300ng的6种磺胺类药物标准品，按照2.3.2与2.3.3的方法提取，測定，制备加标浓度为40 和300 ng/mL，即样品含量为8和60μg/kg的样品，进行回收率和精密度实验。每个含量包含6组水平重复，取平均值，计算回收率和精密度，结果见表4。6种磺胺类药物的回收率为73%～88%，相对标准偏差RSD为0.9%～6%。

3 结论

本研究建立了同时检测鸡肉中SMR、SMD、SDM、SMZ、SMM、SDT的超高效液相色谱-串联质谱法。该方法准确、快速、高效，可适用于大量样品的定性、定量分析，对于鸡肉中磺胺类药物的检测具有重要应用价值，为食品安全提供有效的技术支持。

参考文献：

[1] 赵笑天，潘亚利，傅英文，等.免疫亲和净化-超高效液相色谱串联质谱法同时测定猪肉和鸡蛋中的12种磺胺类药物[J].食品工业科技，2011，32（11）：426-430.