不同类型慢性乙型肝炎患者Th细胞相关因子及血清ADA表达的临床意义

孙娜

【摘要】 目的：探討不同类型慢性乙型肝炎患者Th细胞相关因子及血清腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）表达的临床意义。方法：选取荆州市第二人民医院2019年1月-2021年1月收治的90例乙型肝炎病毒感染相关疾病患者作为试验组，同期选择90例健康体检者作为对照组。比较两组的Th细胞相关因子、血清ADA表达及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（hepatitis B virus DNA，HBV-DNA）水平。随后将试验组按照疾病不同分为A组（24例，慢性乙型肝炎病毒携带者）、B组（46例，慢性乙型肝炎）、C组（20例，慢性乙型肝炎伴肝硬化），再将B组分为B1组（17例，B基因型）、B2组（29例，C基因型），比较组间的上述指标水平，并分析慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA与Th细胞相关因子、血清ADA表达的相关性。结果：试验组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表达水平均较对照组高，差异均有统计学意义（P<0.05）。A组、B组、C组IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表达水平相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。A组与B、C组的HBV-DNA水平相比，差异均有统计学意义（P<0.05）;但B组与C组的HBV-DNA水平相比，差异无统计学意义（P>0.05）。B1组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-10、ADA及HBV-DNA水平均较B2组低，差异均有统计学意义（P<0.05）;IL-4水平较B2组高，差异有统计学意义（P<0.05）。经直线相关性分析，慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA与IL-4呈负相关（P<0.05），与IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、ADA均呈正相关（P<0.05）。结论：乙型肝炎病毒感染者存在Th细胞相关因子异常情况;其血清ADA表达水平越高，提示患者的病情越重，临床需做好相关防治措施。另外，上述指标有利于判断慢性乙型肝炎患者基因型的不同。

【关键词】 慢性乙型肝炎 腺苷脱氨酶 Th细胞相关因子

Clinical Significance of Th Cell Related Factors and Serum ADA Expression in Patients with Different Types of Chronic Hepatitis B/SUN Na. //Medical Innovation of China， 2022， 19（08）： 046-050

[Abstract] Objective： To explore the clinical significance of Th cell-related factors and serum adenosine deaminase （ADA） expression in patients with different types of chronic hepatitis B. Method： A total of 90 patients with hepatitis B virus infection-related diseases admitted in the Second Hospital of Jingzhou from January 2019 to January 2021 were selected as the experimental group， and 90 healthy subjects were selected as the control group during the same period. Th cell related factors， serum ADA expression and hepatitis B virus DNA （HBV-DNA） levels were compared between the two groups. The experimental group was divided into 3 groups according to different diseases： group A （24 cases， chronic hepatitis B virus carriers）， group B （46 cases， chronic hepatitis B）， and group C （20 cases， chronic hepatitis B with cirrhosis）， group B was divided into group B1 （17 cases， B genotype） and group B2 （29 cases， C genotype）， the levels of the above indicators between the groups were compared， the correlation between HBV-DNA and Th cell related factors， serum ADA expression in patients with chronic hepatitis B were analyzed. Result： The levels of IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， IL-4， IL-10 and ADA in the experimental group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression levels of IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， IL-4， IL-10 and ADA in group A， B and C were significantly different （P<0.05）. HBV-DNA level in group A was significantly different from those in group B and C （P<0.05）; however， there was no significant difference in HBV-DNA level between group B and group C （P>0.05）. IFN-γ， Th1/Th2， IL-2，

IL-10， ADA expression and HBV-DNA levels in B1 group were lower than those of B2 group， the differences were statistically significant （P<0.05）; IL-4 level was higher than that of B2 group， the difference was statistically significant （P<0.05）. After linear correlation analysis， HBV-DNA and IL-4 of patients with chronic hepatitis B was negatively correlated （P<0.05）， while HBV-DNA were positively correlated with IFN-γ， Th1/Th2， IL-2， and ADA （P<0.05）. Conclusion： Patients with hepatitis B virus infection have abnormalities in Th cell-related factors; the higher the level of serum ADA expression， the more severe the patient’s condition， and relevant prevention and treatment measures need to be taken clinically. In addition， the above indicators are helpful for judging the different genotypes of patients with chronic hepatitis B.

[Key words] Chronic hepatitis B ADA Th cell related factors

First-author’s address： The Second Hospital of Jingzhou， Hubei Province， Jingzhou 434000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.08.011

乙型肝炎具有反復发作、病情复杂、治愈难度大等特点，在国内其病毒总感染率约达60%[1]，长期感染下会反复作用患者的肝脏病灶部位，导致其肝细胞凋亡、肝脏持续纤维化增生，从而引起肝硬化，目前是一种严重威胁人类健康的传染性疾病，引起临床广泛关注。乙型肝炎病毒的发病机制可从机体、病毒两方面进行研究，前者主要探索机体的病毒清除机制，后者则包括基因表达及相关影响因素，文献[2]研究认为，探讨不同基因型乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（hepatitis B virus DNA，HBV-DNA）能够深入了解乙肝的发病机制，进而确保临床治疗的精准性。近年来基础免疫性研究的热点之一即为Th细胞的功能性分化，文献[3]研究显示，Th1/Th2平衡失调与病毒、细菌等感染的发生存在明显联系。另外，文献[4]研究表示血清腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）是一种可反映肝损伤的肝细胞胞浆酶，与机体细胞免疫活性存在相关性，但现阶段有关于上述两种指标对于不同基因型慢性乙型肝炎患者的临床意义研究较少，故笔者做如下阐述。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取荆州市第二人民医院2019年1月-2021年1月收治的90例乙型肝炎病毒感染相关疾病患者作为试验组，同期选择90例健康体检者作为对照组。试验组纳入标准：年龄>18岁;临床资料完整;无甲亢类合并症或糖尿病者。排除标准：血清免疫学证实存在TTV病毒感染、巨细胞病毒及EB病毒者;合并酒精性肝炎、药物性肝损害者;合并酒精性肝炎、药物性肝损害者;严重免疫功能紊乱性疾病者。对照组纳入标准：年龄>18岁;1年内未进行过抗病毒治疗或应用过免疫调节剂。排除标准：依从性差。研究对象均已完成知情同意书的签署流程，且本研究由伦理委员会审核通过。

1.2 方法 收集180例纳入对象性别、年龄、饮酒史、吸烟史等基线资料。ADA检测：于研究对象晨起空腹时取3 mL静脉血，做好血清分离、冰箱冷存等工作，采用全自动生化分析仪（生产厂家：克勒格瓦尼分析仪器有限公司，型号：OLYMPUS AU640）及相应试剂盒（由上海研生生化试剂有限公司提供）完成检测。HBV-DNA检测：于无菌离心管注入2 mL空腹血清标本，离心步骤完成，随后在另一无菌离心管中转入200 μL血清样本，期间需融入等量DNA浓缩液行有效混合，再做好离心、静置分层处理，留取沉淀后再纳入提取液，得到混合液样本后加入反应板（聚合酶链式反应）中，采用基因扩增仪（生产厂家：Applied Biosystem公司，型号：AB7500）及相应试剂（由广州达健生物科技有限公司提供）完成检测。Th细胞相关因子检测：空腹静脉血采集、离心及血清分离等步骤完成，由第一军医大学基础部生物医学诊断研究中心提供HBV基因分型微板，并采用购自上海贝西科技发展有限公司提供的定量酶免疫试剂盒完成γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）水平的检测。

1.3 观察指标 比较试验组和对照组的Th细胞相关因子、血清ADA表达及HBV-DNA水平。随后按照疾病不同将试验组分组：24例慢性乙型肝炎病毒携带者设为A组，46例慢性乙型肝炎（包括17例B基因型与29例C基因型）设为B组，20例慢性乙型肝炎伴肝硬化设为C组，再将B组分为B1组（B基因型）、B2组（C基因型），比较组间的上述指标水平，并分析慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA与Th细胞相关因子、血清ADA表达的相关性。

1.4 统计学处理 由SPSS 20.0软件处理，计量资料采用t检验，重复测量资料以F检验，组间两两对比采用SNK检验，用（x±s）表现;计数资料采用字2检验，以率（%）表现;直线相关分析法（Pearson）用于变量间相关性的分析。α=0.05为检验水准，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 两组Th细胞相关因子、血清ADA表达比较 试验组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表达水平均较对照组高，差异均有统计学意义（P<0.05），見表2。

2.3 试验组间Th细胞相关因子、血清ADA表达及HBV-DNA比较 三组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4、IL-10、ADA表达水平相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。试验组的HBV-DAN为（4.33±0.45）log10 IU/mL。A组与B、C组的HBV-DNA水平相比，差异均有统计学意义（P<0.05）;但B与C组的HBV-DNA水平相比，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

2.4 B组间Th细胞相关因子、血清ADA表达及HBV-DNA比较 B1组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-10、ADA表达及HBV-DNA水平均较B2组低，差异均有统计学意义（P<0.05）;其IL-4水平较B2组高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

2.5 相关性分析 经直线相关性分析，慢性乙型肝炎患者的HBV-DNA与IL-4呈负相关（P<0.05），与IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、ADA均呈正相关（P<0.05），与IL-10无相关性（P>0.05），见表5。

3 讨论

乙型肝炎易复发，且病程长，目前全球约有4亿乙型肝炎病毒感染者，其中亚太地区占75%[5]，临床通常认为该病的主要发病机制及病理损伤为免疫系统功能紊乱。Penna等[6]学者发现Th1细胞应答在急性自限性乙型肝炎患者中占据主导地位，其诱导分化可反映肝组织病理损伤与病毒清除情况;而Th2细胞的诱导分化则可对Th1细胞分化进行一定抑制，避免其应答过度所致的病理损伤，且能够促使乙型肝炎病毒感染的慢性化。虽文献[7]报道Th细胞分化在慢性乙肝患者体内的作用，但针对该病不同基因型患者免疫系统功能状态评价的相关调查较少。除此之外，ADA也与人体细胞免疫系统存在关联，ADA是一种可反映患者肝纤维化、肝细胞损害的核酸代谢酶[8]，肝细胞内的ADA可在肝细胞受损时迅速进入血液，进而造成ADA（血清中）活性上升，但鲜有研究分析该指标在慢性乙型肝炎不同基因型患者中的作用。

临床上，抗原递呈细胞（特异性）递呈抗原后会对T细胞前体进行相应诱导[9-10]，逐渐分化为两种亚型，包括Th0A、Th0B两种，前者可分泌IL-2、IL-4，后者则能够分泌IFN-γ、IL-2及IL-4[11-12]。由此也看出IL-4在Th0细胞发展中起到关键调控作用。而IFN-γ、IL-2等指标在控制Th细胞亚群平衡过程中起到辅助效果[13]，Th1细胞可通过上述指标水平的上升（旁分泌及自分泌）而增殖[14]，导致Th0细胞逐渐向Th1细胞的方向分化。另外，维持正常免疫功能的重要因素之一即为Th1/Th2应答间的平衡[15]，Th1细胞的诱导分化与肝组织病理损伤、病毒清除均有关;而其细胞因子的产生也会相应增强机体的细胞免疫功能[16-17]，提高巨噬细胞、自然杀伤细胞及细胞毒性T淋巴细胞的活性，会导致肝组织的炎症损伤更为严重[18]。本次研究中，A、B、C三组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4水平相比，差异均有统计学意义（P<0.05），提示上述指标可有效区分不同的乙型肝炎病毒感染相关疾病;而在B1组、B2组的IFN-γ、Th1/Th2、IL-2、IL-4水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05），则提示上述指标还能够区别不同基因型的慢性乙型肝炎患者，也可说明C型患者体内的Th1细胞优势应答，其肝脏损伤更难控制，整体预后状况不佳。

文献[19]研究发现ADA不但可在肝胆疾病鉴别诊断中发挥作用，还能够作用于核糖核酸1。核糖核酸1可于肝细胞癌细胞系中对乙型肝炎病毒的基因复制行有效刺激，通过刺激核糖核酸结合区与编辑区的方式可促进HBV-DNA的复制[20];另外也可通过提高miRNA-122（肝细胞）水平的方式对HBV病毒感染产生一定预防作用[21]。本次研究也发现ADA与HBV-DNA呈正相关，基于此可知其能够用于反映慢性乙型肝炎的病情状况。

综上所述，慢性乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎、慢性乙型肝炎伴肝硬化三种疾病患者可采用Th细胞相关因子及血清ADA表达进行区分，依靠上述指标还可分析乙型肝炎病毒的发病机制及病情状况，了解其基因分型，尽早做好相关防治工作，值得临床借鉴。本次研究仍存在纳入病例少、随访时间短等不足之处，还需进一步相关研究，尽可能保障患者的临床安全。

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（收稿日期：2021-09-07） （本文编辑：张爽）