美伐他汀结晶纯化工艺研究

吴勇良，王平

（1.浙江海正药业股份有限公司，浙江台州 318000；2.雅塞利（台州）制药有限公司，浙江台州 318000）

美伐他汀（mervastatin）是他汀类药物的一种，又名康百汀（compactin），通常作为普伐他汀（pravastatin）药物生产的前体物质。普伐他汀为3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase，HMG-CoA还原酶）的竞争性抑制剂，对降低体内胆固醇有积极作用。美伐他汀的质量直接影响转化菌的转化效率和普伐他汀的纯度，同时也是普伐他汀生产成本的主要来源。因此，制备低成本、高质量的美伐他汀对提高普伐他汀的收率和纯度、降低生产成本具有重要的意义。

美伐他汀不溶于水，但在发酵液中以美伐他汀酸的形式存在，本文主要研究如何从发酵液中简单易行地提取出高纯度美伐他汀。

1 材料与方法

1.1 材料

美伐他汀粗品（批号130103），纯度80%～90%，海正药业原料药生产车间。美伐他汀干菌丝（批号130105），海正药业自制。

1.2 仪器与试剂

81-2型恒温磁力搅拌器，上海司乐仪器有限公司；XPR205电子天平梅特勒-托利多称量设备系统有限公司；PEF-6020型真空干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；W501B恒温水浴锅，上海申胜生物技术有限公司；SZB水环式真空泵，浙江真空泵有限公司；Buchi Rotavapov R-200旋转蒸发仪，日本岛津；C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、LC-20AT型高效液相色谱仪，日本岛津。

异丙醇，色谱纯，苏州骏赫化工有限公司；无水乙醇，色谱纯，安徽安特食品股份有限公司；丙酮，色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；乙酸乙酯，色谱纯，杭州青辰化学试剂厂。

1.3 试验方法

1.3.1 液相检测方法

流动相∶乙腈∶水=80∶20（体积比）；流速：1.0 mL/min；检测波长：238 nm；进样量：10 μL；采集时间：主峰出峰时间的3倍。

1.3.2 溶剂对母液中脱水美伐他汀含量的影响

以美伐他汀粗品为原料，选用丙酮、乙酸乙酯、乙醇和异丙醇分别进行回流溶解，回流温度50～55 ℃，自然降温结晶。过滤后，结晶产物于55～62 ℃干燥，母液于35～45 ℃下浓缩干。分别称重，取样进行效价检测和EP检测。

1.3.3 溶剂对母液中双氢美伐他汀含量的影响

按照1.3.2中的溶解、过滤和干燥条件进行母液浓缩干燥，比较母液中双氢美伐他汀含量。

1.3.4 温度对蛋白去除率的影响

取美伐他汀干菌丝（130105）200 g，加入1 L乙酸乙酯，分别在 0 ℃、5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃和 25 ℃浸泡30 min，絮状物即杂蛋白，经滤纸过滤后干燥称重。

2 结果与分析

2.1 溶剂对母液中脱水美伐他汀含量的影响

溶剂对母液中脱水美伐他汀含量的影响如表1所示。以相同质量美伐他汀粗品为原料，采用4种溶剂结晶。在去除脱水美伐杂质方面，母液相中含量最多的为乙酸乙酯结晶母液，脱水美伐杂质去除效果顺序为乙酸乙酯＞丙酮＞乙醇＞异丙醇。

表1 溶剂对母液中脱水美伐他汀含量的影响

2.2 溶剂对母液中双氢美伐他汀含量的影响

溶剂对母液中双氢美伐他汀含量的影响如表2所示。用上述4种溶剂结晶，以相同质量的美伐他汀粗品为原料进行结晶，在母液相中双氢美伐他汀含量最高的是异丙醇，因此在去除双氢美伐杂质方面，溶剂优先顺序为异丙醇＞乙醇＞乙酸乙酯＞丙酮。

表2 溶剂对母液中双氢美伐他汀含量的影响

2.3 温度对蛋白去除率的影响

如表3所示，浸泡液在时间相同的情况下至0 ℃时，蛋白沉淀数量最多，同体积的浸泡液在0 ℃和5 ℃时杂蛋白滤除重量基本一致，且澄清度在5 ℃和0 ℃时已达到质量标准，考虑到动力成本，选择5 ℃浸泡去除蛋白比较经济合算。

表3 过滤相关数据

3 结论

通过实验，发现乙酸乙酯对脱水美伐他汀的去除效果较好，异丙醇对双氢美伐他汀的去除效果较好，综合考虑应选择异丙醇溶剂作为结晶溶剂；在5 ℃进行蛋白除杂效果较好，可满足生产和节能需求。