羟苯磺酸钙药物浓度对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰试验分析

钱 芳,陈 玉

1.江苏省宿迁市泗洪县人民医院检验科，江苏宿迁 223900；2.江苏省宿迁市泗洪县中医院检验科，江苏宿迁 223900

血清肌酐是评价肾小球滤过功能的有效指标，能够监测肾功能，可作为临床肾衰竭患者的主要透析指标，因此，肌酐测定水平的可靠性对临床诊断和治疗有非常重要的意义。肌酐检测的方法有多种，主要有苦味酸法(Jaffe法)、酶法和高效液相色谱法。Jaffe法主要缺点是特异度不高，存在“假肌酐”的干扰且试剂的稳定性差，定标周期短；酶法的特异度比较高，试剂的稳定性好；高效液相色谱法特异度高、准确性好，但不适合作为常规方法，一般用作参考方法[1]。目前，多家医院检测肌酐一般采用酶法，其试剂主要成分是肌氨酸氧化酶，但近年来有报道显示羟苯磺酸钙对此法有干扰作用[2]。作者于2021年3月20日遇见1例由于口服羟苯磺酸钙导致血清肌酐检测结果假性降低案例，为进一步研究羟苯磺酸钙对此方法学的干扰程度，本研究收集10份不同肌酐水平的新鲜血清(10例患者均未服用羟苯磺酸钙)标本，并进行了相关性研究和分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

1.1.1标本来源 收集10份不同肌酐水平的新鲜血清标本，无溶血、无黄疸、无脂血。

1.1.2干扰药物 羟苯磺酸钙，每粒0.5 g，由上海朝晖药业有限公司生产。

1.2仪器与试剂 仪器为日立7600全自动生化分析仪，肌氨酸氧化酶肌酐试剂为浙江金华市生物科技有限公司产品，校准品为配套校准品，质控品为贝克曼公司质控品。

1.3方法

1.3.1羟苯磺酸钙配制 取0.5 g羟苯磺酸钙溶于500 mL去离子水中，配成浓度为1 000 mg/L备用，再按比例稀释成800、600、400、200、100 mg/L。

1.3.2含干扰物的标本制备 各种浓度的羟苯磺酸钙溶液与被测肌酐血清分别按1∶19稀释(干扰溶液10 μL+血清190 μL)，配制一系列含相应浓度的羟苯磺酸钙实验血清 (50、40、30、20、10、5 mg/L)。

1.3.3参照标准 相对偏倚=(实验样品均值-对照样品均值)/对照样品均值×100%，根据文献[3]生物变异和参考美国 CLIA′88 能力比对检验的分析质量要求肌酐的可接受范围为15%[2]，按照1/2偏差7.5%作为干扰试验的可接受标准，>7.5%为有干扰。

1.3.4检测过程 试剂用配套校准品校准，当日质控均在控，未加干扰物的原血清为对照样品，加一系列干扰物的为实验样品，上机检测，每份标本均测量3次。

1.4统计学处理 采用Excel 2010绘制表格，采用SPSS23.0统计软件进行数据分析处理。 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1相对偏倚 本研究发现，实验样品加入羟苯磺酸钙浓度越大，其肌酐水平与对照样品均值相差越大，干扰就越严重，相对偏倚也越大，并呈负向干扰，见表1。

表1 羟苯磺酸钙浓度对肌酐水平的干扰(相对偏倚)

2.2相关性分析 10份不同肌酐水平血清标本经Pearson相关分析，其r值均为负值，并接近-1，随着干扰物(羟苯磺酸钙溶液)浓度不断增大，干扰越严重，且呈负向干扰(-1

表2 加入不同浓度羟苯磺酸钙溶液后相关性分析

3 讨 论

目前，我国检测肌酐的主要方法有Jaffe法和酶法，因Jaffe法的特异度较差，血液中的蛋白质、乙酰乙酸、丙酮、葡萄糖等物质可与苦味酸发生反应，使结果假性偏高，并且对环境影响较大，所以大多数都选择酶法中的肌氨酸氧化酶法，其具有特异度高和很强的抗干扰能力的特点[4]，血清肌酐的检测结果会受很多因素，特别是药物的干扰，且不同药物对不同检测方法的干扰方向也不同[5]。目前，泗洪县人民医院仍采用Jaffe法，作者曾遇见1例由于口服羟苯磺酸钙导致血清肌酐检测结果假性降低案例。2021年3月20日，作者接到1例患者反馈，3 d前在外地一家医院检查肾功能显示肌酐正常，而到泗洪县人民医院检查高于正常值，为265 μmol/L，尿素氮、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白结果也偏高，但是肝功能正常，血糖偏高。当即查看标本无异常，复检，肌酐结果为262 μmol/L。询问患者病史，得知该患者为慢性肾病，于1周前开始口服羟苯磺酸钙，考虑是否为羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐产生干扰。因为不知道患者之前就诊医院肌酐检测方法，无从考证。得知泗洪县中医院检验科用的酶法，当即将此患者标本转运过去，测得肌酐水平为103 μmol/L。关于羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰，有文献报道，羟苯磺酸钙具有调节微血管的生理功能，是临床上治疗微血管循环障碍的常见药物[6]，对糖尿病引起的视网膜病变、微循环障碍引起的心、脑、肾疾病等均有治疗作用[7-8]，因此，其广泛用于糖尿病微血管病变、糖尿病肾病、慢性肾功能不全等的治疗。健康人口服500 mg羟苯磺酸钙后，约4 h达到血药浓度峰值(13 mg/L),消除半衰期约为5 h，肾功能正常患者24 h血药浓度均在6 μg/mL以上，所以服药期间采血对肌氨酸氧化酶法均会有干扰。其干扰机制可能与羟苯磺酸钙的还原性有关，其消耗了肌氨酸氧化酶反应中参与Tinder反应的H2O2，抑制了红色醌亚胺化合物的氧化显色[9]，造成假性降低。为此，原中华人民共和国卫生部临床检验中心还做了此方面的调研，对羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰引起了重视，其浓度越大干扰越严重[10]，本研究也得到了证实。

当临床上发生肌酐水平与临床病情不符时，要考虑药物的干扰，对于肾功能不全患者用药后结果出现差异，若与其他同期肾功能指标不符时，审核报告时要谨慎，与临床做好沟通，有条件时改用其他方法复核[11]。