宫颈癌患者放疗敏感性与癌组织中HPV16-E6、p53 mRNA表达的关系分析

乔炳礼 兑伟华 王钖 唐亚辉

作者单位：1 郑州市第三人民医院肿瘤科，河南 郑州 450000

2 郑州黄河科技学院，河南 郑州 450000

宫颈癌发病率在女性恶性肿瘤中排第二位，而在某些发展中国家其死亡率位于首位[1]。近些年的研究显示[2]，我国宫颈癌发病率逐年增高，其原因可能与人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染率增高及国家对宫颈癌筛查工作的大力投入，导致部分隐形宫颈癌患者得以确诊等有关。放疗是宫颈癌主要治疗方法之一，但不同个体对放疗敏感度不同[3]。因此，评估患者个体的放疗敏感度，并以此设计个性化的放疗方案对提高放疗疗效具有重要意义。HPV感染是宫颈癌发生、发展的重要危险因素[4]，HPV 16-E6、p53 mRNA 则是一组与宫颈癌发生、发展密切相关的癌/抑癌基因，但关于该组基因对患者化疗疗效的影响，临床研究较少。本研究探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒（HPV）16-E6、p53 mRNA 表达及与放疗敏感性的关系，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2018年1月～2020年1月在我院治疗的宫颈癌患者76 例，年龄45～62 岁。纳入标准：①均经病理学确诊为宫颈鳞癌；②符合国际妇产科联盟（FIGO）分期中的Ⅰ～Ⅱ期；③患者及家属知情同意。排除标准：①非初治患者；②合并有肝肾功能障碍、急慢性感染、血液系统疾病等其他严重疾病者。

1.2 放疗方法根治性放射治疗方案：照射射线为直线加速器6/10 MV X 射线，选用X 线模拟定位，给予患者进行体外三维适形照射，每次剂量为2Gy，每周5 次，总剂量为30Gy。同时给予患者后装腔内照射，每次剂量为6Gy，每周1 次，总剂量为30～42Gy。后装放疗时间需与三维适形放疗错开，不可于同一天进行[5]。

1.3 检测方法根据患者放疗疗效分为放疗敏感及放疗抗拒两组，并于放疗前后活检取样，选用Trizol法提取RNA，取1μg RNA 进行反转录反应，将获取的DNA 作为RT-PCR 样本。PubMed.SNP 数据库查询HPV16-E6、p53 基因序列，引物由上海生工提供，PCR 反应体系为：2μl 样本，1μl 上、下游引物，10μl PCR-mix，8μl 灭菌双蒸水。反应条件设置如下：95 ℃，8min；94 ℃，40s；63 ℃，38s；72 ℃，40s，共32 个循环，选用苏州雅睿生物技术有限公司生产的MA-6000 实时荧光定量PCR 仪读取结果。

1.4 疗效标准完全缓解（CR）：病灶消失，至少维持4 周及以上；部分缓解（PR）：病灶体积较治疗前缩小＞50%，至少维持4 周及以上；疾病稳定（SD）：病灶体积较治疗前缩小≤50%，或增加＜25%；疾病进展（PD）：病灶体积较治疗前≥25%或出现新病灶。其中放疗敏感为CR+PR，放疗抗拒为SD+PD。

1.5 统计学方法采用SPSS 22.0 软件，计量资料采用±s表示，两组间比较使用t检验，计数资料比较使用χ2检验，采用Pearson 进行相关性分析。检验水准：双侧α=0.05。

2 结果

2.1 放疗疗效76 例患者中，放疗疗效达到CR 10例，PR 45 例，SD 14 例，PD 7 例，放疗敏感率为72.37%；放疗敏感和抗拒者年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 放疗敏感和抗拒者一般资料比较

2.2 放疗敏感和抗拒者放疗前后HPV16-E6、p53 mRNA 表达比较放疗敏感和抗拒者放疗后HPV16-E6 mRNA 相对表达量较放疗前降低（P＜0.05），而p53 mRNA 相对表达量较放疗前升高（P＜0.05）；放疗敏感者放疗后HPV16-E6 mRNA相对表达量明显低于放疗抗拒者（P＜0.05），而p53 mRNA 相对表达量明显高于放疗抗拒者（P＜0.05）。见表2。

表2 放疗敏感和抗拒者放疗前后HPV16-E6、p53 mRNA表达比较

2.3 相关性分析将患者HPV16-E6 与p53 mRNA相对表达量进行相关性分析，结果显示：放疗前、放疗后HPV16-E6 与p53 mRNA 相对表达量呈负相关（r=-0.530 和-0.754，P＜0.05）。见图1。

3 讨论

放疗是一种借助放射能量破坏细胞DNA 双链，进而杀伤癌细胞的治疗技术[5]。本研究76 例宫颈癌患者中，放疗疗效达到完全缓解（CR）10 例，部分缓解（PR）45 例，疾病稳定（SD）14 例，疾病进展（PD）7 例，放疗敏感率为72.37%，与同类研究[6]结果相似，提示放疗是一种有效的宫颈癌治疗方法。宫颈癌患者放疗敏感性受病理分型、病灶体积及位置、放疗方案以及HPV 病毒水平等因素影响，为探讨HPV 病毒相关mRNA 对宫颈癌放疗敏感性的影响，我们进行了本次研究。

HPV 属于双链嗜上皮性DNA 病毒，可通过整合宿主基因并破坏E2 病毒基因及对应染色体位点，进而导致细胞增殖失控，最终发生恶性病变[7]。HPV 具有多种分型，其中HPV16、HPV18 等高危型是宫颈癌的独立危险因素[8]。HPV16、HPV18 具有抑制抑癌基因表达、促进增殖基因表达、增强细胞恶性生物学行为等功能[9]。临床研究显示[10]，HPV16-E6 是宫颈癌发生、发展的重要介质，E6 转化基因及其功能是HPV16 诱导宫颈癌的关键。E6蛋白具有促端粒酶逆转录酶转录能力，并以此维护、修复染色体端粒末端重复DNA，进而促进细胞的不断增殖[11]。HPV感染所引发的鳞状上皮病变组织内可见明显E6 蛋白高表达情况，而应用RNA干扰技术抑制沉默HPV16-E6 后，组织样本内的HPV16 DNA 表达水平显著下降，其复制功能也随之降低，癌细胞生长、增殖速度下降[12]。有研究发现[13]，HPV16-E6 蛋白高表达，而p53 蛋白低表达是口腔癌进展的重要原因。p53 是抑癌基因的一种，该基因的突变是多种恶性肿瘤疾病的危险因素。HPV16-E6 蛋白与野生p53 蛋白结合后，p53 蛋白结构及其功能将随之改变，p53 蛋白对细胞G1 期的阻滞功能将大幅衰退，细胞将快速进入S 期，进而出现增殖失控情况，最终参与肿瘤发生、发展[14]。本研究中，放疗敏感者放疗后HPV16-E6 mRNA 相对表达量明显低于放疗抗拒者，而p53 mRNA 相对表达量明显高于放疗抗拒者，表明HPV16-E6、p53 mRNA 异常表达与宫颈癌患者放疗敏感度密切相关，分析其原因可能为：不同细胞具有的DNA 修复能力不同，细胞放疗后的DNA 修复能力直接影响着患者的放疗疗效[15]。野生型p53 蛋白具有促细胞凋亡能力，而一旦p53 mRNA 突变，其蛋白的促细胞凋亡功能将减弱，细胞的DNA 修复能力将异常化，放疗敏感性也随之降低。HPV16-E6 mRNA 可与突变p53 基因相互结合，并在突变p53 基因生成对应功能前将其灭活，避免突变p53 基因诱导细胞恶性病变。有研究发现[16]，p53 基因高表达可增强宫颈癌患者放疗敏感性，这与本研究结果相似。本研究还发现，放疗前、放疗后HPV16-E6 与p53 mRNA 相对表达量呈负相关，分析其原因可能为：HPV16-E6蛋白可通过结合p53 蛋白来影响其功能，导致p53蛋白失去对细胞周期的调控能力，促使细胞异常复制，进而导致细胞恶性增殖能力增强，并降低细胞对放疗的敏感性。

本研究发现，HPV16-E6、p53 mRNA 表达不仅与宫颈癌发生、发展有关，还与患者放疗敏感性有关。临床可在放疗之前对患者HPV16-E6、p53 mRNA 表达水平进行检查，并根据患者HPV16-E6、p53 mRNA 表达水平选择合理的放疗方案及放疗剂量，确保放疗的有效性。此外，临床还可靶向干预HPV16-E6、p53 基因的表达，以此增强患者的放疗敏感性。受限于基础条件，本研究还存在样本量较小等不足，有待后期进行大数据分析。

综上所述，宫颈癌组织中HPV16-E6、p53 mRNA表达与患者放疗敏感有关，值得进一步研究。