APOE、Resistin、miR-24在老年动脉粥样硬化性脑梗死患者中的表达及对预后的预测价值

陈贵发 张翠宏

作者单位：惠州市第三人民医院老年病科和全科医学科，广东 惠州 516001

脑梗死是一种临床常见的致残性脑血管疾病，患者通常起病较急、严重程度高、治疗难度大[1，2]。有研究显示，高龄、高血压、高血脂、肥胖等均为脑梗死的危险因素，颅内外动脉粥样硬化为脑梗死主要危险因素[3，4]。作为脑梗死的主要病理基础，动脉粥样硬化的标志及进展表现分别为斑块形成、血管狭窄[5]。动脉粥样硬化性脑梗死（ACI）患者多表现为偏瘫、语言障碍等，严重威胁患者身体健康甚至生命安全，因此对ACI 发病机制进行研究，探寻新的诊疗靶点对ACI 早期诊断、临床治疗及预后改善具有重要意义[6，7]。本研究检测老年ACI 患者载脂蛋白E（APOE）、抵抗素（Resistin）、微小RNA-24（miR-24）表达水平，旨在探讨三者在老年ACI 患者中的表达及与病情严重程度的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2020年8月～2021年8月于我院进行治疗的老年ACI 患者80 例为ACI 组，选取同期于我院进行诊治的无症状性颈动脉狭窄（ACS）患者80 例为ACS 组，另选取同期于我院进行健康体检的志愿者80 例为对照组，3 组年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史、高血压、冠心病史比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与对照组比较，ACS 组、ACI组TC、TG 水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）；ACI 组患者TC、TG 水平高于ACS 组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 研究对象一般资料比较

纳入标准：ACI 组患者均符合中华医学会对ACI 的诊断标准[8]，并经我院影像学检查确诊；ACS组患者经我院颈动脉影像学检查确诊为ACS；对照组研究对象无脑血管病史；所有研究对象病历资料齐全，年龄＞60 岁。本研究所有患者均知情同意。

排除标准：①病历资料不全者；②具有脑血管手术史者；③外伤导致的脑梗死者；④免疫性疾病者；⑤接受过相关治疗者；⑥头颈部恶性肿瘤者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 于就诊当日取3 组研究对象清晨空腹静脉血5ml，离心处理15min（3 000r/min）后，-30℃保存待检。

1.2.2 免疫透射比浊法检测APOE 水平 制备3 个洁净试管并依次标记为对照A 管、对照B 管、检测管，3 管中均加入350μl 缓冲液，并于对照A 管中加入蒸馏水20μl，对照B 管中加入标准液20μl，检测管中加入稀释后的血清20μl，3 管摇晃均匀后使用37℃保温箱孵育15min，比色后340、700nm 波长处测定免疫复合物浊度，根据吸光度计算APOE水平。

1.2.3 酶标分析仪检测Resistin 水平 酶标板中添加1∶10 稀释的血清标本或100μl 标准液，之后将酶标板置于37℃保温箱中孵育，30min 后取出洗板，各孔添加50μl 蒸馏水及一抗并摇晃均匀，再次使用37℃保温箱孵育0.5h 后洗板，然后添加100μl酶标抗体后静置10min，洗板后添加100μl 底物液，并置于避光环境中静置20min，添加100μl 终止液混匀，测定待测酶标板450nm 处吸光值，检测Resistin 水平。

1.2.4 RT-PCR 法检测miR-24 表达 Trizol 法提取总RNA 后检测RNA 纯度及浓度，逆转录处理（42℃环境下孵育0.5h，80℃ 5s，置于冰上冷却）后进行扩增处理，2-△△Ct方法计算miR-24 表达，内参U6。miR-24 引物序列为上游引物：5'-ATGAACTTTCTG CTGTCTTGG-3'，下游引物：5'-TCACCGCCTCGGCT TGTCACA-3'。

1.2.5 斑块、血管狭窄程度评价 对患者进行颈动脉彩超检查，评价患者有无斑块及斑块性质。血管狭窄程度评价标准：重度狭窄：70%≤血管狭窄率＜100%；中度狭窄：50%≤血管狭窄率＜70%；轻度狭窄：血管狭窄率＜50%。

1.3 统计学方法使用SPSS 26.0 软件对数据进行分析，计量资料以±s描述，多组对比行F检验，组间对比行独立样本t检验。相关性研究采用Pearson 相关性分析。预测价值分析采用受试者工作特征（ROC）曲线，获取曲线下面积、置信区间、灵敏度、特异度。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组APOE、Resistin、miR-24 水平对比与对照组比较，ACS 组、ACI 组APOE、Resistin、miR-24表达水平较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；ACI组患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平高于ACS组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 3 组APOE、Resistin、miR-24 表达水平对比（±s）

表2 3 组APOE、Resistin、miR-24 表达水平对比（±s）

组别例数APOE（mg/dl） Resistin（μg/ml） miR-24对照组803.65±0.5715.69±2.371.15±0.13 ACS 组804.57±0.6623.77±2.681.37±0.17 ACI 组806.32±0.8133.19±3.121.92±0.25 F 28.37544.25628.369 P 0.0010.0010.001

2.3 APOE、Resistin、miR-24 表达水平与ACI 患者临床特征关系研究与无斑块患者比较，有斑块患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与稳定性斑块、轻中度血管狭窄、预后良好患者比较，不稳定性斑块、重度血管狭窄、预后不良患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 APOE、Resistin、miR-24 表达水平与ACI 患者临床特征关系（±s）

表3 APOE、Resistin、miR-24 表达水平与ACI 患者临床特征关系（±s）

临床特征例数APOE（mg/dl）Resistin（μg/ml）miR-24斑块无295.59±0.72 28.63±2.921.74±0.21有517.12±0.93 37.52±3.352.15±0.33 t 7.64511.9406.024 P 0.0010.0010.001斑块稳定性稳定236.79±0.87 35.27±3.121.96±0.28不稳定287.53±0.98 39.66±3.572.34±0.37 t 2.8214.6224.060 P 0.0070.0010.001血管狭窄程度轻、中度565.53±0.69 28.03±2.851.69±0.19重度247.08±0.91 38.59±3.422.28±0.35 t 8.34314.2909.745 P 0.0010.0010.001预后情况良好495.28±0.71 27.83±2.791.53±0.17不良317.45±0.95 39.02±3.512.30±0.35 t 11.66015.800123.170 P 0.0010.0010.001

2.4 ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平相关性分析ACI 患者APOE 和Resistin、APOE 和miR-24、Resistin 和miR-24 均呈正相关（r=0.465、0.641、0.467，P=0.001、0.001、0.001）。见图1。

图1 ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平相关性

2.5 APOE、Resistin、miR-24 对ACI 患者预后的预测价值分析与APOE、Resistin、miR-24 单项检测相比，联合检测对ACI患者预后预测的灵敏度较高，特异性较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表4、图2。

图2 APOE、Resistin、miR-24 对ACI 患者预后的预测价值ROC 曲线图

表4 APOE、Resistin、miR-24 对ACI 患者预后的预测价值

3 讨论

ACI 是一种由动脉粥样硬化、血栓形成、脑组织血管闭塞等导致的脑组织供血不足、局部缺血性坏死性疾病[9，10]。老年人群为ACI 的主要发病群体，近年来随着我国人口老龄化不断发展，每年新增ACI病例数不断上升，引起广大专家学者的关注[11，12]。ACI 患者主要表现为感觉障碍、眩晕、失语、四肢麻木等，目前临床尚无特效的治疗手段，患者病情易反复，预后较差，因此越来越多的专家学者开始通过分子生物学等方向对ACI 发病机制、诊疗靶点进行研究[13，14]。

血脂水平异常为ACI 的主要危险因素，有研究表示，低密度脂蛋白（LDL）水平异常上升为动脉粥样硬化的重要因素，APOE 为LDL 受体的配体，其水平变化与血脂水平变化具有一定相关性[15，16]。APOE 大多由机体脑组织、肝组织合成产生，广泛存在LDL 中，与脑梗死的发生发展具有密切联系。有研究显示，APOE 的基因多态性与脑梗死后神经功能具有密切联系，抑制APOE 水平对脑梗死患者神经功能的恢复具有促进作用[17]。本研究显示，老年ACI 患者APOE 水平较高，并且不稳定性斑块、重度血管狭窄、预后较差患者APOE 水平相对较高，说明老年ACI 患者APOE 水平异常升高，且APOE 水平变化与患者斑块性质、血管狭窄程度及患者预后情况有关，由此本研究推测检测APOE 水平对老年ACI 患者的病情诊断、预后预测具有重要意义。

Resistin 是一种多肽激素，主要由机体脂肪组织分泌产生，能够诱发胰岛素抵抗，有研究显示，Resistin 水平变化与动脉粥样硬化具有密切联系，在脑梗死发生发展过程中发挥重要作用[18]。有学者在研究中表示，Resistin 水平变化与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性具有密切联系，检测Resistin 水平有助于预测脑梗死患者预后[19]。本研究显示，相比ACS 患者，老年ACI 患者Resistin 水平较高，且不稳定性斑块、重度血管狭窄、预后较差患者Resistin 水平相对较高，说明Resistin 在ACI中呈异常高表达，并且Resistin 表达水平与ACI 患者斑块性质、血管狭窄程度有关，检测Resistin 水平对ACI 患者病情诊断、预后评价具有重要意义。

微小RNA（miRNA）作为内源性RNA 分子，与机体免疫系统、细胞生物学行为、炎症反应等密切相关[20，21]。miR-24 为miRNA 家族的重要成员，其表达变化与血管平滑肌细胞生物学行为具有密切联系，有研究表示，miR-24 可作为血管疾病诊断、治疗的重要靶点[22]。本研究显示，老年ACI 患者miR-24 表达较高，并且不稳定性斑块、重度血管狭窄、预后较差患者miR-24 表达相对较高，说明miR-24 在ACI 患者中呈异常高表达，其表达变化与ACI 患者斑块性质、血管狭窄程度及患者预后情况具有一定关系。

本研究还发现，APOE 与Resistin、miR-24，Resistin与miR-24在老年ACI 患者中的表达呈正相关，三者联合检测对老年ACI 患者预后预测的灵敏度较高，特异性较低，由此本研究推测APOE、Resistin、miR-24 可能共同参与ACI 的发生发展，联合检测对ACI 患者预后具有较高的预测价值。

综上所述，老年ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表达水平明显异常，三者表达水平与患者临床特征密切相关，且三者具有一定相关性，联合检测APOE、Resistin、miR-24 对老年ACI 患者预后具有一定的预测价值。