标本溶血对化学发光免疫分析法测定胰岛素和叶酸及铁蛋白结果的影响

张秀芳，林 平

（惠州市第一人民医院检验科 广东 惠州 516000）

胰岛素主要是指胰脏内胰岛β 细胞受到内源或者外缘性物质比如葡萄糖、乳糖及胰高血糖素等刺激分泌的蛋白质激素，胰岛素属于体内唯一能够降低血糖水平的激素，并且作用还包括促进糖原、脂肪以及蛋白质的合成，通过对机体胰岛素水平的测定可用于评价糖尿病患者的胰岛β 细胞功能，评价糖尿病的发生及发展[1]。叶酸属于一种水溶性维生素，该物质在蛋白质的合成、细胞分裂生长过程均有显著作用，常用于妇女贫血的评价[2]。铁蛋白属于一种急性时相蛋白，通过对血清铁蛋白的检测可用于临床诊断缺铁性贫血的重要依据。对胰岛素、叶酸与铁蛋白的测定，具体测定时只有确保标本正常情况才能获得准确数据，标本若是出现溶血情况则使得一系列测定数值存在差异[3]。本次研究中，探讨了标本发生溶血对于临床测定胰岛素、叶酸与铁蛋白结果的影响，报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年1 月—2021 年1 月接收的150 名健康体检人员。将150 名患者的血液标本采取低渗溶血法分成程度不一的溶血标本与未溶血标本，溶血标本111 份，未溶血标本39 份，溶血标本根据溶血程度分成轻度、中度与重度，各37 份。轻度溶血组男性22 名，女性15 名，年龄17 ～65 岁，平均年龄（43.12±2.26）岁；中度溶血组男21 名，女16 名，年龄18 ～65 岁，平均年龄（42.96±2.31）岁；重度溶血组男20 名，女17 名，年龄17 ～66 岁，平均年龄（43.06±2.27）岁；未溶血对照组男20 名，女19 名，年龄19 ～66 岁，平均年龄（42.87±2.31）岁。四组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。纳入标准：①所有的体检人员均无明显用药史；②具备正常的精神状态，有良好沟通交流能力；③体检前3 个月无用药史；④本人对相关研究知情并签署同意书。排除标准：①合并严重肝肾功能不全者；②合并高脂血症及黄疸疾病者；③精神疾病或认知功能障碍者。

1.2 方法

（1）仪器与试剂：胰岛素、叶酸、铁蛋白检测试剂盒均购自Siemens 公司，对胰岛素、叶酸、铁蛋白水平的测定上，主要是应用Siemens ADVIA CENTAUR 化学发光免疫分析仪。（2）血红蛋白（hemoglobin, Hb）液制备：收集不同患者50 mL 的抗凝全血，对血液做离心处理，去除掉其中血浆以及白细胞，对于下层红细胞也要0.9%氯化钠溶液洗涤3 次以获得纯净的红细胞，置入零下70 ℃的冰箱中储存30 min 后取出，取出后置入温度37 ℃水浴箱中40 min，反复冻融3 次以使红细胞破裂，经超速离心取出掉破红细胞碎片，得到Hb 液，测定Hb为310 g/L 备用。（3）人工溶血血清制备：采集所有对象的新鲜血清，以3 000 r/min 的速度持续离心10 min分离血清，在常温下按照化学发光免疫分析仪、相关配套试剂对每份溶血标本进行胰岛素、叶酸、铁蛋白水平的测定。分别予以溶血与未溶血标本数值的测定。轻度溶血组血清Hb 浓度为0 ～1 g/L；中度溶血组血清Hb 浓度为1 ～5 g/L；重度溶血组Hb 浓度＞5 g/L。

1.3 观察指标

对比溶血前后各组胰岛素、叶酸、铁蛋白水平测定值，同未溶血组的结果比较，分析标本溶血对测定结果的影响。在室温环境下，在溶血标本配置后的0、0.5、2、18 h，分别进行非溶血标本以及溶血标本胰岛素、叶酸、铁蛋白水平的测定，相关操作均是严格按照仪器以及试剂盒说明说规范进行。

1.4 统计学方法

使用SPSS 21.0 统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（± s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以频数（n）和百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 溶血标本与未溶血标本对各指标测定结果影响

溶血后各溶血组胰岛素检测水平均降低，且随着溶血程度的增加，胰岛素水平也逐渐降低，溶血后各溶血组叶酸、铁蛋白水平均升高，且随着溶血程度的增加，叶酸、铁蛋白也逐渐升高（P＜0.05），见表1。

表1 溶血与未溶血标本对血清胰岛素、叶酸、铁蛋白检测结果的影响（ ± s）

表1 溶血与未溶血标本对血清胰岛素、叶酸、铁蛋白检测结果的影响（ ± s）

注：*与溶血前比较，P ＜0.05。

胰岛素/（mIU•L-1）溶血前 溶血后轻度溶血组 37 222.86±28.26 142.25±22.16*中度溶血组 37 223.01±28.16 98.62±18.52*重度溶血组 37 222.71±28.21 62.24±17.14*对照组 39 223.36±28.41组别 人数叶酸/（ng•mL-1）溶血前 溶血后轻度溶血组 37 5.52±1.71 9.56±2.25*中度溶血组 37 5.49±1.72 14.45±2.35*重度溶血组 37 5.56±1.74 18.95±2.47*对照组 39 5.56±1.75组别 人数铁蛋白/（ng•mL-1）溶血前 溶血后轻度溶血组 37 207.96±112.25 219.56±115.56*中度溶血组 37 208.02±111.84 231.15±117.75*重度溶血组 37 208.12±112.06 253.36±118.84*对照组 39 208.86±113.36组别 人数

2.2 溶血时间对血清胰岛素、叶酸、铁蛋白检测结果的影响

考虑溶血时间对胰岛素、叶酸以及铁蛋白检测结果的影响，结果显示在胰岛素检测上，随着标本留置时间的延长，在检测值上0.5、2、18 h 的胰岛素水平均是低于0 h，对比差异有统计学意义（P＜0.05）；而在叶酸、铁蛋白的测定结果上，随着标本放置时间的增加，检测结果也在不断提高，0.5、2、18 h 的叶酸与铁蛋白测定结果均高于0 h，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 溶血时间对血清胰岛素、叶酸、铁蛋白检测结果的影响（ ± s）

表2 溶血时间对血清胰岛素、叶酸、铁蛋白检测结果的影响（ ± s）

注：#与0 h 时刻比较，P ＜0.05。

指标 人数 0 h 0.5 h胰岛素/（mIU•L-1）111 222.85±28.41 201.13±26.15#叶酸/（ng•mL-1） 111 5.45±1.66 9.12±2.15#铁蛋白/（ng•mL-1）111 207.15±105.56 215.25±106.65#指标 人数 2 h 18 h胰岛素/（mIU•L-1）111 181.15±21.15# 142.25±17.15#叶酸/（ng•mL-1） 111 12.42±2.41# 15.36±2.66#铁蛋白/（ng•mL-1）111 231.15±114.45# 251.16±127.74#

2.3 溶血程度、溶血时间对检测结果综合影响

充分考量溶血程度、溶血时间对血清胰岛素测定值的具体影响，显示不同溶血程度，标本置入时间上存在差异，其中在放置0.5 h 的血液标本，在测定数值上同0、2 h 上差异小，但是在标本放置时间超过2 h，在测定结果上就会发生明显差别。通过重复测定设计方差的结果，发生不同程度溶血标本，在溶血时间上同胰岛素、叶酸以及铁蛋白影响比较大，胰岛素检测结果在不同时间段会随时间的改变呈现出线性相关。

3.讨论

临床生化检验工作中，需要做好标本分析前、中、后各阶段的质量控制，而其中标本溶血则属于标本分析前的质量控制环节[4-6]。正常情况下的各指标数值处在规定值范围，红细胞正常，而若是标本溶血可出现红细胞破裂，破裂红细胞使得其中的相关物质会释放至血浆中，继而引起检测结果的偏差，影响最终的判定。

本次研究中探讨了标本溶血对临床测定结果的影响，结果显示随着溶血程度的增加，INS 胰岛素的测定值也逐渐降低。INS 胰岛素降解酶存在于红细胞内，INS 胰岛素降解酶属于过氧化物水解酶，具备高效及特异性降解INS 胰岛素的作用，如果溶血标本中的红细胞发生破裂情况，会使得红细胞内存在的INS 胰岛素降解酶释放到血清中，使溶血标本中INS 胰岛素发生降解及胰岛素指标水平降低[7-9]。溶血的程度越严重从红细胞释放至单位体积中的胰岛素降解酶含量也越多，同样胰岛素也被大量分解，胰岛素的测定数值也就明显更低[10]。胰岛素作为体内唯一的一个能够降低血糖水平的物质，常用于糖尿病的分型判定以及治疗指导参考，对于临床生化检验，发生溶血标本尤其是重度溶血，常需重新进行血清标本的采集以作测定结果的复查，但重新采血一方面会增加患者的痛苦以及经济负担，另一方面则是随着时间变化，使得重新采集的血清标本无法具备临床参考价值，因此有效避免标本溶血对临床生化检验而言至关重要[11-12]。

本文结果显示，随着溶血程度的增加，溶血后在血清FA 叶酸、铁蛋白检测水平也不断升高，表明标本溶血会使得叶酸、铁蛋白测定值升高。正常情况下，红细胞中FA 叶酸的水平明显要比血清中叶酸水平更高，这一比值大约是16.7:1，而在标本出现溶血后，因为红细胞发生破裂，会使得红细胞内的叶酸释放到血清中，继而使得血清FA 叶酸测定值明显提高[13]。同样标本在发生溶血后，会大量释放铁蛋白，这样使得铁蛋白测定结果增高，此外在铁蛋白的测定上，Hb 也有可能同铁蛋白抗体结合，使得非特异反应情况出现，最终导致铁蛋白测定结果同未溶血标本测定结果出现偏差[8]。

针对标本溶血对胰岛素、叶酸、铁蛋白测定值的影响，需要控制好检测各环节的质量，提高检验的准确性及减少差错率，采取合理的预防措施，首先是需要明确影响溶血的原因，具体包括两方面的因素，一方面的因素主要是仪器设备引起的，比如在标本进行离心的时候，若是离心的速度过快、水浴箱的温度过高以及抽血针头的质量较差，容器污染就容易引起溶血的发生[14]。另一方面的因素则是因为检验人员操作不当引起，若是在采血的时候止血绷带绷的太紧以及淤血过程比较常，未能进行充分的消毒处理及对穿刺部位不断拍打也容易使得溶血情况发生。对发生溶血的原因进行分析就可采取相应的干预措施，具体如下：第一，需要减少干扰以提供给检验医师准确的参考数据，具体是进行血清标本的采集中需做到细致操作，控制注射器、针头、试管质量；第二，标本采集人员需掌握血液标本采集的正确方法及妥善保存标本，控制好注射器与试管质量，确保测定结果的准确性，减少不必要的检测误差出现[15]。同时在进行采血的时候，还需要保证技术的熟练，尽可能的做到“一针见血”，这样避免损伤组织使得血样溶血发生，且标本采集的过程可将试管倾斜30 度，让针头的斜面充分靠近试管壁，避免血液射向管底，避免直接振荡采集的血液，在采血过程嘱咐患者避免用力握拳，控制血液流出速度的适宜；第三，在将标本采集后也需要按照规范进行即刻的送检，避免即刻检测标本在室温下放置时间超过2 h，确保检验结果的准确性及合理性；第四，在采血完成后，若是发生标本溶血情况，尽早的应用相应的补救措施，而这对溶血情况明显严重影响结果准确性，告知患者原因，再次采血后检测，确保结果准确性，有效避免结果差错问题；第五，还需要检验科室同临床科室间默契合作，发现问题做及时的反馈，减少检验结果误差及确保结果的可靠性。

综上所述，标本溶血的出现会对胰岛素、叶酸、铁蛋白测定结果造成影响，因此需严把检测质量关，尽可能的减少误差的出现，以提供给患者临床诊治可靠依据。