马尾伸筋草化学成分及抗骨质疏松活性研究

滕希峰，刘雅兰，杨 菲，王海娟，何 琳,2*

1广东药科大学，广州 510006；2广东省化妆品工程技术研究中心，中山 528458； 3国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室，广州 510006

蕨类植物全世界有12 000余种，在中国分布超过2 000种[1]。蕨类植物中的石松科石松属包含多种可以作为药用的植物。文献报道石松属植物富含生物碱、萜类、甾体类、酚类和黄酮等多种化学成分[2,3]，具有抑制乙酰胆碱酯酶活性、细胞毒活性、抗炎、抑制α-葡萄糖苷酶、抗骨质疏松等药理活性[3,4]，有广阔的开发潜力。

马尾伸筋草(LycopodiumfargesiiHert.)是蕨类石松科石松属植物，主要分布在广西、贵州、四川及台湾等地。马尾神经草主要治疗跌打损伤和关节肿痛[5]。根据文献报道，马尾伸筋草中含有大量挥发油，通过GC-MS已鉴定出74种化合物，化合物类型主要为脂肪酸类化合物，其次为烷烃类、醇类化合物[6]，尚未见文献报道其他类型的化合物。为了寻找活性化合物，本研究对马尾伸筋草95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行研究，并对所有分离得到的化合物进行抗骨质疏松活性筛选。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

Agilent 1200 Series LC-MS液质联用仪(美国Agilent公司)；Bruker Advance 500型核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)；岛津SPD-20A(岛津公司)；超净工作台(SW-CJ-1F，中国苏州净化设备厂)；细胞培养箱(美国Thermo)；多功能酶标仪工作站(Flex Station3，美国Moleculardevices)。

硅胶(青岛海洋化工有限公司)；反相填充材料RP-18(40～75 μm，Biotage公司)；Sephadex LH-20(瑞典GE healthcare)；MCI-gel CHP-20P(三菱化学公司)；MEM-α培养基(美国Gibco)；胎牛血清(美国Hyclone)；青霉素和链霉素双抗溶液(美国Hyclone)；巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor，M-CSF)、GST-rRANKL(中山大学药学院药物分子设计中心)；DMSO、MTT(上海翌圣生物科技)；4%多聚甲醛(安徽Biosharp)；TRAcP染色试剂盒(美国Sigma Aldrich)。

实验药材于2018年12月采于广西玉林，经中山大学药学院顾琼副教授鉴定为马尾伸筋草(L.fargesiiHert.)，标本(编号：20181208)存放于广东药科大学中药学院。

动物：雌性C57BL/6J小鼠(7周，21～22 g)由中山大学实验动物中心提供。

1.2 实验方法

1.2.1 提取与分离

马尾伸筋草的干燥品经粉碎后称重(5 kg)，以95%乙醇为溶剂，固液比(重量比)1∶5，利用冷浸法提取3次，合并提取液，浓缩得到粗提物(600 g)。粗提物用水混悬，用乙酸乙酯分别萃取3次，合并萃取液，浓缩得到萃取物(200 g)。

乙酸乙酯萃取物(200 g)用二氯甲烷-甲醇为溶剂(100∶0→0∶100，V/V)，经硅胶柱色谱(100～200目)进行梯度洗脱，得到4个组分(Fr.A～D)。Fr.A(40 g)以甲醇-水为溶剂(0∶100→100∶0，V/V)经MCI柱层析，进行梯度洗脱，得到4个亚组分(Fr.A1～A4)。Fr.A2(8 g)用石油醚-乙酸乙酯为溶剂(100∶0→0∶100，V/V)经硅胶柱色谱(100～200目)得到3个亚组分(Fr.A2a～2c)。Fr.A2a(1.1 g)经过HPLC(60%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物12(10 mg)，Fr.A2b(2.3 g)经过HPLC(70%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物11(8 mg)、13(7 mg)、14(9 mg)、15(8 mg)和16(9 mg)。Fr.B(31 g)用甲醇-水为溶剂(0∶100→100∶0，V/V)，经RP-18柱层析，进行梯度洗脱，得到4个亚组分(Fr.B1-B4)。Fr.B1(10 g)用甲醇洗脱，经Sephadex LH-20柱层析得到化合物1(4.5 g)。Fr.B2(3 g)用石油醚-乙酸乙酯为溶剂(100∶0→0∶100，V/V)经硅胶柱色谱(100～200目)得到3个亚组分Fr.B2a～2c，Fr.B2b(1.2 g)经过HPLC(60%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物3(25 mg)、5(31 mg)和6(5 mg)。Fr.B3(6.5 g)经Sephadex LH-20柱层析，以甲醇-水为溶剂(100∶0→0∶100，V/V)进行梯度洗脱，得到5个亚组分(Fr.B3a～3e)。Fr.B3a(1.5 g)经过HPLC(60%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物2(23 mg)、4(11 mg)、7(13 mg)、8(9 mg)和17(9 mg)。Fr.B3c(0.93 g)经过HPLC(60%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物9(8 mg)和18(13 mg)。Fr.B3d(0.71 g)经过HPLC(60%乙腈-水，2 mL/min)分离得到化合物10(13 mg)。

1.2.2 抗骨质疏松活性筛选[7]

采用RANKL(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)诱导小鼠骨髓单核巨噬细胞(bone marrow macrophage，BMM)模型进行抗骨质疏松活性筛选，分离正常C57BL/6J小鼠的BMM，将BMM细胞以6×104个/mL接种于96孔板中，每孔100 μL，设置模型组(model group，MOD)、阳性对照组(control group，CON)、药物组。细胞培养过夜后，用完全培养基配制待测化合物，使化合物的终浓度为10 μM，弃去培养基，将配制好的化合物分别加入孔中，阳性对照组给予阿仑膦酸钠，模型组为等体积的培养基。在各组中加入M-CSF和GST-rRANKL，使培养液中M-CSF和GST-rRANKL的终浓度分别为30 ng/mL和50 ng/mL。每48 h换药1次，直至第5天模型组出现明显的细胞融合，获得破骨细胞。弃去培养基，用4%的多聚甲醛固定30 min。之后用双蒸水轻轻洗3次，加入配好的TRAcP染液，37 ℃孵育30 min直至出现颜色。在显微镜下观察，将细胞核≥3个融合细胞的视为破骨细胞，计数。

用Excle软件进行统计学分析处理，结果以均值±标准差表示；IC50应用Graphpad Prism 软件进行计算。

2 结果

2.1 结构鉴定

化合物1无色粉末；ESI-MS：m/z442.7[M]+；分子式为C30H50O2；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ：5.04(2H，s，H-26)，5.02(2H，s，H-27)，3.53(2H，dd，J=10.8，5.1 Hz，H-3，21)，2.49(2H，d，J=12.6 Hz，H-7，15)，2.12(2H，m，H-7，15)，1.25(6H，s，H-23，29)，1.05(6H，s，H-24，30)，0.79(6H，s，H-25，28)；13C NMR(400 MHz，C5D5N)δ：38.1(C-1，19)，30.5(C-2，20)，78.5(C-3，21)，40.2(C-4，10，18，22)，55.5(C-5，17)，25.0(C-6，16)，39.2(C-7，15)，149.8(C-8，14)，58.4(C-9，13)，23.6(C-11，12)，29.4(C-23，29)，16.8(C-24，30)，15.4(C-25，28)，107.3(C-26，27)。上述数据与文献[8]报道基本一致，鉴定化合物1为α-芒柄蜡素。

化合物2无色粉末；ESI-MS：m/z467[M+Na]+；分子式为C29H48O3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：4.90(2H，s，H-27)，3.33(1H，dd，J=11.7，4.1 Hz，H-3)，3.23(1H，dd，J=11.7，4.2 Hz，H-21)，2.46(2H，m，H-7)，2.35(1H，m，H-15α)，2.07(1H，m，H-15β)，1.08(3H，s，H-25)，0.98(3H，s，H-28)，0.81(3H，s，H-24)，0.75(3H，s，H-30)，0.69(3H，s，H-23)，0.63(3H，s，H-29)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：37.1(C-1)，28.4(C-2)，78.7(C-3)，39.3(C-4)，54.8(C-5)，27.7(C-6)，42.5(C-7)，212.2(C-8)，64.8(C-9)，42.4(C-10)，21.2(C-11)，23.7(C-12)，57.3(C-13)，147.5(C-14)，37.3(C-15)，23.7(C-16)，53.7(C-17)，38.3(C-18)，37.1(C-19)，28.0(C-20)，79.1(C-21)，39.4(C-22)，27.7(C-23)，15.5(C-24)，14.6(C-25)，108.0(C-27)，14.9(C-28)，28.5(C-29)，15.5(C-30)。上述数据与文献[8]报道基本一致，鉴定化合物2为26-nor-8-oxo-α-onocerin。

化合物3白色片状结晶；ESI-MS：m/z458.7[M]+；分子式为C30H50O3；1H NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.39(1H，br s，H-15)，4.54(1H，d，J=10.9 Hz，H-24a)，3.74(1H，d，J=10.9 Hz，H-24b)，3.70(1H，m，H-3)，3.57(1H，m，H-21)，1.57(3H，s，H-23)，1.21(3H，s，H-25)，1.12(3H，s，H-26)，0.92(3H，s，H-28)，0.86(3H，s，H-29)，0.81(3H，s，H-30)；13C NMR(125 MHz，C5D5N)δ：37.8(C-1)，28.6(C-2)，80.4(C-3)，43.7(C-4)，50.4(C-5)，20.1(C-6)，46.1(C-7)，38.0(C-8)，63.3(C-9)，36.8(C-10)，25.9(C-11)，28.1(C-12)，57.9(C-13)，139.0(C-14)，123.2(C-15)，25.0(C-16)，56.7，(C-17)，38.6(C-18)，39.2(C-19)，29.0(C-20)，78.6(C-21)，39.9(C-22)，29.2(C-23)，64.9(C-24)，15.9(C-25)，24.1(C-26)，57.0(C-27)，16.9(C-28)，20.4(C-29)，14.2(C-30)。上述数据与文献[9]报道基本一致，鉴定化合物3为serrat-14-en-3β,21α,24-triol。

化合物4白色粉末；ESI-MS：m/z481[M+Na]+；分子式为C30H50O3；1H NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.49(1H，s，H-15)，4.53(1H，d，J=11.2 Hz，H-24a)，3.72(1H，d，J=10.9 Hz，H-24b)，1.56(3H，s，23-CH3)，1.19(3H，s，30-CH3)，0.97(3H，s，29-CH3)，0.84(3H，s，25-CH3)，0.80(3H，s，28-CH3)，0.79(3H，s，26-CH3)；13C NMR(125 MHz，C5D5N)δ：39.4(C-1)，29.2(C-2)，80.5(C-3)，44.3(C-4)，57.0(C-5)，20.2(C-6)，46.3(C-7)，38.5(C-8)，63.5(C-9)，38.7(C-10)，25.9(C-11)，28.2(C-12)，57.8(C-13)，139.4(C-14)，123.3(C-15)，25.0(C-16)，43.8(C-17)，36.9(C-18)，32.3(C-19)，27.1(C-20)，75.7(C-21)，37.9(C-22)，24.1(C-23)，65.0(C-24)，17.0(C-25)，20.5(C-26)，57.1(C-27)，14.3(C-28)，22.6(C-29)，29.3(C-30)。上述数据与文献[10]报道基本一致，鉴定化合物4为serrat-14-en-3β,21β,24-triol。

化合物5白色粉末；ESI-MS：m/z328.3[M]+；分子式为C21H44O2；1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：3.52(4H，t，J=6.5 Hz，H-1，21)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：62.6(CH2，C-1，21)，33.9(CH2，C-2，20)，26.8(CH2，C-3，19)，30.5(CH2，C-4，18)。上述数据与文献[11]报道基本一致，鉴定化合物5为1,20-eicosanediol。

化合物6白色蜡状固体；ESI-MS：m/z324.6[M]+；分子式为C23H48；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.25(42H，s，(CH2)21)，0.88(6H，t，J=6.6 Hz，CH3×2)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：14.3(C-1，23)，22.9(C-2，22)，32.08(C-3)，29.9(C-4～20)，31.6(C-21)。上述数据与文献[12]报道基本一致，鉴定化合物6为二十三烷。

化合物7无色油状物；ESI-MS：m/z355[M+H]+；分子式为C21H38O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.42～5.29(4H，m，H-9′，10′，12′，13′)，4.20(1H，dd，J=11.7，4.6 Hz，H-1α)，4.14(1H，dd，J=11.8，6.2 Hz，H-1β)，3.96(1H，m，H-2)，3.72(1H，m，H-3α)，3.64(1H，m，H-3β)，2.77(2H，t，J=6.8 Hz，H-11′)，2.35(2H，t，J=7.6 Hz，H-2′)，2.08(4H，m，H-8′，14′)，1.67(2H，m，H-3′)，1.25(14H，m，H-4′，5′，6′，7′，15′，16′，17′)，0.89(3H，t，J=6.5 Hz，H-18′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：65.3(C-1)，70.4(C-2)，63.5(C-3)，174.5(C-1′)，34.3(C-2′)，25.0(C-3′)，29.5(C-4′)，29.3(C-5′)，29.2(C-6′)，29.0(C-7′)，27.3(C-8′)，130.2(C-9′)，128.0(C-10′)，25.8(C-11′)，128.2(C-12′)，130.4(C-13′)，27.4(C-14′)，29.7(C-15′)，31.7(C-16′)，22.7(C-17′)，14.2(C-18′)。上述核磁数据与文献[13]报道基本一致，鉴定化合物7为glycerol monolinoleate。

化合物8无色油状物；ESI-MS：m/z352[M]+；分子式为C21H36O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.36(6H，m，H-9′，10′，12′，13′，15′，16′)，4.16(2H，m，H-1)，3.92(1H，m，H-2)，3.83(1H，dd，J=12.0，4.8 Hz，H-3a)，3.73(1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，H-3b)，2.80(2H，m，H-8′)，2.34(2H，t，J=7.6 Hz，H-2′)，2.06(2H，m，H-17′)，1.60(4H，t，J=7.2 Hz，H-11′，14′)，1.25(10H，m，H-3′，7′)，0.97(3H，t，J=4.4 Hz，H-18′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：174.5(C-1′)，34.3(C-2′)，25.0(C-3′)，29.2(C-4′，5′，6′)，29.8(C-7′)，27.3(C-8′)，130.4(C-9′)，127.9(C-10′)，25.7(C-11′)，128.4(C-12′)，128.4(C-13′)，25.8(C-14′)，127.3(C-15′)，132.1(C-16′)，22.8(C-17′)，14.4(C-18′)，65.3(C-1)，70.4(C-2)，63.5(C-3)。上述数据与文献[14]报道基本一致，鉴定化合物8为glyceryl linolentate。

化合物9无色结晶；ESI-MS：m/z256[M]+；分子式为C15H12O4；1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.68(1H，s，CHO)，9.65(1H，s，CHO)，7.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，H-5′)；13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ：129.6(C-1)，109.0(C-2)，152.1(C-3)，147.3(C-4)，114.6(C-5)，128.0(C-6)，162.4(C-1′)，116.2(C-2′，C-6′)，132.7(C-3′，C-5′)，129.8(C-6′)，191.5(CHO)。上述数据与文献[15]报道基本一致，鉴定化合物9为3-(4′-formylphenoxy)-4-methoxybenzaldehyde。

化合物10黄色粉末；ESI-MS：m/z271[M+H]+；分子式为C15H10O5；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.85(2H，d，J=8.3 Hz，H-2′，6′)，6.93(2H，d，J=9.2 Hz，H-3′，5′)，6.59(1H，s，H-3)，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：166.3(C-2)，103.8(C-3)，183.9(C-4)，104.8(C-10)，162.7(C-5)，100.1(C-6)，166.0(C-7)，95.0(C-8)，159.4(C-9)，122.6(C-1′)，129.5(C-2′，6′)，117.0(C-3′，5′)，163.2(C-4′)。上述数据与文献[16]报道基本一致，鉴定化合物10为芹菜素。

化合物11白色粉末；ESI-MS：m/z121[M-H]-；分子式为C7H6O2；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.74(1H，s，H-7)，5.89(2H，dd，J=8.6，2.7 Hz，H-3，5)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：130.1(C-1)，133.5(C-2，6)，117.0(C-3，5)，165.5(C-4)，192.8(C-7)。上述数据与文献[17]报道基本一致，鉴定化合物11为对羟基苯甲醛。

化合物12白色粉末；ESI-MS：m/z168.2[M]+；分子式为C8H8O4；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.44(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.42(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-6)，6.71(1H，d，J=8.7 Hz，H-5)，3.75(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：123.2(C-1)，115.8(C-2)，148.6(C-3)，152.5(C-4)，113.7(C-5)，125.2(C-6)，56.3(3-OCH3)。上述数据与文献[18]报道基本一致，鉴定化合物12为香草酸。

化合物13白色粉末；ESI-MS：m/z167[M-H]-；分子式为C8H8O4；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.59(1H，J=1.6 Hz，H-2)，7.56(1H，dd，J=8.4，1.6 Hz，H-6)，6.84(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，3.92(3H，s，4-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：115.6(C-2)，148.5(C-3)，151.9(C-4)，113.9(C-5)，125.0(C-6)，56.3(4-OCH3)。上述数据与文献[19]报道基本一致，鉴定化合物13为3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(异香草酸)。

化合物14白色粉末；ESI-MS：m/z219[M+Na]+；分子式为C10H12O4；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.54(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.47(1H，dd，J=2.0，8.3Hz，H-6)，6.98(1H，d，J=8.3 Hz，H-5)，5.12(1H，q，J=7.0 Hz，H-2′)，3.97(3H，s，3-OCH3)，1.45(3H，d，J=7.0 Hz，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：126.1(C-1)，110.6(C-2)，151.3(C-3)，147.0(C-4)，114.2(C-5)，124.2(C-6)，200.9(C-1′)，69.0(C-2′)，23.1(C-3′)，56.3(3-OCH3)。上述数据与文献[20]报道基本一致，鉴定化合物14为2-羟基-1-(4-羟基-3-甲氧基-苯基)-丙基-1-酮。

化合物15淡黄色油状物；ESI-MS：m/z177.2[M-H]-；分子式为C10H10O3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.40(1H，d，J=15.9 Hz，H-2)，7.12(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6′)，7.07(1H，d，J=1.9 Hz，H-3)，6.96(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.58(1H，dd，J=16.0，7.7 Hz，H-2′)，3.95(3H，s，3′-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：126.8(C-1′)，109.6(C-2′)，147.1(C-3′)，149.1(C-4′)，115.1(C-5′)，124.2(C-6′)，153.3(C-1)，126.6(C-2)，193.8(C-3)，56.2(3′-OCH3)。上述数据与文献[21]报道基本一致，鉴定化合物15为3-甲氧基-4-羟基桂皮醛。

化合物16无色油状物；ESI-MS：m/z428[M]+；分子式为C26H32O6；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.63(1H，d，J=10 Hz，H-4′)，7.35(1H，d，J=8.6 Hz，H-5′)，6.81(1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-6′)，6.78(1H，d，J=2.5 Hz，H-8′)，6.24(1H，d，J=9.4 Hz，H-3′)，5.53(1H，br t，J=6.5 Hz，H-2)，5.42(1H，br d，J=8.0 Hz，H-6)，5.04(1H，t，J=7.0 Hz，H-8)，4.96(1H，br t，J=7.0 Hz，H-10)，4.71(2H，br d，J=6.5 Hz，H-1a，b)，2.34(1H，m，H-9a)，2.23(1H，m，H-9b)，1.78(3H，s，H-15)，1.67(3H，s，H-14)，1.65(3H，s，H-12)，1.58(3H，s，H-13)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：65.3(C-1)，122.1(C-2)，138.5(C-3)，47.4(C-4)，66.2(C-5)，130.1(C-6)，136.0(C-7)，78.3(C-8)，31.8(C-9)，119.0(C-10)，134.6(C-11)，25.9(C-12)，17.3(C-13)，12.8(C-14)，18.1(C-15)，161.4(C-2′)，112.7(C-3′)，143.6(C-4′)，128.9(C-5′)，113.2(C-6′)，162.1(C-7′)，101.7(C-8′)，155.9(C-9′)，113.2(C-10′)，170.4(-CO-)，21.4(-CH3)。上述数据与文献[22]报道基本一致，鉴定化合物16为8-acetoxy-5-hydroxyumbelliprenin。

化合物17无色油状物；ESI-MS：m/z171.1[M-H]-；分子式为C9H16O3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.04(1H，dd，J=15.8，4.7 Hz，H-3)，6.04(1H，d，J=15.6 Hz，H-2)，4.41(1H，m，H-4)，1.5(2H，m，H-5)，1.29(2H，m，H-8)，0.87(3H，t，J=6.7 Hz，H-9)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：171.6(C-1)，119.6(C-2)，152.9(C-3)，71.3(C-4)，36.7(C-5)，31.8(C-6)，25.3(C-7)，22.7(C-8)，14.2(C-9)。上述数据与文献[23]报道基本一致，鉴定化合物17为trans-4-hydroxy-2-nonenoic acid。

化合物18白色粉末；ESI-MS：m/z174[M]+；分子式为C10H22S；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.39(2H，m，SCH2)，1.66(2H，m，H-2)，1.26(15H，m，7×CH2，SH)，0.88(3H，t，J=5.2 Hz，10-CH3)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：34.2(C-1)，32.1(C-2)，29.8(C-3)，29.6(C-4)，29.5(C-5)，29.4(C-6)，29.2(C-7)，24.8(C-8)，22.9(C-9)，14.3(C-10)。上述数据与文献[24]报道基本一致，鉴定化合物18为正十烷硫醇。

2.2 抗骨质疏松活性

如图1所示，与模型组(MOD)比较，化合物4、5、9、14、16能抑制破骨细胞生长(P<0.05)，其中5、16有显著性差异(P<0.01)，化合物16与阳性对照组(CON)相比，结果无显著性差异(P>0.05)，说明化合物16具有显著的抗骨质疏松活性，通过Graphpad Prism软件进行计算，其IC50为1.98 μM。

图1 化合物1～18抗骨质疏松活性的结果Fig.1 Anti-osteoporotic activity results of compounds 1-18注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。Note:Compared with model group,*P<0.05,**P<0.01.

3 结论

本论文对马尾伸筋草全草95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行了系统化学成分研究，共分离鉴定了18个化合物，包括三萜类、黄酮类、香豆素类、醛类、酚酸类、脂肪酸类、烯酸类、脂肪醇类、烃类和硫醇类，表明马尾伸筋草中含有结构多样的化学成分。

采用RANKL诱导BMM细胞模型进行抗骨质疏松活性评价，发现了1个具有潜在抗骨质疏松活性的化合物16，其IC50值为1.98 μM，首次揭示了马尾伸筋草中抑制骨质疏松的活性成分，为马尾伸筋草资源进一步的药物开发与利用奠定了基础。

本次从马尾伸筋草分离到的α-芒柄蜡素含量大(4.5 g/5 kg)，文献报道α-芒柄蜡素有抑制乙酰胆碱酯酶活性[25]，表明马尾伸筋草具有多种与抑制乙酰胆碱酯酶活性相关疾病的潜在应用价值。

致谢：中山大学药学院顾琼副教授为本课题进行指导，张毓婷博士为本课题的化合物进行抗骨质疏松活性测试。