山西省部分地区不同来源大肠杆菌耐药性调查分析

王国艳，张国权，范建强，党文庆，何 敏

（1.山西农业大学动物医学学院，山西 太原 030032；2.娄烦县万顺源农牧发展有限公司，山西 太原 030300）

大肠杆菌是自然界中的常在菌，也是人和动物肠道中的常在菌，一般对人和动物机体无危害，但在一定条件刺激下可引起人或动物不同程度的疾病[1-2]。禽大肠杆菌病的临床病变包括气囊炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、败血症等局部或全身感染。该病经消化道、呼吸道等多种途径传播，易与其他疾病混合感染，引起较大的经济损失[3-4]。猪源大肠杆菌能够引起仔猪腹泻，引发仔猪水肿病、仔猪黄痢、仔猪白痢等疾病，病死率较高[3,5-6]。牛源大肠杆菌可引起发病快、病死率高牛的腹泻疾病，也是奶牛乳房炎的致病性因素之一[7-9]。大肠杆菌因其血清型众多，常出现免疫失效等现象，临床上多采用抗生素治疗，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，加剧体内残留情况[10]。

为了解山西地区大肠杆菌对临床常用抗菌药的耐药性流行情况，本研究对山西农业大学动物医学学院龙城校区生物工程研究室分离鉴定的196株大肠杆菌进行药物敏感试验，旨在为兽医临床提供合理用药依据，为大肠杆菌耐药性的进一步研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌株来源

196株甘油冻存的大肠杆菌菌株由山西农业大学动物医学学院龙城校区生物工程研究室分离鉴定。其中，鸡源大肠杆菌97株、猪源大肠杆菌56株、牛源大肠杆菌43株。

选取大肠杆菌ATCC25922 为质控菌，购自中国普通微生物菌种保存中心。

1.1.2 试剂与培养基

培养基：LB 营养肉汤、普通琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基（EMB）、MH 琼脂培养基，均购自青岛宾得生物技术有限公司。

药敏纸片：阿米卡星（10µɡ/片）、头孢曲松（30µɡ/片）、头孢哌酮（30 µɡ/片）、头孢克洛（30 µɡ/片）、头孢氨苄（30µɡ/片）、卡那霉素（30µɡ/片）、庆大霉素（10µɡ/片）、链霉素（10µɡ/片）、四环素（30µɡ/片）、氟苯尼考（30µɡ/片）、青霉素（10 µɡ/片）、阿莫西林（10 µɡ/片）、诺氟沙星（10µɡ/片）、氧氟沙星（10µɡ/片），均购自北京天坛生物制品有限公司。

1.1.3 仪器设备

超净工作台（北京半导体设备一厂）、YX 系列手提式压力蒸汽灭菌器（江阴滨江医疗设备有限公司）、ZD-85气浴恒温振荡器（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）、恒温培养箱（上海福玛实验设备有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种复苏

吸取100 µL 在常温下解冻的甘油冻存得菌种，加入5 mL 的LB 肉汤试管；放入气浴温培养振荡器（37 ℃、1 200 r/min）中培养10 h；将培养物划线接种于伊红美兰平板培养基，37 ℃恒温培养12 h。

1.2.2 药敏试验

参照NCCLS 推荐的KB 纸片扩散法进行药敏试验。采用实验室常规9 cm培养皿制作MH培养基平板备用，菌液以无菌棉棒均匀涂于MH 平板，按照每个平板6 或7 个药敏纸片的要求，将药敏纸片紧贴于MH平板上。37 ℃培养20 h，使用尺测量抑菌圈的直径。

参照各药物的药敏判定标准进行判定细菌耐药性，抑菌圈直径大于中敏范围的为敏感，小于中敏范围的为耐药。中敏（中介度）判定标准见表1。

表1 药物中介度判定标准Tab.1 Drug intermediary degree judgment criteria

2 结果与分析

2.1 鸡源大肠杆菌的药敏结果（见表2）

表2 鸡源大肠杆菌的药敏结果Tab.2 Drug susceptibility results of chicken-derived Escherichia coli

由表2 可知，97 株鸡源大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、氟苯尼考敏感，高敏率分别为81.44%、88.66%和88.66%；对庆大霉素高度耐药，耐药率可达100.00%。

2.2 猪源大肠杆菌的药敏结果（见表3）

由表3 可知，56 株猪源大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、头孢氨苄敏感度较高，分别为48.21%、55.36%和46.43%；对庆大霉素、氧氟沙星高度耐药，耐药率分别为100.00%和91.07%。

表3 猪源大肠杆菌的药敏结果Tab.3 Drug susceptibility results of pig-derived Escherichia coli

2.3 牛源大肠杆菌的药敏结果（见表4）

由表4可知，43株牛源大肠杆菌对卡那霉素的耐药率为53.49%；对阿莫西林、庆大霉素、头孢克罗、头孢氨苄、头孢哌酮的耐药率相对较低，介于10%～42%之间；对阿米卡星、氟苯尼考、头孢曲松、氧氟沙星、诺氟沙星的耐药率均为0。

表4 牛源大肠杆菌的药敏结果Tab.4 Drug susceptibility results of bovine-derived Escherichia coli

3 讨论

本研究分离鉴定的196株大肠杆菌来自山西区域内多个畜禽养殖场，分离株对庆大霉素等多种临床常用兽用药物的耐药率较高，与辽宁、四川、内蒙古报道的牛乳房炎大肠杆菌的耐药情况不同[11-13]。分离株对头孢类药物表现不同程度的耐药，与湖南省部分地区的大肠杆菌耐药情况相近[14]，与新疆阿克苏地区的大肠杆菌耐药情况不同[15]。分离株对阿米卡星、氟苯尼考、卡那霉素等敏感率较高，但其中猪源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率为71.43%，与刘艳红等[16]、赵丽青等[17]、吴华等[18]报道的大肠杆菌对氟苯尼考的高耐药率一致。秦春芝等[19]分离的山东省禽源致病性大肠杆菌菌株对阿莫西林的耐药率较高，达100%，与本研究禽源大肠杆菌对阿莫西林有较低的耐药性不同。孙伟等[20]研究表明，铜仁市猪源大肠杆菌对氧氟沙星有较强的耐药性，与本研究结果基本一致。高海慧等[21]研究发现，宁夏地区牛源大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考的耐药率达90%以上，与本研究中牛源大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考敏感性较高的结果完全不同。因此，不同地域、不同时间、不同物种来源的大肠杆菌的耐药性不同。

4 结论

大肠杆菌的耐药流行情况随时间、地域的不同有所变化。为减少大肠杆菌耐药性增加的风险，应在合理使用药物的同时，完善大肠杆菌的监控措施，随时了解耐药性的动态变化，为临床合理用药提供指导，防控动物源细菌耐药性发生蔓延。