虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布鲁菌病抗体的应用探讨

魏 娜

（盘锦市盘山县疾病预防控制中心，辽宁 盘锦 124107）

人布鲁菌病是由于人类通过接触感染动物的排泄物或者摄入感染或者患病动物制成的食品而患病。患病后患者主要变现为大汗、乏力、关节痛以及肝脾、淋巴结肿大等症状[1-2]。如果患者未及时进行控制治疗，则会使细菌在细胞内不断繁殖，形成局部病灶，病菌在细胞内破裂分布到各个脏器器官内，形成多发病灶，严重影响患者生活质量，威胁生命安全，给家庭、社会、医疗带来负担[3-4]。因此如果发现存在以上异常现象，应该及时就医采取科学、合理检验方法，判断临床病情，做到早发现早治疗。为此，选择我疾控中心于2014年至2019年内收到的80例人布鲁菌病患者血清样品为研究对象，本文即分析对于人布鲁菌病抗体采用试管凝集试检测和虎红平板凝集试验检测实际效果，主要内容见下文。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我疾控中心于2014年至2019年收到的80例人布鲁菌病患者血清样品为研究对象，将所有患者按照检测方法的不同，分为对照组与观察组。对照组：40例，男23例，女17例，年龄范围21～67岁，平均年龄（42.23±8.77）岁。观察组：40例，男25例，女15例，年龄范围21～67岁，平均年龄（42.15±8.36）岁。纳入标准：①均知情同意。②均为人布鲁菌病患者。③均在21～67岁。排除标准：①精神异常，沟通障碍。②配合度较低。③其他合并类疾病。对两组患者文化程度、年龄范围、身高等基础性资料分析后显示，其差异无统计学意义（P＞0.05）。所有患者对本研究均完全知情同意并签署知情同意书。我中心对本研究完全知情，并批准研究。

1.2 方法 对照组进行试管凝集试检测，观察组进行虎红平板凝集试验检测。

1.2.1 虎红平板凝集试验检测 观察组患者进行虎红平板凝集试验检测，在检测中，取0.03 mL血清检测样品，放置于玻片上，将0.03 mL虎红平板抗原加入其中，进行搅拌，确保搅拌均匀。等待5 min后观察结果。如果玻片上混合物当中出现颗粒形状物质或者发生凝集片，则说明显示结果为阳性，如果混合液体呈现浑浊状态，则说明检测结果均为阴性。

1.2.2 试管凝集试验检测 对照组患者进行试管凝集试验检测，采用5支小试管，将2.30 mL生理盐水加入第一支试管中，第二支试管不需要加入生理盐水，第三支试管需要加入0.50 mL生理盐水，第四支试管以及第五支试管需要同时加入0.50 mL生理盐水。采用1 mL吸管，吸取0.20 mL血清样品，并放置在第一支试管当中，保证液体混合均匀。采用1 mL吸管吸取第一支试管中血清，将0.50 mL分别加入到第二支试管以及第三支试管当中，保证第三支试管中搅拌均匀。吸出0.50 mL加入第四支试管中混均，再从第四管吸取0.50 mL加入第五管体液充分搅拌均匀，取出0.50 mL第五支试管中液体丢掉。分析试管中血清稀释情况。第二支试管到第五支试管稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。将0.50 mL抗原稀释液加入到第二支试管以及第五支试管当中进行稀释，分别为1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同时将抗原对照以及阳性、阴性进行对照组、比浊管判断。将对照管、试验管、比浊管进行摇荡后，放置在37 ℃温箱内22 h后取出放置2 h后判断。如果发现试管凝集反应血清为1∶100稀释度凝集现象“++”以上，则为人布鲁菌病抗体阳性。

1.3 疗效标准 ①对两组患者样品分别进行虎红平板凝集试验检测和试管凝集试验检测后检测结果进行对比分析。②对两组患者样品分别进行虎红平板凝集试验检测和试管凝集试验检测后敏感度和准确度进行对比分析。③对两组患者样品分别进行虎红平板凝集试验检测和试管凝集试验检测后对布鲁菌进行对比分析。

1.4 统计学方法 研究所得到的数据均采用SPSS 23.0软件进行处理。（）用于表示计量资料，用t检验；率（%）用于表示计数资料，用χ2检验。P＜0.05时则提示进行对比的对象之间存在显著差异。

2 结果

2.1 两组检测结果分析 对照组进行试管凝集试验检测后阳性36（90.00%）例，阴性4（10.00%）例，观察组进行虎红平板凝集试验检测后阳性40（100.00%）例，阴性0例，两组阳性（χ2=4.211，P=0.040）。研究结果显示，观察组进行虎红平板凝集试验检测后检测效果明显优于对照组进行试管凝集试验检测后检测效果，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组检测结果分析[n（%）]

2.2 两组敏感度和准确度对比分析 对照组进行试管凝集试验检测后敏感度80.00%，准确度为82.50%，观察组进行虎红平板凝集试验检测后敏感度为100.00%，准确度为97.50%。研究结果显示，观察组进行虎红平板凝集试验检测后敏感度、准确度明显高于对照组进行试管凝集试验检测后敏感度和准确度，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组敏感度和准确度对比分析[n（%）]

2.3 比较两种方法检测布鲁菌结果 在布鲁菌检测结果方面，观察组布鲁菌检出率为95.00%；对照组布鲁菌检出率为77.50%；观察组数据相比较对照组较高（P＜0.05）。见表3。

表3 比较两种方法检测布鲁菌结果[n（%）]

3 讨 论

布鲁菌病又被称为人布病，此病诱发因素与地区、职业、人体免疫功能以及其他因素密切相关[5-6]。①地区：居于该病流行地区或者该病流行地区旅行者，更容易发生此病。②职业：某些职业此病患病率较高，比如：屠宰场工人、肉类加工工人、兽医、实验室工作人员等。③人体免疫功能，如果人体免疫功能正常，通过体液免疫以及细胞免疫能够清除病菌，不会出现临床症状。如果人体免疫功能不全或者感染病菌量较大、毒性较强、致病菌反复入血、则会发生慢性感染。④其他因素：进食生肉或者未经巴氏消毒奶制品等。此病潜伏期长短不一，一般为1～3周，也可长达数月。出现反复高热伴大汗淋漓、肝、脾淋巴结肿大等症状，因此需要引起高度重视，及时采取有效检测方法，判断病情，做到早发现早治疗，避免错过最佳治疗时机。

布鲁菌病是临床常见的传染病，对此种疾病采取早期诊断以及治疗能够对此病予以较好的改善。临床上对布鲁菌病常采取的检验方法可见虎红平板凝集试验、酶联免疫吸附试验、荧光偏振免疫试验以及试管凝集试验等。虽然曾有研究认为试管凝集试验对诊断布鲁菌病更有效。但在相关研究中指出，试管凝集试验需要较高的实施技巧，且试验时间较长，在一定程度对其应用进行了阻碍。虎红平板凝集试验具有操作方便、检测时间较短的特点。在相关研究中得知，采取虎红平板凝集试验患者的检查结果数据相比较采取试管凝集试验在检测患者的结果数据更优，尤其是在布鲁菌病抗体中有着较高的价值。另有研究结果表明，采取虎红平板凝集试验确诊布鲁菌的检测准确率为96.43%，相比较其他两种检测方法较高。由此可见，此种方法的诊断效果较优。可有助于疾病的初期诊断以及治疗。

由于基层实验室的条件有限，对于布鲁菌病原方面的检测具有一定的难度，因此临床中一般采用血清学检测对布鲁菌病进行诊断。布鲁菌病的临床诊断一般采用血清学检测。在相关研究中得知，使用了两种凝集试验来检测人类布鲁菌病抗体。虎红平板凝集试验阳性率为5.90%，试管凝集试验阳性率为3.30%。可见虎红平板凝集试验的数据相对较高；此外虎红平板凝集试验的主要检测项目是IgG抗体，具有较高的灵敏度、特异性和准确度，表明其对人布鲁菌病抗体具有较高的敏感性，尽管有一定的概率会产生抗原抗体反应假阳性结果，此方法具有操作简单、成本低、速度快等特点，在大规模普查中有着重要的应用价值。

试管凝集试验为半定量试验方法，在微生物检验中常用已知细菌作为抗原液和一系列稀释的受检血清进行混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通过产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体评价[7-8]。虎红平板凝集试验检测是用来诊断布鲁菌病，主要检测方法为取被检测血清0.03 mL和抗原0.03 mL相结合，5 min内观察，如果出现“+”以上反应者均为阳性。布鲁菌病虎红平板凝集试验抗原系用抗原性良好的布鲁菌菌株，接种于适宜培养基培养，收获菌体，经加热灭活，离心后用虎红染液染色，悬浮于乳酸缓冲液中制成[9-10]。反应强度标准如下：①“－”无凝集，为均匀粉红色。②“++”出现明显卷边，凝集块间液体稍清亮。③“+++”凝集反应较强。④“++++”凝集块呈菌丛状，凝集块间液体清亮明显。虎红平板凝集试验检测一般无任何并发症和危害，安全度较高[11]。本文即分析对于人布鲁菌病抗体采用试管凝集试检测和虎红平板凝集试验检测实际效果，研究结果显示，对照组进行试管凝集试验检测后敏感度80.00%，准确度为82.50%，观察组进行虎红平板凝集试验检测后敏感度为100.00%，准确度为97.50%。观察组进行虎红平板凝聚试验检测后敏感性以及准确性明显高于对照组进行试管凝集试验检测后准确性以及敏感性（P＜0.05）；对照组进行试管凝集试验检测后阳性36（90.00%）例，阴性4例（10.00%），观察组进行虎红平板凝集试验检测后阳性40例（100.00%），阴性0例，观察组进行虎红平板凝集试验检测后检测效果明显优于对照组进行试管凝集试验检测后检测效果（P＜0.05）。观察组布鲁菌检出率为95.00%；对照组布鲁菌检出率为77.50%；观察组数据相比较对照组较高（P＜0.05）。

综上所述，在人布鲁菌病抗体中采用虎红平板凝集试验检测能够提高敏感性和准确性，具有明显检测效果，实际工作中为保证精确度，往往采用虎红平板凝集和试管凝集试验相结合检测。