腋窝淋巴结转移的三阴性乳腺癌组织中C-erbB-2 NuSAP1表达及意义分析

刘向华, 吕勇刚, 孟庆杰, 韩晓刚, 张浩萌, 印玉龙

(西北大学附属医院/西安市第三医院甲乳外科, 陕西 西安 710000)

近年来,恶性肿瘤已成为全球重要的公共健康问题,据我国2017年癌症统计数据显示,乳腺癌已成为女性最为常见恶性肿瘤,约占所有恶性肿瘤的13%,严重威胁到女性生命安全[1]。其中三阴性乳腺癌作为一类独立亚型,获得了广泛的关注,其作为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与对应的人表皮生长因子受体(HER-2)均归属于阴性范畴的一类特殊癌症,具有恶性程度高、病理分级晚常见远处转移和预后差等特点,侵袭性强,通常伴随淋巴转移等问题[2]。因三阴性乳腺癌内分泌和抗靶向等疗法疗效有限,治疗手段较为单一,仍以手术治疗为主,放化疗为辅,这对改善患者生存预后有一定效果,但肿瘤的转移、复发仍对患者造成了严重的困扰,针对三阴性乳腺癌缺乏有效的靶向治疗这一难题,我们需不断探索新靶点以指导临床[3]。乳腺癌中表皮生长因子受体2(C-erbB-2)的表达产物可调节参与乳腺组织的生长发育,C-erbB-2的高表达提示肿瘤恶性程度高、预后差[4]；核仁纺锤体相关蛋白1(NuSAP1)是新发现的一种脊椎动物蛋白,在细胞有丝分裂和增殖中有重要作用,NuSAP1基因的高表达与肿瘤发生、发展和预后不良关系密切[5]。为揭示C-erbB-2和NuSAP1的表达于三阴性乳腺癌的关系,为淋巴结转移高位评估提高参考,本研究特作出以下分析。

1 资料与方法

1.1一般资料：回顾性选取2016年7月至2020年10月于本院治疗的150例乳腺癌患者的临床资料。纳入标准：①均接受乳腺外科手术治疗,且经病理学检查确诊为乳腺癌,并伴有乳房肿块、疼痛、皮肤改变等表现；②术前未接受过放化疗；③术前未发生远处转移；④临床资料完整。排除标准：①乳房手术史；②乳腺癌转移者；③合并严重基础性疾病和其他恶性肿瘤者。依据免疫组化情况将其分为观察组(n=49)和对照组(n=101),其中观察组为三阴性乳腺癌患者,对照组为非三阴性乳腺癌患者。三阴性的判定标准为：ER、PR免疫组化染色阳性细胞在10%以下；HER-2免疫组化染色阴性或1+、2+者以显色原位杂交进一步判定HER-2状态,ER、PR、HER-2均为阴性即可判定。两组基本资料比较,无明显差异(P>0.05),见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2方法：收集取患者肿瘤和癌旁组织中的C-erbB-2和NuSAP1表达水平,大致方法如下：将患者患者肿瘤和癌旁组织置于中性甲醛溶液中固定30h后,使用自来水冲洗组织表面固定液,并进行脱水处理,当组织块透明时进行浸蜡处理。石蜡包埋完成后切片厚度大约3μm,进行HE染色复查病理类型后行免疫组化染色。每张切片随机选取10个视野,依据细胞染色程度和阳性细胞占比判断C-erbB-2和NuSAP1的表达情况。

1.3观察指标

1.3.1C-erbB-2结果判定标准：将细胞膜、细胞核、细胞浆中浅黄、棕黄的小颗粒判定为阳性细胞,C-erbB-2为胞膜阳性。依据半定量计分方法将染色程度分级：无着色计为0分,淡黄色计为1分,棕黄色计为2分,棕褐色计为3分；着色阳性细胞百分比：百分比≤5%计为0分,6%～25%计为1分,26%～50%计为2分,≥51%计为3分。以染色程度和着色阳性细胞百分比乘积作为阳性系数：0、1分为阴性(-),2、3分为弱阳性(+),4～6分为中阳性(++),7～9分为强阳性(+++),分值≥4分则为高表达。

1.3.2NuSAP1结果判定标准：染色强度分级：0分：无着色,1分：淡黄色,2分：棕黄色,3分：棕褐色；着色阳性细胞百分比：1分：百分比≤10%,2分：11%～50%,3分：51%～80%,4分：≥81%。两项乘积为阳性系数：0分为阴性(-),1～4分为弱阳性(+),5～8分为中阳性(++),9～12分为强阳性(+++),分值≥5分则为高表达。

2 结 果

2.1两组患者C-erbB-2阳性表达情况比较：观察组C-erbB-2阳性高表达率为87.76%,明显高于对照组63.37%(P<0.05),秩和检验结果显示,两组间C-erbB-2阳性表达强度比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组患者C-erbB-2阳性表达率比较n(%)

2.2两组患者NuSAP1阳性表达情况比较：观察组NuSAP1阳性表达率为79.59%,明显高于对照组61.39%(P<0.05),秩和检验结果显示,两组间NuSAP1阳性表达强度比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 两组患者NuSAP1阳性表达率比较n(%)

2.3研究组患者C-erbB-2和NuSAP1表达与腋窝淋巴结转移情况：49例三阴性乳腺癌患者中,未出现腋窝淋巴结转移者22例,出现腋窝淋巴结转移者27例。C-erbB-2和NuSAP1高表达组腋窝淋巴结转移率明显高于低表达组(P<0.05),见表4。

表4 研究组患者C-erbB-2和NuSAP1表达水平与腋窝淋巴结转移情况n(%)

3 讨 论

乳腺癌作为当前对女性健康危害最为严重的肿瘤之一,尽管目前诊疗技术有所进步,但仍是造成女性癌症死亡的主要原因。科学的认知乳腺癌在分子、组织和治疗反应等反面的区别,有助于实现针对性治疗[6]。国外有研究[7]发现,三阴性乳腺癌具有侵袭性强、生存率低、易发生复发和转移等特点。目前针对乳腺癌的治疗以手术和放化疗为主,这在一定程度上可有效改善患者预后,延长患者生存期限,但肿瘤转移、复发等仍为亟需解决的难题[8]。近年来,肿瘤细胞的异质性得到了广泛关注,经学者研究分析发现原发与复发、转移灶构成特殊的异质性,不同部位的肿瘤细胞也具有不用的细胞生物学行为,这种异质性对术后辅助综合治疗有重要临床作用[9]。

生理状态下,乳腺组织中癌基因C-erbB-2作为表皮生长因子受体家族成员之一,通常不表达或仅微量表达,正常情况下不与特异性配体结合处于非激活状态,其表达产物主要参与乳腺组织的正常生长发育,当受到外界致癌因素刺激与特异性配体结合后致使自身异常活化,使C-erbB-2结构或表达失控,部分细胞不受控制的独立生长。当C-erbB-2出现过度表达时,表明机体存在遗传性损伤,同时C-erbB-2也可调控肿瘤细胞生长、增殖和分化,促进肿瘤侵袭转移,是一类重要的肿瘤标志物[10]。研究[11]显示,约1/3的乳腺癌组织表达C-erbB-2会加速细胞的恶性转化,诱导肿瘤发生。目前,C-erbB-2已被证实在乳腺之外的器官如肝、肾、肺等肿瘤中均有过表达,且表达水平与恶性程度呈明显正相关关系。本研究中,三阴性乳腺癌患者C-erbB-2阳性高表达率(87.76%)明显高于非三阴性乳腺癌患者(63.37%%),且两组之间比较有统计学意义(P<0.05)。C-erbB-2蛋白主要位于肿瘤细胞胞膜中,呈棕黄色颗粒,着色越深,呈阳性高表达,表明C-erbB-2的表达与乳腺癌的发生发展存在一定联系。NuSAP1是一种分子量为55kDa的蛋白质,此前在一些肿瘤中可以发现,NuSAP1对肿瘤的发生发展具有促进作用。大量研究表明NuSAP1可以预测乳腺癌的不良预后,并且与乳腺癌的ER、PR状态有关[12]。本研究中,三阴性乳腺癌患者NuSAP1阳性高表达率为79.59%,明显高于非三阴性乳腺癌患者61.39%(P<0.05),NuSAP1在乳腺癌中表达增高,表示预后不良问题,这与张顺礼[13]分析研究结果是一致的,Liu[14]等实验发现,NuSAP1的高表达预示着结肠癌预后不良,表明NuSAP1对预后有重要的指导作用。但目前NuSAP1在乳腺癌中的生物学功能尚未完全明确,可能与调节Went/β-catenin和EMT信号通路有关。本研究中淋巴转移组患者C-erbB-2和NuSAP1阳性高表达率均明显高于无淋巴转移组(P<0.05),表明C-erbB-2和NuSAP1的表达情况与腋窝淋巴结转移情况存在密切联系,Xu[15]等曾经研究发现敲除NuSAP1基因可通过调节BTG2/P13K/Akt信号抑制非小细胞肺癌细胞的生长和转移。

综上所述,三阴性乳腺癌患者中C-erbB-2和NuSAP1阳性表达率较高,且与腋窝淋巴结转移密切相关,可作为预后预测指标。