蒸参水中化学成分的含量测定

边东,武子敬,刘雪坤,姚慧敏,刘成琳*

（通化师范学院·吉林通化·134002）

人参为五加科植物人参Panaxginsing C.A.Meyer的干燥根和根茎，主要分布在我国长白山地区，味甘、微苦、性平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智等功效，能治疗劳伤虚损、食少、倦怠、虚咳喘促、自汗暴脱、久虚不复等一切气血津液不足之证[1-3]。由于人参具有较好的补益和适原性作用，所以人们在日常生活使用频率非常高，自古以来被人们称为佳品，享有“百草之王”的美称[2]。

近年来，人参的加工品也相继的走进了大众视野。人参的加工品主要有红参和黑参，与人参的功效性相比它们更侧重于补益作用，临床中，当方剂中的人参侧重补益作用时常常更换成红参和黑参，而且可直接当作保健品使用[4]。目前，红参和黑参的加工方式常采用加水蒸制的方式，加工后蒸制人参的水（以下简称蒸参水）属于副产物，长期一直被药企以工业废水直接处理[4-5]。但经实验室前期研究发现蒸参水颜色呈暗黄色，浑浊、略粘稠，味道与人参水提取液较为相似，故推测蒸参水与人参成分相似[6]。查阅大量文献发现，人参中主要的化学成分为多糖和皂苷类，因此本次实验主要采用紫外分光光度法检测蒸参水是否含有多糖与皂苷类成分，目前关于人参多糖、总皂苷的检测大部分采用了高效液相色谱法进行检测，但此方法操作复杂，检测时间较长，检测成本也非常高，紫外可见分光光度计法测定法测定人参总皂苷含量分析最简便，且重现性最好，因此，本次实验采用紫外可见分光度仪测定蒸参水中多糖和总皂苷的含量[7-9]。

我国为人参主产国，已有5000年以上的应用史，人参已被列为国家一级保护植物，在长白山等自然保护区已进行保护，为了能让人参资源得到充分利用，在未来还需进一步系统研究蒸参水中有效成分和含量以及进行一系列的对比研究，借此研究还可能发现新的活性成分。扩大人参资源的利用不但有理论意义而且还有重要的经济效益和社会效益，其开发利用市场前景广阔[2]。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器和试剂

1.1.1 材料

人参（Panaxginsing C.A.Meyer）；人参皂苷Rg1、Re、Rb1（均购买于四川维克生物科技有限公司）。

1.1.2 试剂

甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯德国Merck公司）；磷酸（天津大茂化学试剂厂）娃哈哈纯净水。

1.1.3 仪器

岛津LC-2010HT高效液相色谱仪，包含LCsolution化学工作站、VWD检测器、自动进样器(日本岛津有限公司)；精密电子天平(天津天马恒基仪器有限公司)；SG3300H超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)；循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 对照品的制备

1.2.1.1 人参多糖的对照品制备

取适量葡萄糖置烘箱中105℃干燥，多次称重直至恒重时取出。精密称定1.09mg，用水定容至10 mL，即得无水葡萄糖溶液（0.109 mg·mL-1）。

1.2.1.2 人参总皂苷对照品制备

精密称取对照品人参皂苷Re 10.09 mg，加甲醇并转移10 mL容量瓶中定容至刻度，即得人参总皂苷对照品溶液（1.009mg·mL-1）。

1.2.2 样品溶液的制备

1.2.2.1 蒸参水溶液的制备

精密称取人参100g,放入蒸锅中，加水量为5L,蒸制温度为100摄氏度隔水蒸制6 h，将得到的蒸参水减压浓缩后置容量瓶中，加水定容至50 mL，即得蒸参水溶液（1g·g-1生药量）。

1.2.2.2 蒸参水中多糖供试品溶液的制备

取上述蒸参水溶液5 mL，加入乙醇使其含醇量达到80%，放4℃冰箱保存12 h，取出用布氏漏斗进行抽滤，重复三次，将三次共得到的沉淀物放入烘箱中干燥，加适量水溶解，摇匀，置100 mL容量瓶中定容至刻度，备用，即得蒸参水多糖样品溶液。

1.2.2.3 蒸参水中总皂苷供试品溶液的制备

将上述去除多糖后的滤液回收，减压浓缩至50 mL，通过D101大孔吸附树脂，水冲洗至无醇味，再用8倍量60%乙醇冲洗，收集流出液，挥干试剂并放入烘箱中干燥即得蒸参水中总皂苷。

1.3 实验方法

1.3.1 多糖标准曲线的绘制

精密吸取无水葡萄糖对照品溶液100、150、200、250和300μL、人参多糖样品溶液1mL，置具塞试管中加蒸馏水至2 mL，加入1 mL 4%苯酚溶液，摇匀后加5 mL浓硫酸，不断振摇，直到试管中溶液澄清不浑浊，迅速放入100℃沸水浴中10 min，取出放冰水中，冷却至常温。以相应试剂作为空白，采用紫外-可见分光光度仪在484 nm处扫描，即可。

1.3.2 总皂苷标准曲线的绘制

精密吸取人参总皂苷对照品溶液100、140、180、220和260 μL和人参总皂苷样品溶液500 μL，置具塞试管中，低温挥去溶剂后，加1%香草醛高氯酸溶液0.5 mL，置60℃恒温水浴上充分混匀后加热15 min，取出，立即将具塞试管放入冰水中2 min，最后加浓度为77%硫酸溶液5 mL，摇匀；消除气泡后，以相应的试剂作为空白，利用紫外-可见分光光度仪在480 nm处扫描，即可。

1.3.3 蒸参水中多糖溶液检测

精密吸取蒸参水多糖溶液供试品溶液1mL，按“1.3.1”项下方法，在484 nm处测定吸光度。

1.3.4 蒸参水中皂苷的检测

精密吸取蒸参水中总皂苷供试品溶液200μL，按“1.3.2”项下方法，在480 nm处测定吸光度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

2.1.1 多糖标准曲线绘制

以多糖对照品进样量(μg·ml-1)为横坐标(X)吸光度为做坐标(Y)，进行回归得到标准曲线为Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9992，多糖浓度18.31-54.93 μg·ml-1处吸收良好，结果如图1。

2.1.2 总皂苷标准曲线

以人参皂苷Re进样量(μg·ml-1)为横坐标(X)吸光度为做坐标(Y)，进行回归得到标准曲线为Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9998，总皂苷Re浓度在1.29-3.95 μg·ml-1处吸收良好，结果如图2。

2.2 蒸参水中多糖的含量测定

经“1.3.3”项下方法测定蒸参水多糖吸光度为0.56，表明蒸参水中含有多糖成分，经人参多糖标准曲线计算可得每毫升蒸参水中含有12.08 mg多糖。

2.3 蒸参水中皂苷类成分测定

经“1.3.3”项下方法测定蒸参水皂苷样品吸光度为0.47，表明蒸参水中含有皂苷类成分，经人参总皂苷标准曲线计算可得每毫升蒸参水中含有2.77 mg的皂苷类成分。

3 讨论

蒸参水的生产形成工艺特点决定其多为水溶性成分，因此针对其某些化学成分的分离制备存在一定的困难[11]。至今末见对其人参皂苷类单体成分分离制备方面的相关研究报道。本实验收集蒸参水，减压浓缩至一定浓度，加入适量乙醇得到沉淀的多糖部分，将蒸参水中乙醇挥发，并用水饱和正丁醇萃取得到皂苷部分，最后采用紫外可见分光光度法检测多糖与皂苷类成分。通过上述方法成功分离测定出蒸参水中的多糖和皂苷类成分。蒸参水是人参加工过程中的副产品，含有人参中的活性成分。蒸参水的有效利用可以大大降低资源的浪费，为人参扩大用药范围提供证据，丰富了人参的用药资源。