血浆ox-LDL水平与冠状动脉粥样硬化病变程度相关性分析

马静茹，张 强，王吉峰，徐 立

(吉林大学第二医院 检验科,吉林 长春130041)

动脉粥样硬化是多因素参与的慢性炎症过程[1]，研究表明氧化应激[2]参与动脉粥样硬化的过程，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作为动脉粥样硬化的独立危险因素[3]，可损伤血管内皮细胞，促进单核细胞的粘附，诱导平滑肌细胞的迁移和增殖，促进泡沫细胞形成，可诱导基质金属蛋白酶的形成进而促使斑块破裂和血栓形成，在动脉粥样硬化中起重要的作用[4-5]。但是血浆ox-LDL水平在急性冠脉综合征患者是否升高仍存在争议[4,6-7]。检测ox-LDL的方法很多且未统一标准化[8]，目前以4E6抗体为基础的ELISA最为广泛使用，但国内鲜有报道。本研究旨在分析冠状动脉粥样硬化病变程度与血浆ox-LDL的关系，评估ox-LDL在冠心病临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年10月至2018年4月期间在吉林大学第二医院心血管内科住院首次确诊的患者73例。根据冠脉造影检查结果分为单支病变组22例，双支病变组20例，三支病变组31例。另选择同期在我院进行健康体检者经问诊，体格检查如心电图、心电图、心肌酶谱等排除心血管疾病，以及冠脉造影正常无狭窄者30例作为对照组。排除标准:①急、慢性感染性疾病；②糖尿病以及空腹血糖受损；③自身免疫性疾病以及肿瘤患者；④血液系统疾病；⑤合并肝肾功能不全；⑥其他心肌病及心脏瓣膜病；⑦存在脑梗塞，颈动脉狭窄。⑧服用他汀等降脂药物。所有受试者均签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2 仪器与试剂

TC,LDL-C，HDL-C,apoA,apoB,Lp(a),hs-CRP使用日立LABOSPECT 008AS全自动生化分析仪检测。Ox-LDL与氧化脂质的吸光度使用Thermo Variosbon Fish酶标仪读取。Ox-LDL使用4E6单抗包被的双抗体夹心法ELISA试剂盒(Mercodia AB,Uppsala,Sweden)检测。氧化脂质检测使用TBARS试剂盒(Cayman,Michigan,USA)以MDA量表示。TC试剂购自浙江东瓯诊断有限公司，LDL-C,HDL-C试剂购自日本积水医疗株式会社，apoA,aopB试剂购自英国朗道实验诊断有限公司，Lp(a)试剂购自上海复星长征医学科学有限公司，hs-CRP试剂购自上海荣盛生物药业有限公司。

1.3 方法

1.3.1样本采集与检测 受试者空腹12 h以上，于次日清晨采集外周肘静脉血,分别收集血清与EDTA-Na2抗凝血浆，标本采集后3 500 rpm,15 min离心,当天完成检测或放置于-80℃冰箱保存并于6个月内完成检测。所有检测一式两份。

1.3.2冠状动脉造影 冠脉造影的患者均采用标准的Judkins法常规体位投射。冠状动脉造影诊断冠心病的标准:至少一支冠状动脉分支直径狭窄程度≥50%，可诊断为冠心病。根据造影结果中显示的不同冠状动脉狭窄程度以及累及的左主干、左前降支、左回旋支、右冠脉的数量，将冠心病患者分为单支冠脉病变组、双支冠脉病变组和三支冠脉病变组，采用Gensini评分系统对冠脉血管病变狭窄程度进行评分。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 患者临床资料比较

对照组，单支病变组，双支病变组，三支病变组性别，饮酒等方面均无统计学差异(P>0.05)。但单支病变组，双支病变组，三支病变组等冠心病患者年龄，高血压，吸烟等方面高于对照组，见表1。冠心病患者具体病变部位见表2。

表1 不同冠心病病变程度组一般临床资料

表2 冠心病患者各组病变部位

2.2 不同冠脉病变程度组间蛋白类生化指标比较

单支病变组，双支病变组，三支病变组血浆ox-LDL水平均高于对照组且具有统计学差异(P<0.001),但病变程度增强ox-LDL呈下降趋势，双支病变组与三支病变组无统计学差异(P=0.537)。ApoA在组间差异显著，对照组水平显著高于病变患者(P=0.001)，但病变组之间无显著差异(P=0.572)。ApoB在各组间无显著的统计学差异(P=0.438)。Lp(a)各组间具有显著的差异(P=0.002)，病变组显著高于对照组(P<0.001)，但病变组之间无显著的统计学差异(P=0.684)。Hs-CRP 各组间具有显著的差异(P<0.001)，病变组显著高于对照组(P<0.001)，两支病变组与三支病变组之间无显著的差异(P=1.000)，见表3。

表3 不同冠脉病变程度组生化指标比较

2.3 不同冠脉病变程度组间脂类生化指标比较

血清MDA水平在各组间差异显著(P<0.001)，病变组显著高于对照组(P<0.001)，随着病变程度的加重而显著升高。TC水平各组间无明显统计学差异。LDL-C各组间具有显著统计学差异(P=0.025)，病变组显著高于健康对照组(P=0.006)，但病变组间无明显统计学差异(P=0.45)。HDL-C水平各组间具有显著的差异(P<0.001)，病变组显著低于对照组(P<0.001)，见表4。

表4 不同冠脉病变程度组生化指标比较

2.4 冠心病患者血浆与Gensini评分之间的相关分析

将冠心病患者血浆ox-LDL水平与Gensini评分进行直线相关分析，发现ox-LDL与Gensini评分呈负相关(r=-0.285,P=0.015)，见图1。

图1 血浆ox-LDL与Gensini评分的相关分析

3 讨论

《中国心血管病报告2017》[9]显示，我国心脑血管疾病患者人数2.9亿，冠心病患者1100万，患病率和死亡率仍处于上升阶段，冠心病的防治刻不容缓。本研究将氧化低密度脂蛋白作为研究对象，分析冠脉粥样硬化病变程度间的变化。研究结果显示，随着冠脉病变程度的加重，机体氧化应激水平增加，不饱和脂肪酸(PFUA)被氧化为氧化脂质的程度增加。冠心病患者血浆ox-LDL水平显著高于健康对照组，提示ox-LDL可作为早期识别冠状动脉粥样硬化的标志物。与Pasini A F[10]等研究所不同的是，随着病变程度的加重血浆ox-LDL水平降低，但是两支冠脉病变组与三支病变组无显著性差异，并且与Gensini评分呈负相关，可能与人群的异质性以及机体血浆中Lp(a)和hs-CRP识别转运ox-LDL有关。研究表明[11]，ox-LDL一旦形成就会被冠脉壁的巨噬细胞所吞噬进而形成泡沫细胞从而完成ox-LDL的降解过程。CRP可通过CRP-Fcγ受体交联以及清道夫受体促进巨噬细胞摄取ox-LDL形成泡沫细胞[12-14]。Lp(a)是一类具有遗传特性的致动脉粥样硬化的脂蛋白，但最近研究表明Lp(a)可作为急性时相反应蛋白[15]，与ox-LDL的E06具有高度相关性，具有结合、降解ox-LDL的作用[16]。另一方面目前检测ox-LDL有DLH3、4E6、E06[3]等不同的单克隆抗体，以此为基础的不同方法的敏感性和特异性可能不同以及识别的ox-LDL成分不同，由此得出不同的结果。

我们推测Lp(a)、hs-CRP与ox-LDL通过特异性靶点结合，形成稳定或者不稳定的可溶性复合物，可进一步的研究探索能够检测相应的复合物的研究方法，具体的作用机制尚需进一步阐明。本研究样本量较小，需要在今后的研究中增加人群数量进一步确定血浆ox-LDL在冠状动脉粥样硬化中的临床应用价值。

综上所述，冠心病患者血浆ox-LDL水平显著高于对照组，可作为冠状动脉粥样硬化的危险因素。但是血浆ox-LDL水平并不与冠脉病变程度成正相关，可能与机体hs-CRP和Lp(a)特异结合ox-LDL并通过清道夫受体的上调表达等机制促进巨噬细胞摄取ox-LDL形成泡沫细胞，进而清除体内ox-LDL。