血清标记物CA15-3、HSP90A、OPN、SLPI对乳腺癌的早期预测作用

马 玲，焦大海，张培新，王 坤

(阜阳市人民医院 甲乳外科,安徽 阜阳236000)

乳腺癌是女性癌症中较为常见的肿瘤，也是全球女性死亡率的第二诱导因素[1]。目前，乳腺癌的检测主要依赖于钼靶摄影和彩超，对降低乳腺癌的死亡率具有重要意义[2]。然而，由于假阳性结果和过度诊断无痛性疾病的风险，使得乳腺钼靶筛查引起了争议[3]。早期乳腺癌诊断对降低癌症发病率和死亡率的具有重要意义。因此，迫切需要可以预测乳腺癌疾病的早期生物标记物，其中包括这些标记物具有较高敏感性和特异性，能为为临床医生提供更好的预后信息以及治疗分层。一些血源性肿瘤标记物已显示出其在临床诊断之前检测恶性肿瘤，目前已在某些癌症的筛查试验中进行评估；例如，糖类抗原125(Carbohydrate antigen,CA125) 用于筛查卵巢癌[4]。目前没有推荐用于乳腺癌早期诊断的血源性生物标志物或筛选。迄今为止，几乎所有诊断性生物标志物研究均已使用在诊断时或诊断后收集的样本，这些标记物基本用于对晚期肿瘤的诊断。在本文章的研究中，我们搜集了随后乳腺癌患者在临床诊断之前的样本应用于症状前，作为疾病早期的生物标记物和预测预后。尽管候选标记物例如carcinoembrryonic抗原(CEA)，MUC1蛋白的可溶性形式(CA15-3，CA27.29)和循环的细胞角蛋白片段(TPA，TPS和CYFRA 21-1)被建议作为诊断标记，它们缺乏早期疾病检测的敏感性和特异性。血清标记物如癌症标记物15-3(Cancer antigen,CA15-3)、热休克蛋白90A(Heat shock protein 90A,HSP90A)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(Secretory Leukocyte Peptidase Inhibitor,SLPI)与乳腺癌息息相关，研究是否可将其作为乳腺癌的诊断标记物对乳腺癌的早期发现具有重要的意义。

1 材料和方法

1.1 研究对象选取2016年7月到2019年12月的乳腺癌患者血清标本60例作为实验组，患者平均年龄(50-65)周岁，参与者的病例均是绝经后，在招募时没有活动性恶性肿瘤。同时取健康对照组女性血清40份，平均年龄(50-65)周岁。取每个标本的外周血5 ml，3 000 g/5 min，将上清转移至 EP 管于-80℃ 超低温冰箱保存备用。本研究经我院伦理委员会批准，且所有对象均签署知情同意书。

1.2 方法采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，试剂盒分别购自上海江莱生物科技有限公司，ELISA法使用的试剂盒，稀释度和批间CV为： CA15-3(人类)ELISA试剂盒(Abnova;1∶50;7.3%)；Hsp90a ELISA试剂盒(Stressgen;1∶30;6.5%)；人类SLPI Quantikine ELISA(R&D;1∶30;8.5%)；人类骨桥蛋白(OPN)Quantikine ELISA(R&D;1∶12.5;6.1%)。

1.3 统计方法通过SPSS 16．0 统计学软件进行分析，计量资料应用均数±标准差来描述，阳性率的比较采用卡方检验;ROC 曲线评价各指标的诊断价值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基线资料对研究对象的基线临床资料进行统计学发现，发生乳腺癌的年龄为53.12±7.23，BMI为27.33±4.37 kg/m2，情绪低落患者占33.3%，遗传因素58%，熬夜55%。随后罹患乳腺癌组的BMI,情绪低落，遗传以及熬夜均显著高于对照组(P均<0.05)，其它临床资料无显著统计学差异，见表1。

表1 研究对象的基线临床资料

2.2 收集60例样本乳腺癌的等级、节点状态、转移、Her2以及ER

如表2所示，60例乳腺癌患者的等级1级30例，2级10例，3级20例；节点状态N0是 39例，N1是21例；转移者M0是40例，M1是2例，M2是10例，M3是8例；Her2 +(4)例，++(7)例，+++(13)；ER阳性15例。

表2 乳腺癌患者等级、节点状态、转移、Her2以及ER

2.3 乳腺癌患者和健康对照组血清标记物比较乳腺癌患者血清CA15-3，Hsp90a，OPN和SLPI四项阳性率的比较水平显著高于对照组，差异具有统计学意义(P均<0.05)，见表3。

表3 两组CA15-3，Hsp90a，OPN及SLPI水平的比较

2.4 对血清标记物CA15-3，Hsp90a，OPN，SLPI进行早期乳腺癌预测的临床价值分析通过对这四项血清标记物进行ROC曲线分析(图1和表4)，发现4项指标均可鉴别乳腺癌 vs 健康对照。其中CA15-3鉴别的AUC最大，其次依次是OPN、SLPI和SHP90A。

表4 四项指标的Cut off值以及敏感度和特异度

图1 CA15-3，Hsp90a，OPN，SLPI四种血清标记物的ROC曲线

3 讨论

据报道，发达国家女性乳腺癌的发生率高于其他癌症。乳腺癌发病率和乳腺癌死亡率预计将在未来相当长的一段时间内增加。在大多数乳腺癌病例中，患者没有很多可检测到的症状，或者没有亲自检查乳房。因此，早期有效诊断乳腺癌以降低乳腺癌的死亡率非常重要。为了降低乳腺癌的死亡率，早期诊断是最重要的。根据初步治疗后的预后，选择合适的辅助治疗也很重要。为了诊断乳腺癌，多种方法结合使用。为了补充这种乳房筛查方法，已经尝试使用血液肿瘤标志物水平来诊断乳腺癌。尽管已经研究了它们作为诊断或预后因素的价值，但是常规肿瘤标记物的应用伴随着局限性，并且没有官方推荐的乳腺癌标记物。尽管诊断方法取得了重大进展，但是在临床实践中还没有可以被广泛接受的可以诊断出乳腺恶性肿瘤的早期生物标志物。确诊仍然依靠病理学家对组织活检进行病理学评估[5-6]。因此，迫切需要新型的生物标志物和新颖的平台技术，目前很少有研究测试血液候选肿瘤标志物在乳腺癌早期研究中的意义。因此，血源性生物标志物，用于乳腺癌的早期检测在筛选中仍需要找到用途。CA15-3广泛被用于监测转移性乳腺癌(BC)[7-8]。在患有肺癌，结肠直肠癌和肾癌的各种患者中，Trx1的血清水平表明Trx1的水平显着高于其他癌症患者。CA15-3可能是最著名的非侵入性标志物乳腺癌。CEA和CA15-3与血清Trx1可用于乳腺癌的早期诊断或乳腺癌的早期预测预后，因此作为乳腺癌的诊断标志物具有重要意义。表明将CEA或CA15-3与Trx1组合可大大提高早期诊断乳腺癌的诊断能力，特别是在敏感性方面[9]。已有研究表明，HSP90s家族基因过表达，并可能作为BRAC亚型的预后生物标志物。通过对HSP90a的药理干预，调节BRAC微环境中的免疫浸润以获得更有效的抗癌免疫性可能是BRAC治疗的一个新突破点。HSP90s家族由普遍存在的ATP依赖性分子伴侣组成，可在压力下协助折叠新合成的蛋白质或稳定变性蛋白质[10]。HSP90a蛋白包括受体酪氨酸激酶，转录因子，类固醇激素受体和细胞周期调节蛋白，所有这些蛋白在细胞存活和增殖以及肿瘤的发生和恶性中都起着重要的作用[11]。据报道，HSP90a的高表达并可能在包括BRAC在内的各种人类癌症中用作不利的预测生物标志物[12-13]。骨桥蛋白(OPN)是一种分泌的整合素结合糖磷酸蛋白，可在多种组织和细胞类型中产生，其与癌症的关系已有充分文献记载[14-15]。我们的研究以及其他研究表明，OPN在功能上有助于侵略性细胞行为，肿瘤进展和转移。尽管OPN不是肿瘤特异性的，但它在许多恶性肿瘤(包括乳腺癌)中已被描述为肿瘤标志物的潜力[16]。抗白蛋白酶1(以前称为分泌性白细胞蛋白酶抑制剂，SLPI)已被鉴定为几种癌症的候选分子标记[17]。SLPI是一种分泌的丝氨酸蛋白酶抑制剂，是粘膜和皮肤的重要保护成分。由于SLPI的功能在多种生物学环境中具有多效性，因此一直是广泛研究的主题。在癌症中，有大量文献显示SLPI表达不仅在乳腺癌中而且在肺癌，胃癌和结肠直肠癌中均表达增加。例如，非小细胞肺癌患者的血清SLPI水平高于小细胞肺癌患者或健康个体，并且发现这些水平与肿瘤分期相关。然而，在某些情况下，原发灶部位SLPI的过表达抑制了转移。在乳腺癌中，SLPI的过度表达通常与更具侵略性的转移性疾病相关[18-19]。然而，SLPI如何影响肿瘤侵袭性，转移潜力和治疗结果的细节仍然未知。

本研究根据我们采集乳腺癌患者临床和健康对照组的样本进行研究，通过ROC曲线显示，CA15-3的诊断效果最为显著，其次是Hsp90a、OPN和SLPI，他们对乳腺癌病的早期发现均具有重要的意义。