T淋巴细胞与辅助性T细胞相关因子水平在小儿支气管哮喘中的变化和临床意义

沈 琳，刘 俊

（1.南京医科大学附属苏州医院检验科；2.南京医科大学附属苏州医院儿科，江苏 苏州 215000）

支气管哮喘是一种由T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞等多种炎症细胞共同参与的慢性气道炎症性疾病，其中T细胞的活化起着关键的作用，根据T细胞表面的标志物不同，将成熟T细胞分为CD4+T和CD8+T细胞，而CD4+T细胞根据其分泌的细胞因子的不同又可分为1型辅助性T细胞（Th1细胞）[分泌白细胞介素 -2（IL-2）、干扰素 -γ（INF-γ）]、2 型辅助性 T 细胞（Th2细胞）[分泌白细胞介素 -4（IL-4）、白细胞介素 -10（IL-10）]。相关研究报道指出，T淋巴细胞是调节细胞免疫应答的重要细胞群，辅助性T淋巴细胞表达和功能紊乱是支气管哮喘患儿的重要特征，在气道炎症中发挥重要作用，故推测支气管哮喘患儿的病情严重程度与T淋巴细胞、辅助性T细胞相关因子水平有一定的相关性[1-2]。基于此，本研究主要探讨支气管哮喘患儿T淋巴细胞水平与辅助性T细胞相关因子水平的变化与临床意义，分析其与支气管哮喘患儿治疗时间、疾病程度的关系，从而为临床防治工作提供可靠的参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取南京医科大学附属苏州医院2020年1月至2021年5月收治的60例小儿支气管哮喘的临床资料，将其作为观察组，其中男、女患儿分别为34、26例；年龄2～8岁，平均（5.12±1.24）岁；病程1～3 d，平均（1.65±0.47） d，同时选取60例行健康体检的正常儿童的体检资料，将其作为对照组，其中男童、女童分别为36、24例；年龄3～10岁，平均（5.23±1.18）岁，开展前瞻性研究。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。纳入标准：观察组患儿符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南（2016年版）》[3]中的相关诊断标准；年龄2～12岁者；属于间歇性发作者；近期无呼吸道感染及其他过敏性疾病者等。排除标准：进入研究前4周内使用过全身或吸入性糖皮质激素治疗者；合并其他良恶性肿瘤疾病者；合并其他免疫性疾病如结核病、系统性红斑狼疮、幼年类风湿性关节炎者等。本研究经南京医科大学附属苏州医院医学伦理委员会批准，患儿法定监护人签署知情同意书。

1.2 治疗与检测方法

1.2.1 治疗方法 观察组患儿均给予常规吸痰、止咳、吸氧等方法治疗，并有效维持水、盐、电解质平衡，同时给予吸入用布地奈德混悬液（AstraZeneca Pty Ltd，注册证号H20140475，规格：2 mL∶1 mg）雾化吸入治疗，1 mg/次，2次/d，每次雾化吸入治疗时间为15 min；同时给予口服盐酸西替利嗪口服溶液（北京韩美药品有限公司，国药准字H20093320，规格：10 mL∶10 mg）治疗，5 mg/次，1～2岁患儿1次/d，2岁以上患儿2次/d，连续治疗2周。

1.2.2 分组方法 入院后即刻，采用肺功能检测仪对患儿肺功能障碍严重程度进行评价，具体评价标准：据最大自主通气量（MVV）实测值占预计值的百分比将病情严重程度分为4级，＞80%评为正常；60%～80%评为轻度损害；将40%～61%评为中度损害；＜40%评为重度损害[4]。将观察组患儿分为轻度组（15例）、中度组（25例）、重度组（20例）。

1.2.3 检测方法 分别抽取观察组患儿治疗前及治疗1、2周后，对照组儿童入院体检时的空腹静脉血6 mL，分为2份，一份静脉血加入乙二胺四乙酸二钾抗凝，使用流式细胞仪检测外周静脉血CD4+、CD8+百分比，计算CD4+/CD8+比值；另一份静脉血经离心（以3 000 r/min的转速，离心10 min）处理后取血清，使用酶联免疫吸附实验法检测血清 Th1 细胞因子（IL-2、INF-γ）、Th2 细胞因子（IL-4、IL-10）水平。

1.3 观察指标 ①比较对照组儿童入院体检时及观察组患儿治疗前与治疗1、2周后T淋巴细胞与辅助性T细胞相关因子水平。②比较观察组不同病情严重程度患儿T淋巴细胞与辅助性T细胞相关因子水平。③分析T淋巴细胞、辅助性T细胞相关因子水平分别与小儿支气管哮喘治疗时间、发作程度的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件分析数据，计数资料以[ 例(%)]表示，采用χ2检验；计量资料以(±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间与多时间点间比较采用重复测量方差分析。采用Pearson相关系数分析法分析支气管哮喘患儿治疗时间、发作程度与T淋巴细胞、辅助性T细胞相关因子水平的关系。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 T淋巴细胞水平与辅助性T细胞相关因子水平 与治疗前比，治疗1、2周后观察组患儿CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均呈降低趋势，且观察组各时间点均高于对照组；而CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均呈升高趋势，且观察组各时间点均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

表1 所有研究对象T淋巴细胞相关因子与辅助性T细胞相关因子水平比较( ±s)

表1 所有研究对象T淋巴细胞相关因子与辅助性T细胞相关因子水平比较( ±s)

注：与对照组比，*P＜0.05；与治疗前比，#P＜0.05；与治疗1周后比，△P＜0.05。IL-2：白细胞介素 -2；INF-γ：干扰素 -γ；IL-4：白细胞介素 -4；IL-10：白细胞介素 -10。

治疗前 52.69±5.23* 29.98±3.11* 1.76±0.18* 1.25±0.35* 90.31±6.24* 350.47±43.15* 82.98±6.04*治疗1周后 50.36±4.10*# 31.83±1.56*# 1.57±0.15*# 2.18±0.42*# 96.45±7.25*# 302.74±49.78*# 88.98±7.12*#治疗 2 周后 47.23±5.11*#△ 33.90±4.28*#△ 1.46±0.13*#△ 3.21±0.55*#△ 101.36±8.77*#△ 254.69±51.24*#△ 92.43±7.55*#△F值 75.619 43.448 166.200 572.490 102.802 136.704 51.927 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05组别 例数 时间 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ IL-2(μg/L) INF-γ(pg/mL) IL-4(ng/L) IL-10(ng/L)对照组 60 41.05±3.24 36.10±2.84 1.12±0.18 5.21±0.78 115.69±10.23 196.24±26.21 99.35±8.47观察组 60

2.2 支气管哮喘急性发作不同程度T淋巴细胞相关因子与辅助性T细胞相关因子水平 重度组、中度组患儿CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均高于轻度组，且重度组高于中度组，而重度组、中度组患儿CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均低于轻度组，且重度组低于中度组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 支气管哮喘急性发作不同程度患儿T淋巴细胞与辅助性T细胞相关因子水平比较( ±s)

表2 支气管哮喘急性发作不同程度患儿T淋巴细胞与辅助性T细胞相关因子水平比较( ±s)

注：与轻度组比，▲P＜0.05；与中度组比，□P＜0.05。

组别 例数 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ IL-2(μg/L) INF-γ(pg/mL) IL-4(ng/L) IL-10(ng/L)轻度组 15 45.65±4.33 33.20±1.96 1.35±0.15 2.85±0.42 105.33±8.25 251.02±42.11 92.20±5.42中度组 25 49.87±3.66▲ 31.63±1.87▲ 1.57±0.11▲ 1.28±0.41▲ 92.25±6.31▲ 352.59±42.20▲ 83.60±6.17▲重度组 20 56.74±4.05▲□ 28.77±1.94▲□ 1.79±0.08▲□ 0.87±0.23▲□ 87.62±5.79▲□ 421.60±33.84▲□ 72.36±8.39▲□F值 35.626 24.947 65.618 138.184 31.531 79.655 37.287 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 相关性 经Pearson相关系数分析显示，CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均与小儿支气管哮喘治疗时间呈负相关（r= -0.241、-1.641、-0.541、0.587），CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平与小儿支气管哮喘治疗时间呈正相关（r= 0.587、0.587、0.998、0.574），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均与小儿支气管哮喘发展程度呈正相关（r= 0.998、0.324、0.742），CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均与小儿支气管哮喘发展程度呈负相关（r= -0.415、-0.668、-0.574、-0.692），差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 T淋巴细胞相关因子、辅助性T细胞相关因子水平与小儿支气管哮喘治疗时间、发作程度的相关性

3 讨论

小儿支气管哮喘是儿童常见的一种慢性呼吸系统疾病，属于过敏性疾病，目前针对该疾病的发病机制尚未获得明确研究结论，该病的发生、发展不仅受到内分泌因素、环境因素及遗传因素所影响，并与气道炎症、变态反应及机体免疫功能紊乱密切相关。有关报道指出，T淋巴细胞与机体免疫功能具有密切的相关性，其可对蛋白质抗原引起的免疫应答产生较强的调节作用，而其中最为常见的细胞分别是CD4+T和CD8+T细胞，一旦这两种细胞比例失调或其原本功能出现异常，则会对机体整个免疫系统带来不良影响[5]。CD4+、CD8+百分比被认为是整个T细胞细胞相关因子中的重要参数，而CD4+、CD8+百分比表达水平的高低则代表了体内细胞免疫功能的强度。相关研究表明，当机体受到过敏原的刺激之后，若出现速发性的哮喘反应，外周血CD8+百分比会开始降低；而表现为迟发性哮喘反应者，CD4+T细胞数量开始升高，CD8+T细胞数量变化可能并不明显。因此可以认为，当CD4+T细胞与CD8+T细胞的水平发生异常时，会导致患儿T淋巴细胞调节失衡，诱发哮喘；同时，有关研究对健康儿童和支气管哮喘患儿的外周血CD4+、CD8+百分比水平进行比较，发现无论是发作期还是缓解期，患儿CD4+T细胞水平均高于健康儿童，与CD8+T细胞的水平低于健康儿童，说明T淋巴细胞可对支气管哮喘患儿的疾病情况与发展程度进行判断[6]。本研究中，观察组患儿各时间点CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均高于对照组，CD8+百分比均低于对照组；随着病情程度加重，患儿CD8+百分比逐渐升高而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值逐渐降低，提示在支气管哮喘患儿体内存在着严重的机体免疫功能失衡的情况，以外周CD4+百分比升高、CD8+百分比降低为主要表现，在接受治疗后，支气管哮喘的病理改变得到好转的同时，免疫功能恢复至平衡，CD4+T细胞与CD8+T细胞的水平也逐渐恢复到正常范围内。

支气管哮喘属于一种慢性炎症性反应，体内Th1/Th2失衡，主要以Th1功能降低作为主要表现，随着Th1细胞水平的降低，也会对T淋巴细胞和B淋巴细胞等免疫细胞产生刺激激活作用，而释放出更多的免疫抑制物质，影响机体的免疫功能，在临床表现上则是进一步的加速了气道狭窄的进程，诱发出更加严重的哮喘症状和病理表现。同时Th1和Th2可通过分泌细胞因子，形成相互之间的作用，Th1细胞主要分泌IL-2、INF-γ等，可能对哮喘的进展产生一定的抑制效果[7]。而Th2细胞主要可分泌IL-4、IL-10等因子，与机体体液免疫具有密切的相关性。正是由Th1、Th2细胞因子分泌不同，其在人体内体现出的免疫作用也存在明显差异，一旦Th1/Th2平衡被打破，机体则难以维持正常的免疫状态，机体易受到感染，促进支气管哮喘患儿病情发展。本研究中，观察组患儿各时间点血清IL-4水平均高于对照组，血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均低于对照组；随着病情程度加重，患儿血清IL-4水平逐渐升高，而血清IL-2、INF-γ、IL-10水平逐渐降低，提示在小儿支气管哮喘体内存在着严重的机体免疫功能失衡的情况，通过治疗时间的延长，机体免疫功能指标失衡的情况开始得以好转，临床症状与体征逐渐消失。

相关研究显示，支气管哮喘患儿经治疗后，CD4+百分比与Foxp3 mRNA表达均升高，可发挥其免疫抑制功能，抑制Th2细胞活化，纠正Thl/Th2失衡，促进哮喘缓解[8]；IL-2主要由Thl细胞产生，对嗜酸性粒细胞具有趋化作用，相关研究报道，发作期哮喘患儿外周血可溶性IL-2受体明显低于对照组，病情缓解后受体有所升高，提示血清IL-2与支气管哮喘患儿病情呈负相关[9]；在正常机体中，IFN-γ和IL-4互相拮抗，维持Th1/Th2平衡，当机体受变应原刺激时，Th1/Th2失衡，Th2占优势，分泌大量血清IL-4，抑制IFN-γ活性，促进炎症介质释放，使杯状细胞增生，气道黏液分泌增多，气管增厚，导致气道狭窄而促使哮喘发作；IL-10作为淋巴细胞合成抑制因子，能抑制自然杀伤细胞或者T淋巴细胞的活化，减轻呼吸道平滑肌的痉挛，其水平降低会导致T淋巴细胞应答水平的上升，加快对呼吸道高气道反应性的改变，加重病情。本研究结果显示，CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4均与小儿支气管哮喘治疗时间呈负相关，CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10与小儿支气管哮喘治疗时间呈正相关；而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均与小儿支气管哮喘发展程度呈正相关，CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均与小儿支气管哮喘发展程度呈负相关，提示T淋巴细胞相关因子与辅助性T细胞相关因子水平与支气管哮喘治疗时间与发作程度密切相关。

综上，T淋巴细胞相关因子与辅助性T细胞相关因子水平均可反映支气管哮喘发作程度和治疗效果，临床上可通过观察支气管哮喘患儿T淋巴细胞相关因子、辅助性T细胞相关因子水平来判定其病情严重程度，并可采取相应治疗措施来缓解患儿的病情。