Acsl4、Topo Ⅱα在浸润性乳腺癌组织中表达与HER2、PR及ER的关系

李伟 尚宏清 王冰涛

乳腺癌是一种分子异质性肿瘤，发病机制复杂，由多种基因导致［1］。乳腺癌的发病率在我国青年女性群体中逐年上升，给防治带来一定程度的影响，研究乳腺癌的发病机制对于早期防治具有积极的意义［2］。长链脂酰辅酶A 合成酶4（acyl-coa synthetase long-chain family member 4，Acsl4）是脂肪酸代谢的关键酶，能够引发细胞凋亡［3］。拓扑异构酶α（TopioisomeraseⅡα，TopoⅡα）是由TOPⅡ基因进行编码的DNA 拓扑异构酶，参与DNA 复制和转录的重要进程，其蛋白的过量表达能够反应细胞的增殖［4］。研究［5］表明，在乳腺癌患者体内存在TopoⅡα 异常表达的情况，本研究检测乳腺癌患者体内Acsl4、TopoⅡα 的表达情况，并分析其与与乳腺癌发生和发展的关系，现将报道如下。

1 一般资料与方法

1.1 一般资料

收集本院2019年4月至2021年5月期间行乳腺癌改良根治术患者的病理标本126 例作为观察组。纳入标准：①病理标本、免疫组化结果、临床资料均完整无缺失；②均符合《中国临床肿瘤学会乳腺癌诊疗指南》诊断标准［6］，确诊为浸润性小叶癌及浸润性导管癌；③患者术前未接受过相关放化疗或新辅助放化疗；④治疗前无乳腺癌发病史。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②合并癌细胞远处转移及炎性乳腺癌患者；③具有明确的遗传性乳腺癌家族史，为高危乳腺癌并发者；④术前行过放化疗及内分泌、分子靶向治疗。观察组平均年龄（46.23±10.79）岁，其中未绝经56 例，绝经70 例；TNM 分期［7］为Ⅰ～Ⅱ期69 例，Ⅲ～Ⅳ期57 例；淋巴结转移52 例，未转移74 例；肿瘤直径＜2 cm 36 例，肿瘤直径2～5 cm 50 例，肿瘤直径≥5 cm 40 例；病理分级高分化42 例，中分化54 例，低分化30 例；HER2 阴性37 例，HER2 阳性89 例；PR 阴性86 例，PR 阳性40 例；ER 阴性87 例，ER 阳性41 例。另取同期因良性病变手术切除的乳腺组织标本42 例作为对照组，对照组平均年龄（47.11±10.75）岁。两组患者均为女性，年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究所有患者均签订了知情同意书，且本研究经过本院医学伦理委员会批准。

1.2 试剂与方法

兔抗人Acsl4 单克隆抗体、鼠抗人TopoⅡα 单克隆抗体均购于上海梦泽生物科技有限公司，稀释比例均为1∶100。所有病理标本经10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，5 μm 连续切片后，采用免疫组织化学法检测Acsl4 和TopoⅡα 表达情况，具体操作按照免疫组化试剂盒说明书进行，分别加入一抗、二抗，DAB 显色、苏木精复染后，由已知Acsl4、TopoⅡα 阳性切片作为阳性对照，PBS 代替一抗作为阴性对照，进行光镜下观察。所有切片均由本院2 位资深病理医师双盲阅片得出结果。

1.3 观察指标

Acsl4、TopoⅡα 的染色结果判定［8-9］：Acsl4 以胞质、胞膜含有棕黄色颗粒的肿瘤细胞计为阳性细胞，根据染色程度不着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别为0 分、1 分、2 分、3 分。根据阳性细胞范围无阳性细胞、阳性细胞1%～10%、10%～50%、50%～80%、80%～100%分别为0 分、1 分、2 分、3 分、4 分。两项的乘积即为Acsl4 的染色积分，按其评分，0～4分为阴性，5～12 分为阳性。TopoⅡα 以细胞核含有棕黄色颗粒的肿瘤细胞计为阳性细胞，根据染色程度不着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别为0 分、1 分、2 分、3 分。根据阳性细胞范围阳性细胞≤10%、10%～29%、30%～49%、≥50%分别为0 分、1 分、2 分、3 分。两项的乘积即为TopoⅡα 的染色积分，按其评分0～3 分为阴性，4～9 分为阳性。

1.4 统计学方法

使用SPSS 22.0 软件行数据分析。计数资料用n（%）表示，行χ2检验；正态分布的计量资料用（）表示，行独立样本t检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Acsl4、TopoⅡα 的表达比较

观察组的Acsl4、TopoⅡα两者阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1、表1。

表1 两组Acsl4、TopoⅡα 的表达［n（%）］Table 1 Expression of Acsl4，TopoⅡα in both groups［n（%）］

图1 染色结果（苏木精染色，×200）Figure 1 staining results(Hematoxyli compound staining，×200)

2.2 HER2、PR、ER 中Acsl4、TopoⅡα 的表达

HER2 阳性的Acsl4、TopoⅡα 阳性表达均高于HER2 阴性，而PR、ER 阴性的Acsl4、TopoⅡα 阳性表达均高于PR、ER 阳性，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 HER2、PR、ER 中Acsl4、TopoⅡα 的表达［n（%）］Table 2 Expression of Acsl4，TopoⅡα in HER2，PR，ER［n（%）］

2.3 Acsl4、TopoⅡα 表达与临床病理的关系

高分化肿瘤的Acsl4、TopoⅡα 阳性表达高于中分化、低分化；TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期的Acsl4、TopoⅡα 阳性表达高于Ⅰ～Ⅱ期；肿瘤直径＞5 cm的Acsl4、TopoⅡα 阳性表达高于肿瘤直径＜2cm、肿瘤直径2～5 cm；淋巴结转移的Acsl4、TopoⅡα阳性表达高于未转移，差异有统计学意义（P＜0.05）。Acsl4、TopoⅡα 表达与年龄、是否绝经无关，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 Acsl4、TopoⅡα 表达与临床病理的关系［n（%）］Table 3 Relationship between Acsl4，TopoⅡα expression and clinicopathology［n（%）］

3 讨论

相关研究［10］表明，脂肪酸代谢是参与肿瘤的发生、发展的重要过程，而Acsl4 是脂肪酸代谢过程的关键蛋白，可以活化不饱和长链脂肪酸，参与合成膜磷脂并且引发细胞铁死亡，而诱导铁死亡又可有效杀死癌细胞［11］，同时，Acsl4 还能促进细胞不受控制地无限生长增殖，导致肿瘤浸润转移［12］，因此，可知Acsl4 在细胞死亡方面有双重作用，既能引发细胞铁死亡，又能促进细胞逃离程序性死亡、发展为癌细胞。TopoⅡ又称旋转酶，有两种α、β 同工酶之分［13］。TopoⅡα 能够DNA 的复制和转录进程，具有细胞周期特异性，在细胞周期前期TopoII α 含量快速上升，而在有丝分裂后下降，TopoⅡα 蛋白阳性提示肿瘤细胞处于增殖状态，可反映肿瘤细胞的增殖活性［14］。研究［15］指出，Acsl4 与TopoⅡα 都能够作为肿瘤的生物标志物，提示肿瘤的发生和发展过程。

本研究结果提示Acsl4、TopoⅡα 的异常表达能够在一定程度上反应乳腺癌的病情发展。Acsl4、TopoⅡα 在癌症组织学分级较高的组织中的表达阳性率高于分级较低的，提示Acsl4、TopoⅡα 可能在参与乳腺癌细胞的分化进程中具有重要作用，并且其阳性表达与乳腺癌的恶性程度相关。在淋巴结转移患者体内，Acsl4、Topo 阳性表达率高于未发生淋巴结转移患者，提示作为反映肿瘤细胞增殖活性重要指标的Acsl4、TopoⅡα 与乳腺癌转移情况有关。且相关研究［16］指出，淋巴结转移数目是常规用于评价浸润性乳腺癌预后的重要的因素，淋巴结转移组数越多，乳腺癌分期越晚，其预后越差。同时，相关研究还指出，肿瘤细胞增殖、分裂活动较正常细胞活跃，核分裂相增多，因此肿瘤大小与TNM 分期相关，肿瘤分化程度越差，肿瘤体积越大［17］。研究结果提示TopoⅡα 是调控细胞增殖的重要靶基因，而Acsl4 能够促进细胞无限生长。

HER2 又叫人体表皮生长因子-2，是一种能够激活酶活性，实现跨膜转移的糖蛋白，也是乳腺癌重要的原癌基因之一。癌基因HER2 的表达能够反弹肿瘤的激活状态，在乳腺癌的发生和转移中起重要的作用，其阳性表达的患者预后较差，肿瘤增殖和侵袭活性较强。有研究［18］指出，TopoⅡα 基因与HER2 能够共表达，其位于HER2 基因的下游片段，当HER2 基因过度表达时，可通过多种途径参与跨膜信号的转导，从而实现TopoⅡα 基因的增强表达，因此，HER2 阳性表达患者体内的TopoⅡα 表达水平较高，与本研究结果具有一致性。

近来有研究［19］表明，雌激素受体ER 是参与乳腺癌细胞Acsl4 启动子高活性的转录因子，ER 的表达状态是能够调节Acsl4 表达，同时PR 是ER 活化的产物之一，两者的表达呈正相关［20］，ACSL4 的状态能预测乳腺癌细胞的激素受体状态，而下调ACSL4 的表达可以诱导ACSL4 阳性细胞系中ER的表达，与本研究结果中PR 阴性、ER 阴性患者体内ACSL4 阳性表达率高于PR 阳性、ER 阳性患者具有一致性。

综上所述，Acsl4、TopoⅡα 在乳腺癌组织中存在异常表达，两者的阳性表达与乳腺癌患者组织学分级、淋巴结转移、肿瘤直径、及ER 阴性、PR 阴性、HER2 阳性的表达密切相关。由于乳腺癌是一个多基因疾病，故Acsl4、TopoⅡα 在乳腺癌中的作用机制还需进一步阐明。