γ-干扰素释放试验在涂阴肺结核患者诊断中的应用研究

黄振超

(广东省清远市慢性病防治医院检验科，广东 清远 511500)

0 引言

肺结核(pulmonary tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的呼吸道传染病，在我国具有较高的发病率。MTB感染严重危害人类健康，据WHO报道，MTB感染人数超过全球1/3以上人数，而我国MTB感染率高达44.5%，高居全球第2位。快速准确地检测结核分枝杆菌的感染是减少肺结核病传染的关键手段。目前面临困惑是虽然临床诊断检测技术不断更新但MTB的漏诊以及误诊概率仍不容乐观。现有TB诊断方法中，虽然细菌学检查(痰抗酸染色涂片、MTB分离培养鉴定)是TB诊断的金标准，但敏感性不高且培养耗时长，在TB感染早期诊断中受限；影像学、结核菌素皮肤实验(TST)、抗体检查、免疫球蛋白(TB-Ig)等均存在一定灵敏度、特异性局限。因此，研发新型诊断方法对TB早期诊断与治疗意义重大。近年来，分子生物学技术在潜伏感染、TB、耐药TB和非MTB等方面应用广泛，具有快速、方便以及安全性高等优点。且对于痰液中存在结核杆菌的肺结核患者可以通过痰液细菌学检测进行诊疗，但半数左右的肺结核患者痰液中并不存在MTB，导致其痰涂片细菌检测结果为阴性，被称为涂阴肺结核患者[1]。γ-干扰素释放试验是一种免疫检测方式，其具体原理是结核分枝杆菌在特异性抗原刺激下能使T细胞致敏，致敏后的T细胞与同类抗原结合将产生γ-干扰素，因此通过检测肺结核患者血液中γ-干扰素水平或者T细胞数量可以判断该患者是否发生MTB感染[2]，结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)便是根据该原理设计的一种检测方式。本研究通过对比分析不同检测方式对涂阴TB的诊断效能，以为T-SPOT.TB应用于涂阴TB患者的诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2019年9月至2021年9月我院收治的涂阴TB患者300例。

纳入标准：(1)所有患者存在咳痰、咳嗽等临床症状，同时采用影像学检查存在肺部阴影；(2)对本研究相关操作知情同意。涂阴TB诊断标准：①具有典型TB临床症状和影像特征性表现。②予以抗TB治疗有效。③排除其他非TB肺部疾患，包括肺炎、肺癌、慢阻肺等。④直接痰涂片显示可见抗酸杆菌呈现阴性。⑤支气管或者是肺组织病理显示TB改变。

排除标准：(1)合并原发性免疫缺陷性疾病患者；(2)伴有糖尿病、高血压等基础疾病患者。300例患者中男216例，女84例，年龄15-87岁，平均(47.00±17.65)岁。

表1 不同检测方式诊断效能比较

1.2 方法

300例患者均进行PPD试验、MTB -RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)、T-SPOT.TB检测，其中PPD试验具体做法为将0.1mLPPD剂注入患者1/3前臂内侧皮肤处，使其形成一个皮肤硬结，观察3天，根据皮肤硬结直径对结果进行判定，阴性：硬结直径小于5mm或者是未发现硬结；弱阳性：硬结直径大小在5mm-9mm之间；中度阳性：硬结直径大小在10mm-19mm之间；强阳性：硬结直径大小≥20mm。SAT-TB具体做法：收集300例患者的痰液标本，根据SAT-TB试剂盒(上海仁度生物科技有限公司)中的操作指南进行操作，并根据仪器厂家设置参数自动判读结果。T-SPOT.TB试验操作：首先，收集所有患者血液各5mL，将滤过蛋白(CFP)和结核特异度抗原(Tuberculosis specific antigen，ESA)对靶向抗原早期分泌作为刺激原，然后经温箱进行24h培养后，利用记录斑点数，检测结核特异抗原致敏效应。结果判断：空白对照孔内的斑点数若小于6个，且任何一个试验孔斑点数与空白斑点数之差大于6个，判定为阳性；空白对照孔斑点数大于6个，且任一个试验孔斑点数大于2倍空白孔斑点数，也可以判定为阳性。

1.3 统计学处理

使用SPSS 22.0进行研究资料分析。观测资料中的年龄组成等计量数据，均通过正态性检验，以(±s)描述，采用t检验；性别构成、阳性率等计数资料以例数及率描述；采用卡方检验。检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 300例患者各方式检出情况比较

300例患者中共检出阳性患者241例，排除59例，检出率为80.33%(241/300)，其中PPD试验检出阳性181例，阳性率为60.33%(181/300)，SAT-TB检出阳性120例，阳性率为40.00%(120/300)，T-SPOT.TB试验检出阳性206例，阳性率为68.67%(206/300)，不同检测方式阳性率比较差异有统计学意义(χ2=111.803，P=0.000)，且T-SPOT.TB试验阳性率高于PPD试验和SAT-TB(χ2=4.549、49.680，P=0.003、0.000)，PPD试验高于SAT-TB(χ2=24.807，P=0.000)。

2.2 不同检测方式诊断效能比较

T-SPOT.TB试验敏感度(80.08%)、阴性预测值(48.94%)、诊断符合率(79.67%)明显高于SAT-TB(45.64%、18.15%、53%)、PPD试验(69.29%、37.81%、70.67%)(P＜0.05)，但特异性、阳性预测值比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

由于涂阴肺结核患者痰液细菌学检测呈阴性，加之痰液培养敏感性低，耗时较长等特点，导致涂阴肺结核患者的诊断存在一定的困难，而大多数患者存在少痰、无痰等情况，涂阴肺结核在肺结核中占比又高，因此寻找涂阴肺结核的诊断方式很有必要[3-4]。

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)进入人体后伴有明显的免疫反应，因此免疫学检测逐渐被应用于肺结核的诊断中，而PPD试验和γ-干扰素释放试验是临床常用的免疫学检测方法；PPD试验属于一种基于Ⅳ型的变态反应，其对结核分歧杆菌的识别能力较强，当PPD与结核分歧杆菌融合后，血液中的T淋巴细胞在同类抗原的刺激下，下使得多种可溶性淋巴因子过多释放，导致患者皮肤发生局部红肿硬结[5-6]；SAT-TB是以MTB特异的 rRNA为靶标，对该靶标实施RNA扩增，通过实时检测荧光标记的探针与该扩增产物杂交后释放出的荧光信号强度，以判断待检样本中是否存在结核分枝杆菌[7-8]。本研究中，T-SPOT.TB试验检出阳性率明显高于PPD试验、SAT-TB，说明T-SPOT.TB试验的检出效果更好。T-SPOT.TB试验作为一种免疫学检测方式，其检测结果不受个人免疫能力差异以及环境中分枝杆菌浓度、个体卡介苗接种的影响，同时，其是通过血液检测的方式实施诊断，在一天内就可以获得结果，具有高效、操作简单、影响因素少等特点，因此T-SPOT.TB试验相比其他两种发生具有更高的检出率[9-10]。另外，本结果显示，T-SPOT.TB试验敏感度、阴性预测值、诊断符合率均高于SAT-TB、PPD试验(P＜0.05)，说明与PPD试验、SAT-TB比较，T-SPOT.TB试验具有更高的敏感度。PPD试验容易受到交叉反应、机体免疫力、结果判读医师差异、卡介苗接种以及非结核分歧杆菌浓度的影响，导致其敏感度和特异性下降。既往研究显示[11-12]，SAT-TB在涂片阳性的标本中敏感度及特异度均很高，可以达到95%，但在涂片阴性的标本中敏感度大幅度降低，仅40%左右，由于本研究中所选病例都是涂阴肺结核患者，因此其敏感度明显下降。T-SPOT.TB试验敏感度明显升高，分析为T-SPOT.TB试验是以T 细胞为基础的一种结核感染后体外检测方法，其能够通过检测样本中特异性细胞因子γ- 干扰素水平，判断患者体内有无针对MTB的特异性T细胞免疫反应，其干扰因素少，且可以定量分析结果，避免了因不同判定标准导致的误差[13-14]。值得注意的是，本研究中三组检测方式特异性比较差异并无统计学意义，与既往研究存在差异[15-16]，分析原因可能与病例差异有关。

综上所述，与PPD试验、SAT-TB检测比较，T-SPOT.TB试验用于检测涂阴肺结核患者可以提升检测的检查率和敏感度，其具有干扰因素少、高效、操作简单等优势，可以作为涂阴肺结核患者的有效检测方式。