肺炎支原体肺炎患儿血浆唾液酸的表达水平及临床意义

李长青，靳秀红，闫伟玲

（1.新郑市人民医院儿科，河南 新郑 451100；2.河南省儿童医院呼吸科，河南 郑州 450000）

肺炎支原体肺炎 （Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP） 是小儿肺炎的常见类型之一，其发病机制尚未完全明确。近年来，我国儿童MPP 发病率有逐渐升高之势[1]。 寻找潜在的生物学标记物对早期诊治MPP 有重要意义。与成年人相比，儿童的免疫系统尚未成熟。 MPP 的发病机制与免疫炎症紊乱有关，既往研究显示，炎症细胞因子与儿童MPP 的疾病严重程度有关[2]。 唾液酸是细胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，有免疫调节作用，对肿瘤和感染性疾病的发生和发展起到重要作用[3]。Mi 等[4]发现，MPP 患儿唾液酸表达水平明显高于健康儿童，并且急性期和恢复期唾液酸水平与C3 呈正相关。唾液酸在儿童MPP 中的作用需要进一步探讨。本研究旨在分析血浆唾液酸在儿童MPP 诊断、疗效中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月-2019年1月本院收治的110 例急性期MPP 患儿为研究对象，其中轻度组59 例，重度组51 例。 纳入标准：⑴符合《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识(2015年版)》[5]中MPP 的诊断标准；⑵病例资料完整。 排除标准：⑴合并其他病原菌感染； ⑵既往有支气管哮喘和反复呼吸道感染；⑶免疫缺陷疾病；⑷严重心肝肾功能异常。 病情严重程度评价标准[5]轻度：年龄＜3岁且呼吸频率＜70 次/min，或年龄≥3岁且呼吸频率＜50 次/min，进食正常、无脱水。 重度：年龄＜3岁且呼吸频率≥70 次/min，或年龄≥3岁且呼吸频率≥50 次/min，有紫绀、鼻翼煽动、厌食和脱水等症状，有胸腔积液，有肺坏死/肺脓肿等并发症。 所有患儿均按照《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识(2015年版)进行规范化治疗。 MPP 恢复期标准：体温正常，咳嗽症状明显减轻＞2d，或胸片显示阴影明显吸收[6]。 本研究中出院前24h 时达恢复期患儿89 例。

另选取健康患儿40 例为对照，纳入标准：无传染病史，近1月内未服用任何药物，无过敏性疾病。 本研究已经过本院伦理委员会批准（2018015025），所有儿童家属均知情和同意。

1.2 血浆指标检测方法 采集MPP 患儿晨起空腹肘静脉血5ml。2500rmp、4℃离心10min，收集血浆。用酶联免疫吸附试验检测血浆唾液酸、γ-干扰素（interferon-γ，INF-γ）、白细胞介素（interleukin，IL）-4、IL-17、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte -macrophage colony stimulating factor，GM -CSF），试剂盒均购于上海恪敏生物科技有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0 软件进行统计学分析；计量资料用表示，用独立样本t 检验或单因素方差分析（两两比较用LSD 检验）；计数资料采用卡方检验； 相关性分析采用Pearson 法； 绘制ROC 曲线分析血浆指标预测MPP 严重程度及疗效的价值。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 MPP 组和对照组年龄、性别、体重和身高的比较无统计学差异（P＞0.05），组间可比，见表1。

表1 MPP 组和对照组一般资料比较

2.2 血浆各指标水平比较 对照组、轻度组和重度组血浆唾液酸、INF-γ、IL-4、IL-17、GM-CSF 水平的组间差异有统计学差异（P＜0.05）。 两两比较结果显示，与对照组比较，轻度组和重度组血浆唾液酸、INF-γ、IL-17、GM-CSF 水平明显较高，而IL-4水平较低（P＜0.05）。 与轻度组比较，重度组血浆唾液 酸、INF-γ、IL-17、GM-CSF 水 平 明 显 较 高，而IL-4 水平较低（P＜0.05），见表2。

表2 血浆唾液酸、INF- γ、IL- 4、IL- 17、GM- CSF 水平比较（±s）

表2 血浆唾液酸、INF- γ、IL- 4、IL- 17、GM- CSF 水平比较（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与轻度组比较，#P＜0.05。

指标 对照组（n=40） 轻度组（n=59） 重度组（n=51） F 值 P 值唾液酸（mg/l）INF- γ（pg/ml）IL- 4（pg/ml）IL- 17（pg/ml）GM- CSF（pg/ml）70.56±8.23 2125.36±531.00 623.01±140.00 312.69±85.37 5236.39±869.32 82.36±12.00*2453.28±482.34*500.23±116.32*401.69±182.00*7283.69±853.14*98.67±17.64*#2896.36±352.18*#402.68±108.26*#499.37±202.36*#9632.52±1241.02*#57.447 35.344 40.976 16.156 241.288 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 不同指标预测MPP 严重程度的价值比较ROC 曲线分析显示，唾液酸预测MPP 严重程度的ROC 曲线下面积为0.756，明显高于INF -γ（0.655）、IL -4 （0.509）、IL -17 （0.685）、GM -CSF（0.656），见图1。

图1 血浆各指标预测MPP 严重程度的ROC 曲线分析

2.4 血浆唾液酸与INF-γ、IL-4、IL-17、GM-CSF的相关性分析 Pearson 分析结果显示，唾液酸与INF-γ、GM-CSF 呈正相关（P＜0.05），与IL-4、IL-17 无关（P＞0.05），见表3。

表3 血浆唾液酸与INF- γ、IL- 4、IL- 17、GM- CSF 的相关性分析

2.5 出院前24h 时达恢复期患儿血浆各指标水平变化 本研究110 例MPP 患儿中出院前24h 时达恢复期89 例。 与对照组比较，急性期患儿血浆唾液 酸、INF-γ、IL-17、GM-CSF 水 平 明 显 较 高，而IL-4 水平较低（P＜0.05）。 恢复期时患儿唾液酸和GM-CSF 水平明显下降（P＜0.05），而其余指标未见明显变化（P＞0.05），见表4。

表4 急性期和恢复期MPP 患儿血浆各指标水平比较（±s）

表4 急性期和恢复期MPP 患儿血浆各指标水平比较（±s）

指标 对照组（n=40） 急性期（n=89） 恢复期（n=89） F 值 P 值唾液酸（mg/l）INF- γ（pg/ml）IL- 4（pg/ml）IL- 17（pg/ml）GM- CSF（pg/ml）70.56±8.23 2125.36±531.00 623.01±140.00 312.69±85.37 5236.39±869.32 90.36±13.36*2674.36±521.03*458.36±98.36*456.37±68.26*8496.30±111.35*73.36±6.32#2563.24±483.67 469.36±168.36 412.39±185.30 5863.39±856.37#88.473 28.204 38.762 30.865 439.423 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.6 不同指标预测MPP 患儿疗效的价值ROC 曲线分析结果显示，血浆唾液酸预测MPP 患儿出院前24h 达恢复期的ROC 曲线下面积为0.675，高于GM-CSF（0.628），见图2。

图2 ROC 曲线分析血浆指标预测MPP患儿出院前24h 时达恢复期的价值

3 讨论

MPP 是一种轻度、 自限性疾病，但是严重的MPP 可导致严重并发症，例如肺后遗症、脑炎、心肌炎、肝炎和肾炎等[7,8]。 寻找MPP 生物学标记物，不仅有助于疾病的早期诊断，而且有助于监测治疗效果。本研究分析了110 例MPP 患儿和40 例健康儿童，结果显示MPP 患儿血浆唾液酸水平明显高于健康儿童，并且病情越严重，表达水平越高。唾液酸有助于预测MPP 的严重程度和病情转归。

唾液酸是糖蛋白的重要组成部分,与人体健康的疾病密切相关。 人体血液循环中含有大量多功能糖蛋白，由肝脏合成并分泌。 糖链末端的唾液酸可以避免肝糖蛋白的清除，以维持其正常水平。 唾液酸被认为是急性炎症反应的一个重要标志物[9]。有研究显示，唾液酸可以调节IgG 的抗炎活性和B细胞耐受[10]。 肿瘤和感染性疾病患者外周血唾液酸表达水平明显升高[11,12]。目前已发现有70 多种微生物具有唾液酸酶活性，细菌可以产生多种唾液酸酶（NanA、NanB、NanC），使宿主受体暴露，清除免疫球蛋白上的唾液酸，使其功能减弱。 分泌到细胞外的NanC 可以反映肺部感染严重程度[3]。Davril 等[13] 发现慢性支气管炎患者血浆唾液酸水平明显升高，并且与病情严重程度有关。唾液酸在MPP 中的作用既往已有报道，Mi 等[4]发现，MPP 患儿唾液酸表达水平明显高于健康儿童，并且急性期和恢复期唾液酸水平与C3 呈正相关。 国内李明勇等也发现，急性期和恢复期MPP 患儿血清唾液酸表达水平均高于健康对照组。 本研究发现，MPP 患儿血浆唾液酸表达水平明显高于健康患者，并且病情越严重，水平越高。 ROC 曲线分析结果显示，血浆唾液酸预测病情严重程度的价值较高，曲线下面积可达0.756。 结果表明，唾液酸可能参与了MPP的发病机制，可能是MPP 潜在标志物。

过度免疫应答在MPP 的发生发展中到重要作用[14]。 细胞因子是免疫应答过程中的关键分子，被认为可能是MPP 的生物学标志物。因此，本研究还检测了不同严重程度及治疗前后不同细胞因子的变化。 本研究发现，唾液酸与INF-γ、GM-CSF 呈正相关，与IL-4、IL-17 无关。 IFN-γ 是一种由活化的T 细胞和NK 细胞分泌的促炎细胞因子，在肺部感染发病机制中有重要作用[15]。 本研究轻度和重度患者IFN-γ 水平变化与唾液酸类似，但是IFN-γ 预测MPP 严重程度的能力低于唾液酸。 而MPP 患者血浆IFN-γ 和唾液酸的表达水平呈正相关。 但是急性期和恢复期IFN-γ 水平的比较无统计学差异。 IL-17 是由Th17 分泌的细胞因子，是重要的免疫介质，在MPP 中发挥重要作用[16]。 本研究发现，IL-17 与唾液酸表达水平无明显相关性，IL-17 在疗效预测方面的效果也不显著。GM-CSF 是T 细胞分泌的细胞因子，通过巨噬细胞促进IL-6 和IL-1β 的产生，进而促进中性粒细胞浸润肺部[17,18]。 本研究中，GM-CSF 的表达模式与唾液酸类似，在预测MPP 严重程度和疗效方面有一定价值，但是价值略低于唾液酸。 本研究未发现IL-4 在MPP 严重程度和治疗效果预测方面无明显价值，这与Medjo等[19]报道一致。

综上所述，本研究发现MPP 患儿血浆唾液酸表达水平明显高于健康儿童，MPP 病情越严重，唾液酸表达水平越高。 唾液酸与INF-γ、GM-CSF 呈正相关，与IL-4、IL-17 无关。 唾液酸预测MPP 严重程度有一定价值，并且预测效能高于INF-γ、IL-4、IL-17、GMCSF。MPP 恢复期患儿血浆唾液酸和GM-CSF 水平明显下降，但是唾液酸预测MPP 患儿出院前24h达恢复期的效能优于GM-CSF。本研究结果提示唾液酸可能会作为MPP 的生物学标志物，对病情和疗效的预测有一定价值，未来需要进一步探讨唾液酸在MPP 作用的机制。