复发性流产患者PAI-1、TSP-1、D-D水平变化及其临床意义

张亚崴 张利萍 于治芳

作者单位：河北北方学院附属第一医院妇科，河北，张家口075000

复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指连续2 次及以上的自然流产，占孕妇妊娠期间流产总数的15%～20%［1］。RSA 常见的病因有父本或母本染色体异常、子宫生理结构异常、病原感染等，但仍有30%～40%的反复流产原因尚不明确［2］。RSA 的发生对育龄妇女造成极大的身体与精神创伤，给其家庭带来巨大的压力。随着国家二胎政策的开放和人口老龄化的加剧，人们对RSA 也愈加重视。有研究表明，RSA 早期诊断能有效减少RSA 的发生，提高RSA 患者的治疗效果，因此寻找一种有效的RSA诊断方法，对RSA 的预防及预后具有重要的意义［3］。纤溶酶原活化物抑制因子（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）是纤溶系统中调节纤溶活性的重要指标，可保持血管壁通透性，维持血液流动状态，并修复组织。血小板反应蛋白-1（Thrombospondin-1，TSP-1）是发现最早、关注最多的抑制因子，其包含多个TSRs 结构域，可与不同的配体相结合并发挥多种生物学效应，在人体生理和病理调节中发挥着重要。D-二聚体（D-dimer，D-D）是纤维蛋白降解产物，与纤溶系统活性和血栓溶解密切相关。本研究选取PAI-1、TSP-1、D-D 三种检测指标，探讨三者在复发性流产患者血清中的变化，以期为临床提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2019年3月本院收治的184 例复发性流产患者作为RSA 组，根据流产次数分为RSA1 组（流产次数＞3 次）和RSA2 组（流产次数≤3 次）。纳入标准：①经期规律，内分泌检查结果正常；②夫妻染色体检查正常；③生殖系统发育正常；④连续自然流产≥2 次。排除标准：①患有甲状腺疾病或糖尿病；②2月内使用抗凝或者促纤溶药品；③合并患有其他严重肝、肾、心脑血管疾病。④内分泌、遗传、感染等原因所致的流产。RSA 组平均年龄（29.65±2.27）岁，平均孕周（9.05±2.27）周。选取同时期具有正常分娩史、染色体、内分泌等检查均为正常且本次妊娠正常女性172 例作为正常妊娠组，平均年龄（28.05±2.62）岁，平均孕周（9.65±2.61）周。两组年龄、孕周比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准通过，受试者均签署知情同意书。

1.2 实验室检测

两组受试者空腹8 h 后抽取妊娠早期外周血4 mL，以3 000 r/min 速度（r=10 cm）离心10 min，取上清置于EP 管中，置于-80℃备用。采用酶联免疫吸附法对PAI-1、TSP-1、D-D 进行检测，试剂盒购自美国ThermoFisher 公司，具体实验步骤：①包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度，每凹孔加0.3 mL，4℃过夜，贮存冰箱；②洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液洗3 次，每次5 min；③每凹孔加入0.2 mL 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2 h；④洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液洗3 次，每次5 min；⑤加入0.2 mL 用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃作用1～2 h；⑥洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液洗3 次，每次5 min；⑦加入0.2 mL 底物溶液于每个凹孔，室温作用30 min；⑧加终止剂：每凹孔加2 M H2SO40.05 mL；⑨观察记录结果：目测或用酶标比色计测定OD 值。并统计RSA 组胎儿预后情况，根据结果分为流产组和活产组。

1.3 统计学处理

采用SPSS 18.0 统计学软件进行数据分析，计量资料采用（）表示，采用t检验，相关性分析采用Pearson 分析。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比较

RSA组血清PAI-1、TSP-1、D-D含量显著高于正常妊娠组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比较（±s）Table 1 Comparison of PAI-1，TSP-1 and D-D in serum of two groups（±s）

表1 两组血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比较（±s）Table 1 Comparison of PAI-1，TSP-1 and D-D in serum of two groups（±s）

组别RSA 组正常妊娠组t 值P 值n 184 172 PAI-1（ng/mL）38.49±3.38 30.24±2.46 26.178＜0.001 TSP-1（mg/mL）3.72±0.61 2.67±0.42 19.020＜0.001 D-D（mg/mL）1.69±0.31 1.19±0.27 16.180＜0.001

2.2 RSA 组血清中PAI-1、TSP-1、D-D水平的相关性分析

Pearson相关性分析结果显示，RSA组血清PAI-1与TSP-1 表达水平无显著相关性（P＞0.05），PAI-1与D-D 表达水平无显著相关性（P＞0.05），TSP-1 与D-D 表达水平无显著相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 观察组血清中PAI-1、TSP-1、D-D水平的相关性Table 2 Correlation of PAI-1，TSP-1 and D-D levels in serum of women in observation group

2.3 RSA 组PAI-1、TSP-1、D-D水平与预后情况比较

根据RSA 组胎儿预后情况，结果分为流产组（n=98）和活产组（n=89）。流产组血清PAI-1、TSP-1、D-D水平显著高于活产组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 RSA组PAI-1、TSP-1、D-D水平与预后情况比较（±s）Table 3 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis in RSA group（±s）

表3 RSA组PAI-1、TSP-1、D-D水平与预后情况比较（±s）Table 3 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis in RSA group（±s）

组别流产组活产组t 值P 值n 98 86 PAI-1（ng/mL）40.30±4.29 36.94±3.61 6.610＜0.001 TSP-1（mg/mL）2.86±0.53 2.32±0.41 8.287＜0.001 D-D（mg/mL）1.82±0.40 1.59±0.29 5.268＜0.001

2.4 RSA 组流产次数与PAI-1、TSP-1、D-D水平的比较

RSA1 组PAI-1、TSP-1、D-D水平显著高于RSA2 组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 两组PAI-1、TSP-1、D-D水平与预后情况比较（±s）Table 4 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis between the two groups（±s）

表4 两组PAI-1、TSP-1、D-D水平与预后情况比较（±s）Table 4 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis between the two groups（±s）

组别RSA1 组RSA2 组t 值P 值n 82 102 PAI-1（ng/mL）40.95±4.17 37.31±3.54 6.402＜0.001 TSP-1（mg/mL）2.93±0.56 2.46±0.45 6.313＜0.001 D-D（mg/mL）1.84±0.42 1.61±0.30 4.327＜0.001

3 讨论

RSA 是指孕龄妇女发生连续2 次及以上的自然流产，其发病机制较为复杂，反复流产原因尚不完全明确。RSA 早期诊断能有效提高RSA 患者的治疗效果，RSA 早期有效诊断方法对其预防及预后具有重要的意义。文献研究发现，血液中相关因子表达水平与妊娠状态的维持有一定的相关性［4］。

本研究选取PAI-1、TSP-1、D-D 三种检测指标，探讨三者在复发性流产患者血清中的变化及其对预后的预测价值。PAI-1 是一种单链糖蛋白，能特异性地抑制纤溶酶原的激活［5］。纤溶酶活性受到抑制，纤维蛋白及纤维蛋白原清除作用减弱，诱导血栓形成［6］。D-D 是结构最简单的纤维蛋白溶解产物，在正常人血清中浓度较低，D-D水平下降表明机体存在纤维蛋白溶解作用抑制，是机体血液高凝状态的临床评价指标之一［7-8］。近年来有研究发现，妊娠女性血液凝固系统的失衡与病因不明的RSA 存在某种联系，部分RSA 患者经治疗改善凝血状态后均成功分娩［9-10］。本研究显示，RSA 组孕妇血清PAI-1、D-D水平显著高于正常妊娠组，且随着流产次数的增加，患者血清中PAI-1、D-D 表达水平逐渐升高。分析原因可能是，血清PAI-1、D-D水平的上升提示RSA 组孕妇血液处于高凝状态，纤维蛋白清除能力受到抑制，造成子宫内膜上皮组织、胎盘绒毛间隙纤维蛋白积聚，脐动脉和毛细血管通畅性降低，血液灌注量不足，导致胎盘氧气和营养物质运输能力下降，局部微血栓扩张加剧形成梗死灶，最终造成胚胎停止发育或流产［11］。本研究根据胎儿最终结局分组发现，胎儿活产组孕妇血清PAI-1、D-D 表达水平显著低于流产组，也进一步说明了孕妇血液高凝状态对妊娠结局的影响，提示孕妇血清PAI-1、D-D水平检测对于妊娠结局和预后具有一定的参考价值。

TSP-1 是细胞外基质糖蛋白家族中的一员，也是广泛研究的血管抑制因子之一，主要通过TSR 与其相应受体结合，抑制血管生成，调节细胞表面功能，影响细胞迁移和黏附，其在肿瘤复发和转移方面的作用在近年来的研究中引发重点关注［12-13］。TSP-1可以通过竞争结合的方式抑制血管内皮生长因子活性，还能抑制血管内皮细胞增殖和分化，诱导细胞凋亡［14］。动物实验发现TSP-1 在小鼠受精卵分裂早期的表达水平上升，推测TSP-1 可能对于妊娠初期胎盘血管的形成具有重要意义［15］。有文献认为，妊娠初期胎盘血管机能不全是造成流产的潜在原因之一［16］。本研究结果显示，RSA组血清中TSP-1水平显著低于正常妊娠组，且随着流产次数的上升，RSA组TSP-1水平出现增加的趋势，提示TSP-1 表达水平上升可引发RSA 组血管生成抑制作用增强，新生血管数量下降，继而造成妊娠中止。相关性分析结果显示，RSA 组血清PAI-1、D-D、TSP-1水平两两比较无显著相关性，原因尚需要进一步的实验证实。

综上所述，RSA 患者血清PAI-1、TSP-1、D-D水平呈高表达，三者对RSA预后具有一定的临床应用价值。因此，本研究认为，临床应对血清PAI-1、TSP-1、D-D水平进行监测，并进行针对性干预，以降低RSA。