胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达的临床意义及对预后的影响

许震 左云 张永芹 倪晨

作为目前治疗胃癌较为常用的手段，根治性切除术可切除胃癌病灶组织，阻止疾病进展，但由于胃癌早期症状并不显著，发展至晚期，手术效果并不理想，术后极易复发、转移，病死率较高[1,2]。因此，寻找与胃癌患者经根治性切除术治疗后预后不良的相关指标对改善患者预后，降低病死率至关重要。作为叉头框家族中重要的蛋白转录因子，叉头框转录因子1(forkhead box k1，FOXK1)与器官发育、免疫代谢调节密切相关，已被研究证实在肿瘤发生、进展中占据重要地位[3]。作为分泌型细胞外基质蛋白家族一员，脊椎蛋白2(spondin 2，SPON2)具有募集炎性细胞、触发先天免疫反应等多种生物学功能，文献指出，脊椎蛋白2(spondin 2，SPON2)能够参与结直肠癌的发生及发展，且是结直肠癌的治疗靶点[4]。结合FOXK1、SPON2与肿瘤的关系，推测二者可能与胃癌患者预后有关。鉴于此，本研究将重点分析胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达的临床意义及对预后的影响。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究经张家港市第一人民医院医学伦理委员会批准，前瞻性选取医院2017年1月至2019年12月收治的98例胃癌患者作为研究对象。其中男68例，女30例；年龄54～72岁，平均年龄(62.45±1.98)岁；TNM分期[5]：Ⅰ期21例，Ⅱ期33例，Ⅲ期44例。全部患者及家属均知情本项研究，并自愿签署知情同意书。

1.2 入选标准 (1)纳入标准：①胃癌符合《临床肿瘤学》[6]中的诊断标准，并经病理检查确诊；②TNM分期<Ⅳ期；③行腹腔镜胃癌根治性切除术治疗，且术后均行化疗治疗；④胃癌组织标本完好。(2)排除标准：①合并其他恶性肿瘤疾病，如肝癌、肺癌等；②重要器官功能障碍，如心、肝、肾等；③存在广泛性淋巴结转移；④其他部位出现癌转移灶，如肺部、肝部等；⑤合并精神性疾病；⑥术前进行放化疗治疗。

1.3 方法

1.3.1 治疗方法:患者取平卧位，行全身麻醉，建立气腹，将腹腔镜置入，探查腹腔情况，明确病变部位与周围组织关系，采用超声刀对胃周血管进行处理，清扫淋巴结，完整切除肿瘤及远端胃组织后，充分游离贲门、食管，在贲门上方约2 cm处横向切开食管前壁，置入反穿刺器，采用直线切割器将食管残端、十二指肠残端闭死，离断空肠，吻合食管与远端空肠端侧，距吻合口约5 cm处吻合远端、近端空肠的断端；于距脐周约5 cm 处作切口，将切除的肿瘤组织取出，采用蒸馏水冲洗腹腔，于吻合口后方放置引流管，关闭腹腔，缝合创口，手术结束。术后采用SOX方案化疗：注射用奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，规格：50 mg/瓶)，130 mg/m2，静脉滴注，第1天；替吉奥片(齐鲁制药有限公司，规格：替加氟20 mg；吉美嘧啶5.8 mg；奥替拉西钾19.6 mg/片)，40 mg/m2，口服，第1～14天。21 d为1周期，Ⅱ～Ⅲ期患者持续治疗6周期。

1.3.2 基线资料收集方法:设计临床资料调查问卷，收集全部患者基线资料，包括年龄、性别(男、女)、肿瘤最大直径、TNM分期(Ⅰ～Ⅲ期)、术后化疗(是、否)。

1.3.3 实验室指标检测方法:术中获取患者胃癌组织，进行免疫组化学染色检测：经甲醛固定、石蜡包埋制成标本，连续切片(厚度为4 μm)后脱蜡、水化。加入3%过氧化氢-甲醇，孵育10 min，消除其中内源性过氧化物酶活性，加入0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液，在高温高压环境中修复抗原，并在10%正常羊血清中孵育30 min。滴加一抗(FOXK1、SPON2兔抗多克隆抗体)在4℃环境下孵育过夜。待切片恢复至室温，采用非生物素辣根过氧化物酶检测系统进行处理。二氨基联苯胺(diamino benzidine，DAB)显色，在光学镜下对显色程度进行控制，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。由2名资深病理科医师采用双盲法对染色进行评分，若结果不一，则重新审查病例达成一致性意见。在显微镜下选取不同的5个视野，每个视野细胞需≥100个，采用双半定量评分法[7]对免疫组化染色结果进行评估，其中免疫染色程度：无染色0分，淡黄色1分，黄色至棕黄色2分，棕褐色至褐色3分；免疫染色强度：阳性细胞百分比<5%为0分，5%≤阳性细胞百分比≤25%1分；25%<阳性细胞百分比≤75% 2分，75%<阳性细胞百分比3分。FOXK1、SPON2免疫染色程度和强度计分乘积>1为阳性。

1.4 预后评估及分组情况 患者术后均进行为期12个月的随访，于术后1、3、6、9、12个月到院复查，观察并记录2组患者随访期间病死、复发情况，包括局部复发、局部复发并远处转移，先经CT、肿瘤标志物检测，对可以患者进行穿刺活检确认复发情况，以复发、病死为终点事件。

2 结果

2.1 预后情况 全部98例胃癌患者，术后经为期12个月的随访，随访时间1～12个月，平均(6.63±0.89)个月；术后预后不良17例，占17.35%(17/98)。

2.2 2组基线资料、实验室指标比较 预后不良组FOXK1、SPON2阳性表达率高于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)；组间其他资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组基线资料、实验室指标比较

2.3 胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达对预后影响的Logistic回归分析 将FOXK1表达、SPON2表达纳入自变量，对自变量进行赋值，将胃癌患者预后情况作为因变量(1=预后不良，0=预后良好)，经Logistic回归分析检验，结果显示，FOXK1、SPON2表达阳性可能是胃癌患者预后不良的影响因素(OR>1，P<0.05)。见表2、3。

表2 自变量说明

表3 胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达对预后影响的Logistic回归分析

2.4 胃癌组织中FOXK1、SPON2表达预测胃癌患者预后不良风险价值分析 将胃癌患者预后情况作为状态变量(1=预后不良，0=预后良好)，将FOXK1、SPON2表达作为检验变量(FOXK1：1=阳性，0=阴性；SPON2：1=阳性，0=阴性)。绘制ROC曲线图，结果显示，FOXK1阳性、SPON2阳性预测胃癌患者预后不良的AUC分别为0.805(AUC的95%CI：0.698～0.913，P<0.001，灵敏度=0.811，特异度=0.800)、0.803(AUC的95%CI：0.680～0.925，P<0.001，灵敏度=0.905，特异度=0.700)，AUC均>0.80，有一定预测价值。见图1。

图1 胃癌组织中FOXK1、SPON2表达预测胃癌患者预后不良风险价值的ROC曲线图

3 讨论

胃癌细胞发生转移、侵袭不仅是导致胃癌患者预后差的主要原因，也是导致患者病死的根本原因[8]。周颖等[9]研究中指出，胃癌患者预后不良率为38.00%，本研究中，全部98例胃癌患者，术后预后不良17例，占17.35%，低于上述研究，可能与随访时间短有关，仍提示胃癌预后不良发生率较高。因此，寻找一种与胃癌术后预后不良有关的指标，并采取针对性措施干预对改善胃癌患者预后尤为重要。

研究指出，肿瘤的发生、进展涉及多方面因素；其中胃癌发生、进展的分子机制涉及多种癌基因与抑癌基因的参与及表达[10,11]。FOXK1是叉头框(forkhead box，FOX)转录因子家族编码的蛋白质之一，能够参与机体细胞发育及多种病理过程的调控作用[12]。SPON2是一种细胞外基质蛋白，不仅是肿瘤微环境的重要组成部分，还是肿瘤细胞与微环境相互作用的重要分子基础[13]。

本研究结果显示，预后不良组FOXK1、SPON2阳性表达率高于预后良好组，推测FOXK1、SPON2阳性表达可能与胃癌患者预后不良有关。且该推测经进一步Logistic回归分析证实。分析原因在于，FOXK1具有翼螺旋DNA结合结构域，在胚胎、器官等多种细胞发育过程中占据重要地位，研究指出，抑制FOXK1表达可有效抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭[14,15]。此外，邓素华[16]研究中指出，FOXK1蛋白可促进乳腺癌的恶性发展，且其表达越高，患者预后越差。SPON2可以分泌的形式结合到细胞外基质上，介导细胞外基质与细胞间的相互作用，其可促进细胞迁移、侵袭，在肿瘤及其微环境的发展中发挥重要作用[17,18]。研究指出，SPON2在多种肿瘤中表达异常，其过表达可促进肿瘤细胞增殖，增强肿瘤细胞的浸润能力，促进肿瘤组织转移，影响预后[19]。同时，熊晶等[20]研究指出，SPON2与结肠癌转移相关基因1过表达是乳腺癌患者预后的独立影响因素。

最后本研究对FOXK1、SPON2表达预测胃癌患者预后不良风险绘制了ROC曲线，结果显示，FOXK1阳性、SPON2阳性预测胃癌患者预后的AUC分别为0.805、0.803，均>0.80，说明FOXK1、SPON2对胃癌有一定的预测价值。上述结论证实FOXK1阳性、SPON2阳性是胃癌患者预后不良的风险因子，也可用于预测胃癌患者预后不良风险程度。这也提示临床需重点监测组织中FOXK1、SPON2蛋白表达，针对FOXK1、SPON2表达异常者，建议指导增加患者复查频率，叮嘱患者适当锻炼，养成良好的生活、饮食习惯，禁烟酒，少食多餐，以富含维生素、高蛋白食物为主，以降低患者术后预后不良风险。

本研究虽证实胃癌患者组织中FOXK1、SPON2表达可影响患者预后，但曹莉旻等[21]研究中指出，肺癌组织FOXK1、SPON2蛋白阳性表达的患者预后差，二者可能发挥协同作用，参与肺癌的发展，进而影响患者预后，而本文并未对胃癌组织中FOXK1、SPON2表达相关性进行分析，二者是否协同导致胃癌患者预后不良情况发生仍不得知，且本研究中随访时间尚短，胃癌组织中FOXK1、SPON2表达对患者远期预后的影响尚不可知，未来仍需进一步研究。

综上所述，胃癌患者预后不良可能与胃癌组织中FOXK1、SPON2阳性表达有关，临床可指导病理组织中FOXK1、SPON2阳性表达患者缩短其复诊时间，并密切关注患者术后恢复情况，针对性实施相关干预措施，以降低术后预后不良风险。