包头地区2 637例女性HPV感染情况及基因型分析*

邢少姬，李晓敏，何 珊，杨雪毓，尹芳蕊，翟翔宇，刘双杰，张瀚文

(1.包头医学院医学技术与麻醉学院，内蒙古包头 014060；2.包头医学院第一附属医院中心实验室)

据统计，全世界每年大约有27万的妇女因宫颈癌而失去生命，该病死率仍在持续升高，且其发病逐渐趋于年轻化[1]。人类乳头瘤病毒(HPV)长期的持续感染是诱发女性宫颈上皮细胞发生癌变的必要致病因子[2-3]。HPV是一种具有嗜上皮特性的强致病DNA病毒，其亚型种类繁杂高达上百种，由于其致病能力的不同，分为HPV高危型(HPV-HR)与HPV低危型(HPV-LR)两种。现有的研究表明，HPV不同基因型别在不同地区、不同人群间的分布均存在差异[4]。目前尚缺乏有关内蒙古包头地区女性感染HPV情况的任何研究数据。本研究对包头地区2 637名成年女性受检人员进行了常见23种HPV基因型别的检测，初步了解当地女性HPV的感染状况，以利于为当地开展宫颈癌的防治提供一定帮助。

1 对象与方法

1.1对象 收集选用2018年1月至2019年12月在包头市某三甲医院妇科门诊筛检的2 637名女性受检人员作为研究对象，所有入选人员均自愿接受宫颈脱落细胞的采集和HPV的分型检测。纳入标准：籍贯为包头市辖区内的成年女性，有性生活史。排除标准：取样前3 d内有阴道的操作,如冲洗、用药等以及宫颈手术史。

1.2方法

1.2.1细胞DNA提取 取1 mL宫颈脱落细胞液，将其加入于1.5 mL的离心管中，进行13 000转离心10 min，后加入100 μL裂解液于离心后的沉淀细胞中，悬浮沉淀、混匀，沸水加热10 min，再次离心10 min后取上清液备用。

1.2.2HPV基因分型检测 根据试剂盒(产自深圳亚能生物技术公司)说明书配制能够同时检测23种HPV基因型的PCR反应分型检测扩增体系。总体积25 μL，包括：样本DNA 5 μL、PCR反应液12.5 μL、6.5 μL引物混合液及1 μL纯化水。扩增后PCR产物经高温变性处理，然后通过冰盒将其转移至全自动的核酸分子杂交仪内，再进行杂交反应、温育、洗膜和显色及结果的判读。每一组样本的检测都要设置一个阳性对照、一个阴性对照和内标质控品(自身质控，检测DNA提取样本是否加入)。

1.3统计学方法 本次实验所获得数据的统计分析运用SPSS 17.0软件，率的比较采用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1受检人员HPV整体感染类型及构成 2 637名受检人员中检出HPV感染者723名，检出率达27.42 %，发现感染类型主要为单一基因型别，占比达69.02 %，同时存在双重和多重基因型别。见表1。

表1 受检人员HPV感染类型及构成

2.2受检感染人员HPV基因型别分布情况 723名感染人员中检出高危型别16种，低危型别5种，有2种高危型别即HR-73和HR-83未检出。感染率最高的前3位分别是HR-52(6.22 %)、HR-16(6.07 %)和HR-58(3.15 %)。见表2。

表2 感染人员HPV基因型别分布情况

2.3不同年龄段分组人员感染情况 由于美国中期指南确定的HPV筛查年龄已由30岁提前至25岁[5]，因此，本研究年龄组的划分也以25岁作为重要划分界限，同时参考国内同类研究文献[6-7]将受检人员分为18～24岁、25～34岁、35～44岁、45～54岁和≥55岁5个年龄组。受检人员中35～44岁女性HPV的感染率最高，感染率为32.04 %，HPV女性感染率在总体年龄上差异有统计学意义(P<0.05)；各年龄组女性受检人员在双重型别感染率上总体差异也有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 年龄段分组人员感染情况[n(%)]

3 讨论

近年来，如何早期预防和筛查宫颈癌，已然成为了全世界的公共卫生问题。目前，关于宫颈癌的病因已经明确，即与HPV的长期慢性感染密切相关。女性宫颈上皮细胞持续感染HR-HPV后，细胞会异常增生，进而最终导致癌变。从HR-HPV的感染至发展为宫颈癌，此过程较为漫长，大约需要十至十五年的时间[8]。因此,对适龄女性进行HPV的基因分型检测是早期防治宫颈癌的关键手段。

现有的研究发现，人群中HPV的感染非常普遍，其感染率与所生活的地区、年龄、职业和教育程度及对HPV的认知度等有关[8-10]。本次我们研究发现包头地区2 637名受检人员中检出HPV感染723名，总检出率达27.42 %。这一检出率低于近年报道的广东省中山市(37.00 %)[11]和陕西省咸阳地区(32.14 %)[12]，而高于南京六和地区(19.26 %)[13]与珠海市(21.37 %)[14]等。提示包头地区女性也可能属于HPV感染较高风险地区，但还需要扩大样本量开展进一步的流行病学调查，以利于采取有效措施进行预防。在HPV感染的类型上，包头地区多为单一基因型别，占比达69.02 %，低于上述的中山市(79.80 %)，与南京六和地区(72.58 %)，与上海市(71.21 %)[6]较为接近。本次研究结果中感染率最高的前3位HPV基因型均为高危型，分别是HR-52、HR-16和HR-58，这与上海市和中山市的研究结果一致。同时，占比最高前3位HPV基因型也与咸阳地区(HPV16、HPV52、HPV58)、重庆地区(HPV52、HPV16、HPV58)和深圳地区(HPV52、HPV58、HPV16)的报道基本一致，这也进一步印证了有关报道的“我国整体上HPV感染情况多以HPV16、18和52及58型为主[15]”。

本研究中，HPV在各年龄段女性中均可检出，其中35～44岁年龄组HPV的感染率最高，感染率为32.04 %，其次是最小年龄组18～25岁，感染率为27.66 %。HPV女性感染率在年龄上总体差异有统计学意义。35～44岁年龄组HPV感染率之所以最高，可能与此年龄段女性性生活较为活跃，同时缺乏相应个人卫生防护意识等因素有关。本研究结果中特别值得关注的是18～24岁低年龄组的女性人群，从社会发展程度及人口素质对低年龄段的感染率的影响方面考虑，低年龄段女性如果性生活开始年龄较早，且预防保护措施欠缺，性行为影响相关疾病的知识欠缺等都可成为其HPV感染率较高的原因。因此，非常有必要对这一年龄段的女性人群特别加强HPV相关知识的健康宣教，提高其HPV的知晓率。在HPV双重型别感染率上不同年龄受检人员差异有统计学意义，双重感染率在45～54岁出现一个高峰，这可能与女性随年龄增长，其在围绝经期的体内激素水平下降，免疫系统的衰退等有关。

宫颈癌的形成是一个循序渐进的过程。当前感染者便是将来宫颈癌患者的潜在人群，故HPV的分型检测的重要性不言而喻，其在宫颈癌的筛查中有着举足轻重的地位。基于本次研究结果，建议包头地区相关机构必须加强HPV相关知识的宣传与教育，提高HPV知晓率，倡导适龄女性及时注射HPV疫苗，并针对性地开展早期预防性筛查，一旦发现感染者，特别是HR-HPV型感染者，应积极采取有效的治疗措施。同时密切关注老年女性的生殖健康，切实有效降低当地女性宫颈癌的发病率。