汇仁肾宝片对脾虚模型大鼠的影响

★ 高羽 胡浩武 李胜华 周青罡 邢小燕 孙晓波（.江西汇仁药业股份有限公司 南昌 33005；.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所 北京 0093）

汇仁肾宝片由22 味中药精制而成，包含淫羊藿、补骨脂、制何首乌、蛇床子、熟地黄、当归、金樱子、黄芪、红参等，具有调和阴阳、温阳补肾、扶正固本的功效，临床上适用于治疗腰腿酸痛、阳痿遗精、精神不振、夜尿频多、畏寒怕冷、妇女月经过多、白带清稀等症状。肾宝片为非处方药，近年来随着用药人群日益广泛，少部分患者偶见恶心、呕吐、腹泻等不良反应。有研究表明有些药物的不良反应多发生于脾胃虚弱患者［1］。为此，本实验建立脾虚大鼠模型，给予肾宝片，观察肾宝片对脾虚模型大鼠的影响，以验证其是否产生某些不良反应，为临床安全使用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 酶标仪（帝肯上海公司）；电子天平（梅特勒托利多仪器上海有限公司）。

SPF 级SD 大鼠70 只，雄性，体质量160～180 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK（京）2016-0006。大鼠饲养环境为屏障系统，室温20～26 ℃，湿度40%～70 %，换气量15 次/h，光照12 h。

肾宝片细粉（江西汇仁药业股份有限公司，批号：1703111）；利血平注射液（天津金耀药业有限公司，批号：140241）；人白细胞介素2（IL-2）试剂盒（批号：A003000）、人白细胞介素6（IL-6）试剂盒（批号：A002998）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）试剂盒（批号A002987）均购于北京易科拜德科技有限公司。

1.2 方法 50 只雄性SD 大鼠适应性饲养7 d 后，随机取10 只为空白对照组，其余动物每日腹腔注射利血平0.5 mg/（kg·d），连续10 d，空白对照组按照同样的方式给予生理盐水。造模结束后，以体重减轻、肛温降低、出现典型的脾虚症状为标准，对造模成功的大鼠进行重新随机分组，分为4组：脾虚模型组及肾宝片高、中、低剂量（1 323、661.5、330.75 mg/kg，分别相当于临床剂量的2 倍、1 倍、0.5 倍）。肾宝片各剂量组灌胃给药，空白对照组、模型组灌胃同体积饮用水。每日1 次，连续给药7 d。

1.3 观测指标 体重测定：用电子天平称量，每周称量1 次。

肛温测定：温度计涂上凡士林后从肛门插入3.5 cm，测量3 次取均值，每天测量。

一般状态观察：倦怠懒动、眯眼、弓背、蜷缩堆聚、粪便溏泄、皮毛干燥情况。每天均进行一般状态情况观察，并进行评分、记录、拍照。评分标准为：无症状计为0 分，轻度症状计为1 分，严重症状计为2 分。

脾脏及胸腺脏器指数测定：实验结束后，将各组动物脱臼处死，解剖剥离脾脏及胸腺，用电子天平称定质量，计算脏器指数。

血清生化指标的测定：末次给药后，各组大鼠禁食不禁水16 h，经腹腔注射100 mg/L 水合氯醛（3.5 mL/kg）麻醉，腹主动脉取血，3 500 r/min 离心15 min 分离血清。采用IL-2、IL-6、TNF-α 测试盒进行检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 18.0 统计学软件分析。计量资料以（±s）表示，行t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对大鼠体重的影响 采用利血平复制大鼠脾虚模型前，各组动物体重均无统计学差异。造模后所有模型动物体重与对照组相比显著下降（P<0.01）。给药7 d 后，各给药组动物体重与模型组相比没有明显差异（P>0.05）。

2.2 对大鼠肛温的影响 采用利血平复制大鼠脾虚模型前后，各组动物肛温均无统计学意义（P>0.05）。给药7 d 后，各组动物肛温仍没有明显差异（P>0.05）。

2.3 对大鼠一般状态的影响 采用利血平造模前，各组动物活动、行为正常，反应机敏，被毛光洁，无眯眼、弓背、蜷缩、大便无稀溏，每只受试动物均未见其它异常表现。造模后，造模组动物出现严重眯眼、弓背、蜷缩、倦怠、粪便时软时稀等症状。给药7 d 后，与模型组比较，肾宝片高、中、低剂量组大鼠精神好转、活动增多、大便由稀变干，一般状态评分显著降低（P<0.01），一般状态有所改善，见表1。

表1 肾宝片对脾虚大鼠一般状态的影响（±s，n=10）分

表1 肾宝片对脾虚大鼠一般状态的影响（±s，n=10）分

注：与对照组比较，#P<0.01；与模型组比较，*P<0.01。

组别造模前造模后给药1 周给药前低剂量组0±04.0±1.6#0.9±0.6#*中剂量组0±04.6±1.1#0.7±0.5#*高剂量组0±05.2±1.4#1.0±0#*对照组0±00±00±0模型组0±04.0±1.7#2.5±0.5#

2.4 对脾虚模型大鼠脏器指数的影响 与对照组比较，模型组的胸腺重量指数、脾脏重量指数无显著差异；与模型组比较，各给药组的胸腺重量指数、脾脏重量指数无显著差异。

2.5 对脾虚模型大鼠血清生化指标的影响 与对照组比较，模型组血清的IL-2 明显降低（P<0.05）；与模型组比较，肾宝片各给药组的IL-2、IL-6、TNF-α 含量无显著差异，但高剂量组对IL-2 有一定程度的升高。见表2。

表2 肾宝片对脾虚模型大鼠血清生化指标的影响（±s，n=10） pg/mL

表2 肾宝片对脾虚模型大鼠血清生化指标的影响（±s，n=10） pg/mL

注：与对照组比较，#P<0.05。

组别IL-2IL-6TNF-α低剂量组 621.68±77.4858.65±9.8380.04±14.60中剂量组 585.02±66.8759.30±4.5476.25±3.94高剂量组 669.23±117.4161.07±11.0585.49±13.33对照组626.08±102.5962.17±7.8680.51±15.21模型组562.71±122.64#57.15±14.2480.31±19.35

3 讨论

利血平所致脾虚证模型是较经典的方法之一［2-3］，本实验采用腹腔注射利血平的方法复制脾虚大鼠模型。大鼠脾虚模型的评估标准主要是体质量下降，消瘦；倦怠，懒动；肛温无明显变化；粪便时软、时溏；食量减少［4］。本实验中，利血平连续注射10 d，造模组大鼠出现体重下降、严重眯眼、弓背、蜷缩、倦怠，粪便时软时稀，偶有便塘等症状，一般状态评分显著降低，类似中医脾虚的临床表现，说明脾虚大鼠模型造模成功。

脾虚状态下，造血系统功能减弱，气血化生不足，引起免疫系统功能异常［5］。脾脏和胸腺指数以及细胞因子如IL-2、IL-6 与TNF-α 是反映动物机体免疫功能的最基本的指标［6］。本实验结果显示，与模型组比较，肾宝片高剂量组对IL-2 有一定程度的升高，提示肾宝片有使脾虚大鼠低下的免疫学指标恢复至正常水平的趋势。

本次实验中，脾虚大鼠给予肾宝片后一般状态得到明显改善，并未引起胃肠道的不良反应，如呕吐、腹泻等，反而大便由稀变干。结合项目组前期进行的肾宝片对正常大鼠长期毒性试验研究，在肾宝片给药6 个月期间动物的外观体征、被毛状态、行为活动、粪便形状及颜色等均无异常［7］。这提示肾宝片在临床使用时少部分患者出现的呕吐、腹泻等胃肠道症状，应该与药物本身无关。究其原因，可能与患者的体质、饮食起居或同时合用其他药物引起药物相互作用等有一定关系。