动物源性食品中60种农药残留检测的前处理方法比较研究

孙华国

（长海县食品检验检测中心，辽宁大连116599）

通过饲料、饮水、环境、消毒等途径引入的农药残留，严重威胁动物源性食品的安全，已经引发社会与公众关注。动物源性食品中农药残留检测的前处理经常采用QuEChERS方法，如GB 23200.37－2016《食品安全国家标准 食品中烯啶虫胺、呋虫胺等20种农药残留量的测定 液相色谱－质谱/质谱法》等。QuEChERS方法具有适用性广、操作便捷等优点，但与此同时，也存在一些问题。一是石墨化炭黑除了吸附色素外，还会少量吸附农残目标物；二是经常会出现漏液的问题，如乙腈、乙酸乙酯的漏液，导致结果偏差；三是操作过程需要反复拧离心管螺盖；四是需要离心机等辅助设备。

本文对动物源性食品中60种农药残留检测的前处理方法进行研究，分别采用QuEChERS方法和固相萃取柱法（SPE方法），其中，对QuECh-ERS方法进行改进，主要是没有加入石墨化炭黑；SPE小柱采用的是含有二氧化锆填料的复合柱。进而对两种方法的准确度、精密度、操作便捷性等因素进行对比研究。

一、材料与方法

（一）材料、试剂与仪器样品：猪肉、牛奶。试剂：乙腈（色谱级）、氯化钠（分析纯）、乙酸铅（分析纯）、超纯水。QuEChERS（Cat.No：EQ－053）：含50 mgPSA、100 mgC18、50 mg二氧化硅、100 mg无水硫酸镁，购于大连沈源检验检测咨询有限公司。固相萃取柱（Cat.No：E31－6－1000）：购于大连沈源检验检测咨询有限公司。仪器：气相色谱－质谱联用仪（GC－MS）。

标准品：敌敌畏、灭线磷、氟乐灵、甲拌磷、a－六六六、六氯苯、乐果、β－六六六、林丹、五氯硝基苯、乙拌磷、δ－六六六、百菌清、氯唑磷、异稻瘟净、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、七氯、甲基立枯磷、皮蝇磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷、艾氏剂、马拉硫磷、倍硫磷、三氯杀螨醇、毒死蜱、对硫磷、嘧啶磷、环氧七氯、三唑醇、腐霉利、杀扑磷、a－硫丹、氯丹、狄氏剂、丙溴磷、p，p'－DDE、异狄氏剂、β－硫丹、p，p'－DDD、o，p－DDT、乙硫磷、三唑磷、硫丹硫酸盐、p，p'－DDT、苯硫磷、伏杀硫磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑、溴氰菊酯对照品，纯度≥98%。

储备液配置：精确称取上述53种农药对照品，用甲苯分别配制成10 mg/mL的标准储备液，2～8℃冷藏保存，有效期6个月。

（二）仪器参数条件气相色谱条件如下。色谱柱：Agilent－5MS，30 m×0.32 mm×0.25μm。进样口温度：240℃。升温程序：初始温度70℃，保持2 min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12 min。载气：氦气，流速为1.46 mL/min。进样方式：不分流进样。进样量：1.0μL。离子源温度：230℃。接口温度：280℃。溶剂延迟：5.9 min。电子轰击电离源（EI）：选择离子监测模式（SIM），分组监测见表1。

表1 选择离子监测组

（三）实验方法

1.提取方法。（1）SPE方法（猪肉）：称取2 g猪肉样品，加入4 g氯化钠、10 mL乙腈，振荡5 min，6 000 r/min离心2 min，收集上层清液。再向下层加入10 mL乙腈，重复提取一次，合并两次上清液，待净化。（2）SPE方法（牛奶）：称取2 g牛奶样品，加入10 mL乙腈，振荡3 min，再加2 mL 200 g/L乙酸铅溶液、4 g氯化钠，振荡2 min，6 000 r/min离心2 min，收集上层清液。再向下层加入10 mL乙腈，重复提取一次，合并两次上清液，待净化。（3）QuEChERS方法（猪肉）：称取2 g猪肉样品，加入4 g氯化钠、10 mL乙腈，振荡5 min，6 000 r/min离心2 min，收集上层清液。再向下层加入10 mL乙腈，重复提取一次，合并两次上清液。将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1 mL乙腈，超声溶解，待净化。（3）QuEChERS方法（牛奶）：称取2 g牛奶样品，加入10 mL乙腈，振荡3 min，再加2 mL 200 g/L乙酸铅溶液、4 g氯化钠，振荡2 min，6 000 r/min离心2 min，收集上层清液。再向下层加入10 mL乙腈，重复提取一次，合并两次上清液。将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1 mL乙腈，超声溶解，待净化。

2.净化方法。（1）QuEChERS方法：将待净化液转移到2 mL QuEChERS净化管，涡旋混合1 min，8 000 r/min离心2 min，取出上清液，供GC－MS分析。（2）SPE方法操作如下。活化：加入10mL乙腈，弃去流出液。上样：加入待净化液，收集流出液。洗脱：加入5 mL乙腈，收集流出液。复溶：在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1 mL乙腈，混匀，供GC－MS分析。

二、结果与分析

（一）检出限与定量限两种前处理方法的检出限与定量限基本一致。空白猪肉和牛奶中添加60种农药，添加浓度为50μg/kg，信噪比>10，因此定量限确定为50μg/kg；添加浓度为15μg/kg，信噪比>3，因此检出限为15μg/kg。

（二）方法的准确度为了考察方法的准确度和精密度，在空白猪肉和牛奶中分别进行了50 ug/kg的加标回收率试验，每种样品平行测定5份，重复3次，计算平均回收率，结果见表2。总体上看，QuEChERS方法和SPE方法的添加回收率基本上达到了70.0%～115.0%。但对个别农药有差异，其中，在SPE方法中，六氯苯在猪肉、牛奶中的添加回收率为80.1%和72.1%，优于QuECh-ERS方法的67.5%和60.2%；艾氏剂在猪肉、牛奶中的添加回收率为95.6%和78.4%，优于QuEChERS方法的87.9%和69.1%；p，p'－DDE在猪肉、牛奶中的添加回收率为101.2%和79.4%，优于QuEChERS方法的116.1%和68.0%；百菌清在猪肉、牛奶中的添加回收率为45.8%和52.3%，不及QuEChERS方法的80.6%和100.1%。

表2 猪肉、牛奶中60种农药留GC-MS检测的添加回收率结果 （%）

（三）方法的精密度结果表明，在浓度为50 ug/kg的添加回收试验中，批内的变异系数在10%范围内，批间的变异系数在15%范围内。

（四）操作便捷性在前处理方法的操作便捷性方面，SPE方法要明显优于QuEChERS方法，而且QuEChERS方法出现了一定程度的乙腈漏液问题。

三、结论

结果表明，方法准确度方面，QuEChERS和SPE方法的添加回收率基本上达到了70.0%～115.0%。但是，六氯苯、艾氏剂、p，p'－DDE适用于SPE方法，不适用于QuEChERS方法；百菌清适用于QuEChERS方法，不适用于SPE方法。方法的精密度方面，QuEChERS和SPE方法均能够满足需要。操作便捷性方面，SPE方法明显优于QuEChERS方法，而且QuEChERS方法出现了乙腈漏液问题。