UPLC-MS/MS 法测定畜肉中莱克多巴胺

覃弘毅

（南宁市食品药品检验所，广西南宁 530000）

莱克多巴胺是一种人工合成的β-肾上腺受体激动剂，在临床上主要用于治疗支气管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎缩症等。在饲料中添加莱克多巴胺可使动物快速增长，减少脂肪含量，提高瘦肉率。2021 年的3·15 晚会曝光河北沧州青县“瘦肉精”羊肉流入郑州的新闻，其中检出的“瘦肉精”就是莱克多巴胺。若此类肉制品被消费者所食用，会对其身体健康造成损害[1]。

目前我国主要推荐使用GB/T 22286—2008 进行畜肉中莱克多巴胺的监督抽检，但标准中实验步骤相对繁杂，耗时较长，对于技术人员实验操作要求较高。为此，需建立一种稳定性、重复性好，且效率较高的测定方法[2-4]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

莱克多巴胺标准溶液（100 μg/mL，Alta）、莱克多巴胺D3 标准溶液（100 μg/mL，Alta），PCX 固相萃取柱（60 mg/3 mL，Agela）、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶（100 000 units，CNW）、甲醇（HPLC 级，Merck）、乙腈（HPLC级，Merck）、乙酸铵（HPLC 级，CNW）、甲酸（HPLC 级，CNW）、氨水（HPLC 级，CNW）、超纯水（Milli-Q 制备）

1.2 仪器与设备

AB Sciex TripleQuad 4500 三重四极杆质谱仪、Agilent Infinity 1290II 超高效液相色谱仪、IKA MS3 涡旋振荡器、Sigma 2-16 KL 冷冻离心机、Biotage TurboVap 全自动样品浓缩仪、梅特勒 XS205DU 电子天平

1.3 样品处理

称取2 g 试样于50 mL 离心管中，加入8 mL 乙酸铵溶液（pH=5.2），混匀，再加入100 μL 内标溶液（100 ng/mL）和50 μLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，于37 ℃下振荡16 h。再加入高氯酸调节pH 值到1.0，于8 000 r/min 下离心5 min，取全部上清液过PCX 柱（依次用3 mL 甲醇、3 mL 水活化平衡），控制流速在3 mL/min，依次用3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液，抽干，用2 mL5%氨水甲醇洗脱。洗脱液于50 ℃下氮吹至干，加入1 mL5%甲醇水溶液，涡旋10 s 混匀，过0.22 μm 滤膜，上机处理。

1.4 仪器条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse plus（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）；流速：0.4 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：35 ℃；流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：0.1%甲酸乙腈；梯度洗脱程序：0～1 min，90%A；1～1.1 min，90%～80%A；1.1～2.2 min，80%A；2.2～2.8 min，80%～5%A；2.8～3.3 min，5%A；3.3～3.4 min，5%～90%A；3.4～4.0 min，90%A。

1.4.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI+）；扫描模式：多反应离子监测（MRM）；温度（TEM）：550 ℃；喷雾电压（IS）：5 500 V；气帘气（CUR）：30 psi；雾化气（GS1）：55 psi；辅助加热气（GS2）：55 psi。莱克多巴胺及其内标的质谱参数见表1，莱克多巴胺及其内标的提取离子色谱图见图1。

图1 莱克多巴胺及其内标的提取离子色谱图

表1 莱克多巴胺及其内标的质谱参数

2 结果与分析

2.1 内标的选择

在现行标准中使用较多的GB/T 22286—2008，采用沙丁胺醇D3 作为莱克多巴胺的内标进行计算。然而由于性质上存在差异，其回收率不高，且不稳定，因此本次实验采用莱克多巴胺的同位素氘代物作为内标，其在性质上更接近本体，因此回收率更好、更加稳定。

2.2 前处理条件的优化

GB/T 22286—2008 实验步骤中，经高氯酸调节pH 后的样品溶液，需使用氢氧化钠溶液调节pH，使莱克多巴胺转化为分子态，再经异丙醇-乙酸乙酯溶液萃取浓缩，复溶后作为固相萃取上样溶液。本次实验直接使用经高氯酸调节pH 后的样品溶液作为上样溶液，省去了国标方法中的后续步骤，节省前处理时间。根据实验原理，高氯酸调节pH 为酸性后，莱克多巴胺已成离子状态[5]，满足PCX 对上样溶液中目标物形态的要求，确保能够吸附目标物。实验结果表明，该方法的灵敏度及准确度也未受到明显影响。

2.3 线性范围、定量限、回收率和精密度

精密移取莱克多巴胺和莱克多巴胺D3 标准品溶液适量，相应稀释成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL 和10.0 ng/mL，其中各工作曲线溶液中内标的浓度为10 ng/mL。依次上机测定，拟合线性回归方程见图2，为y=0.201 89x-7.582 13×10-4。

图2 莱克多巴胺的线性拟合方程

在空白样品中加入适量标准品溶液。经测定后，以满足信噪比（S/N）＞10 且添加回收率RSD（n=6）≤20%的最小加标水平作为本方法的定量限（LOQ）。分别按LOQ、5 倍LOQ、10 倍LOQ这3 个加标水平进行加标实验，每个浓度水平设置6 个平行试样，结果均满足GB/T 27404—2008 中关于方法确认的要求[6]，详见表2。

表2 莱克多巴胺的线性范围、定量限、回收率和精密度数据

2.4 实际样品测定

取100 份样品作为实际样品测试，其中50 份为猪肉、30 份为牛肉、10 份为羊肉、10 份为猪肝，均未检出莱克多巴胺。盲样测试结果为4.82 μg/kg，准确度为109%。

3 结论

本文以常见畜肉为分析样本，建立了以莱克多巴胺为分析目标物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。该方法准确度高、重复性好、稳定、快捷、定量限满足国家标准要求。在实际应用中，可为在畜肉中非法添加莱克多巴胺的食品安全处置工作提供高通量的技术手段。