腹腔镜手术对子宫内膜异位症患者Gelactin-3和VEGF蛋白表达水平的影响

柳燕飞 刘雯雯 郭 蕾 张 艺 高天旸

广东省第二人民医院1.妇科；2.生殖医学中心，广东 广州 510317

子宫内膜异位症是一种常见的妇科疾病，发病率约为10%。子宫内膜异位症患者不孕不育的发病风险约为健康女性的20倍，是引起女性不孕不育的主要原因［1-2］。子宫内膜容受性是指子宫内膜接受胚胎着床的能力，子宫内膜只有在月经周期的特定短暂时期具备接受胚胎植入的能力，该时期称为“胚胎植入态”。研究显示，半乳糖凝集素-3（Gelactin-3）在子宫内膜“胚胎植入态”时期表达量显著增加［3-4］，说明当女性体内Gelactin-3表达量增加时，子宫内膜具备接受胚胎植入的能力，女性受孕几率增加。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以参与新血管的形成，而血管生成在子宫内膜异位症中发挥重要作用，因此，VEGF可能参与子宫内膜异位症的发生发展［5］。腹腔镜检查及手术治疗是临床常见的治疗子宫内膜异位症的方式之一，但腹腔镜治疗是否可以提高女性患者子宫内膜容受度，目前暂缺乏相关证据。本研究通过检查女性患者手术前后Gelactin-3和VEGF的表达水平，分析腹腔镜治疗对子宫内膜异位症患者子宫内膜容受性的疗效，为临床上腹腔镜治疗提供更多的理论依据。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

收集2018年9月—2020年8月在我院就诊并接受腹腔镜治疗的子宫内膜异位症女性患者，共105例。根据美国生育学会提出的“ASRM修正子宫内膜异位症分期法”将其分为Ⅰ、Ⅱ期（57例），Ⅲ期（35例），Ⅳ期（13例）。纳入标准：（1）腹腔镜检查和病理检查确定为子宫内膜异位症，并接受腹腔镜治疗的患者；（2）患者年龄23～42岁；（3）夫妻正常性生活且未采取避孕措施1年以上未妊娠；（4）月经周期规律，周期为26～32天；（5）无内分泌、免疫和代谢性疾病；（6）手术前3个月未接受其他治疗。对照组患者选择因输卵管不孕、卵巢良性病变等接受腹腔镜治疗的患者，子宫内膜正常，共纳入110例。

1.2 样本收集

（1）血清样本收集：所有患者在手术前后抽取外周静脉血，离心后分离血清，-80℃冰箱保存；（2）子宫内膜标本采集：分别采集两组患者手术前后的子宫内膜，避免排卵期对子宫内膜的影响，采集时间为手术前后月经周期的第19～22天，采集后组织放置于10%中性福尔马林中固定保存。采集方法：使用子宫内膜采集器（北京赛普九洲科技发展有限公司生产）采集患者的子宫内膜。所有患者取膀胱截石位，暴露阴道和宫颈，将采集器置入患者宫腔底部，推出采集器的外套管，释放采集环，将采集器顺时针转动15圈左右，将其退回外套中，并将采集器退出宫腔。

1.3 Gelactin-3和VEGF表达水平检测

1.3.1 酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中Gelactin-3和VEGF表达水平（1）稀释标准品，制作标准曲线；（2）在样本孔中加入血清样本，37℃放置2 h；（3）加入酶结合物工作液，37℃放置45 min；（4）加入底物，37℃放置15 min，加入终止液终止反应；（5）使用酶标仪在450 nm波长检测吸光度，根据标准曲线计算血清中Gelactin-3和VEGF浓度。

1.3.2 免疫组化检测子宫内膜Gelactin-3和VEGF表达水平 多聚甲醛固定采集的子宫内膜样本，石蜡包埋后将其分别置于二甲苯、100%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中脱蜡水化。PBS清洗后，滴加封闭液封闭。封闭完成后添加单克隆小鼠抗人Galectin-3或VEGF抗体，4℃过夜。PBS清洗后添加二抗，37℃放置30 min。添加显色液，观察切片颜色。当切片颜色变成褐色时，用水洗掉显色液。苏木素复染后用PBS清洗。将切片分别放置于95%乙醇、100%乙醇中脱水，再放置于二甲苯中使其变透明，最后采用中性树胶封片，显微镜观察计数。计数标准：随机选取5个不同视野，计数5个视野中阳性着色细胞，求取平均值。

1.4 统计学处理

所有数据均采用SPSS 22.0进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示，两组比较采用独立样本t检验，治疗前后比较采用配对t检验；计数资料采用频数与相对数表示，组间比较采用卡方检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 血清中Gelactin-3和VEGF表达水平

子宫内膜异位症患者手术前Gelactin-3水平显著低于对照组，而VEGF表达则显著高于对照组；经过手术治疗后，子宫内膜异位症患者Gelactin-3表达显著升高，而VEGF则显著降低，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。对照组患者手术治疗前后Gelactin-3和VEGF水平均无显著变化。见表1。

表1 两组患者手术前后血清中Gelactin-3和VEGF表达水平（±s，pg/mL）

表1 两组患者手术前后血清中Gelactin-3和VEGF表达水平（±s，pg/mL）

2.2 子宫内膜组织中Gelactin-3和VEGF表达

与血清中Gelactin-3和VEGF表达结果一致。手术治疗可以提高子宫内膜异位症患者子宫内膜组织的Gelactin-3水平，并降低VEGF水平，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。对照组患者手术前后Gelactin-3和VEGF水平均无显著变化。见表2。

表2 两组患者手术前后子宫内膜组织中Gelactin-3和VEGF表达水平比较（±s）

表2 两组患者手术前后子宫内膜组织中Gelactin-3和VEGF表达水平比较（±s）

3 讨论

子宫内膜异位症是一种生育期妇女常见的慢性炎症性疾病，是女性不孕不育的主要原因之一。其基本病理变化是异位的内膜细胞增生黏附、侵袭和血管生成等，导致周围纤维组织增生、粘连、形成结节或囊肿等［6-8］。子宫内膜异位症的发病原因不明，目前的治疗方式无法从根本上治愈，其引发的疼痛、不孕和性生活异常极大地影响了患者的心理健康和生活质量［9］。目前临床上常见的治疗手段是腹腔镜手术，通过手术可以定点治疗异位组织，显著提高患者的妊娠率［10-11］，但腹腔镜手术治疗目前仍存在较大的争议，需进一步在临床研究评估其价值。本研究旨在探讨腹腔镜治疗对子宫内膜异位症患者子宫内膜容受性的治疗效果，为临床上腹腔镜治疗提供更多的理论依据。

新血管生成是子宫内膜异位发生的关键过程，而VEGF是参与调控血管生成最重要的血管生成因子［12］，其主要功能包括促进内皮细胞分裂、刺激新血管生成、提高血管通透性等。目前研究显示，子宫内膜异位症患者的血清、腹腔液和子宫内膜组织中VEGF的表达均显著高于健康妇女，且子宫内膜异位症越严重的患者，VEGF表达量越高［13-15］。推测VEGF可以促进异位病灶血管的生长，为内膜异位提供了生长环境。本研究结果显示，子宫内膜异位症患者血清和子宫内膜组织中的VEGF水平均显著高于对照组患者，与其他研究结果一致［16］，提示VEGF表达可能可以作为诊断子宫内膜异位症的分子标志物之一。子宫内膜异位症患者接受腹腔镜手术治疗后，血清和子宫内膜组织中的VEGF水平均显著降低，说明腹腔镜手术可以缓解子宫内膜异位症患者的病情，改善其不孕症状。

Galectin-3是一种结合蛋白，可以参与细胞黏附、凋亡、分化、迁移等多种生理病理过程［17］。有研究表明，Galectin-3的表达与子宫内膜异位症之间具有一定的相关性［18-19］。也有文献报道，Galectin-3在子宫内膜容受的植入窗期表达量显著增加，在异位内膜组织中的表达显著低于正常子宫内膜，其表达量与不孕不育可能存在一定的相关性［20］。本研究结果显示，Galectin-3在子宫内膜异位症患者血清和子宫内膜组织中的表达量显著低于对照组患者，接受腹腔镜手术治疗后，其表达量升高，说明Galectin-3可能参与了子宫内膜异位症的发生、发展过程。

综上所述，VEGF和Galectin-3可能参与子宫内膜异位症的发生发展，而腹腔镜手术可以显著降低VEGF的表达，并增加Galectin-3表达，可以改善子宫内膜异位症患者的病情，增加其妊娠率，该结果为临床上进一步使用腹腔镜治疗提供了理论依据。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突