气相色谱法测定复方猪油膏中异龙脑含量的效果分析

舒 娟，石玉梅，徐晓芳，袁景祥

（1. 铜仁市检验检测院，贵州 铜仁 554300 ；2. 铜仁市袁家寺骨科医院，贵州 铜仁 554300）

复方猪油膏是袁氏家族的祖传秘方，属于我国地道的民族民间药物。2003 年袁氏家族创建了铜仁袁家寺骨科医院，并在院内新建了10 万级层流净化猪油膏制剂室。2014年2 月该院复方猪油膏的制作通过了省、市食品药品监督管理局的现场评审。复方猪油膏由冰片、自然铜、黄丹、麝香、龙骨、滑石粉、猪油七味中药组成，可祛脓拔毒、生肌、镇痛、促进骨痂的生长和组织细胞的修复、缩短骨折愈合的时间。用此药治疗跌打损伤、瘀血肿痛、痛风、关节肿痛、风湿热痹的疗效显著，且对急慢性骨髓炎（骨蚀）也有一定的疗效[1-2]。此药的原质量控制标准过于简单，不能有效地控制其质量。为了加强对复方猪油膏进行质量控制，应对此药中药物活性成分的含量进行有效的测定[3-5]。本文主要是探讨用气相色谱（gas chromatography，GC）法测定复方猪油膏中异龙脑含量的效果。

1 仪器与试药

1.1 试药

分析纯为乙酸乙酯（由天津市富宇精细化工有限公司提供）和水杨酸甲酯（由天津市光复精细化工研究所提供），异龙脑（由111512-201904 中国食品药品检定研究院提供），16 个不同批次的复方猪油膏样品（由铜仁袁家寺骨科医院提供），复方猪油膏阴性对照品（由铜仁袁家寺骨科医院提供）。

1.2 仪器

岛津GC2014 气相色谱仪，AOC20i 自动进样装置，METTLER TOLEDO-XPE56 百万分之一天平，METTLER TOLEDO-XPE105 十万分之一天平，KQ-500E 超声波清洗器。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 内标溶液的制备 精密量取水杨酸甲酯5 mL，置于1000 mL 的量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为内标溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取异龙脑对照品适量，加入内标溶液制成每l mL 含异龙脑1.26970 mg 的溶液（即对照品溶液）。吸取对照品溶液1 μL，注入气相色谱仪内，计算校正因子。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密称取复方猪油膏1 g，置于具塞锥形瓶中，加入内标溶液10 mL，称定重量。对溶液进行5 min 的超声处理，放冷后再称定重量，并用内标溶液补足减失的重量。将溶液摇匀后进行滤过处理，取续滤液过0.45 μm 的滤膜，即制得供试品溶液。

2.1.4 阴性对照溶液的制备 将复方猪油膏处方中的冰片去除，余药按复方猪油膏的制备工艺进行制备，制成阴性对照品，按 2.1.3 项下的方法制备成阴性对照溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱为以Rtx®-1701 为固定相的毛细管柱（柱长为30 m，内径为0.32 mm，膜厚度为0.25 μm），柱温为120℃，进样口温度为200℃，火焰离子检测器（flame ionization detector，FID）的温度为200℃，进样方式为分流式进样，分流比为20:1。理论板数为水杨酸甲酯峰不低于2500。

2.3 线性关系考察

精密称取异龙脑对照品适量，加入内标溶液制成每l mL含异龙脑3.17425 mg 的溶液（即对照品溶液）。精密吸取对照品溶液0.8 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分别置于10 mL 的量瓶中，加入内标溶液稀释至刻度。精密吸取各浓度对照品溶液1 μL，注入气相色谱仪中进行检测（色谱条件如上），以峰面积A 对浓度（mg/mL）进行线性回归计算，得到线性回归方程 y=719359x+267526，R2=0.999。这表明，异龙脑在0.25394 ～3.17425 mg/mL范围内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液1 μL，重复进样6 次，计算得到相对标准偏差（RSD）为0.87%。这表明，该检测方法的精密度良好。

2.5 样品稳定性试验

取复方猪油膏样品（批号20190803），按照2.1.3 项下的方法制成供试品溶液，分别于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 进样测定（色谱条件如上）异龙脑的峰面积并计算其平均含量。测定的结果显示，异龙脑的RSD 为1.18%。这表明，供试品溶液在24 h 内的稳定性良好。

2.6 重复性试验

取复方猪油膏样品（批号20190803），按照2.1.3 项下的方法制成供试品溶液。将供试品溶液平均分成6 份，用GC 法并按照上述色谱条件对6 份供试品溶液进行测定，分别记录其峰面积并计算其平均含量。结果显示，异龙脑的RSD 为1.36%。这表明，该检测方法的重复性良好。

2.7 回收率试验

采用加标回收法，精密称取6 份已知含量的复方猪油膏样品（批号为20190803，异龙脑的含量为16.80 mg/g），置于10 mL 的容量瓶中，精密加入异龙脑对照品溶液（浓度为1.2697 mg/mL）4 mL。采用2.1.1 项下的方法制成内标溶液，将溶液稀释至刻度。按2.1.3 项下的方法制成供试品溶液，并采用GC 法按上述色谱条件对内标溶液进行测定。测定的结果显示，异龙脑的平均回收率为94.43%，RSD 为0.70%（n=6）。详见表1。这表明，该检测方法具有良好的回收率。

表1 复方猪油膏加样回收率试验结果（n=6）

2.8 样品测定

取16 批次复方猪油膏样品，将其按照2.1.3 项下的方法制成供试品溶液。采用GC 法按上述色谱条件对供试品溶液进行测定，每批次样品均测定3 次，16 批次样品中异龙脑含量的测定结果见表2。

表2 复方猪油膏样品的测定结果

2.9 专属性试验

按2.1.4 项下的方法制备阴性对照溶液。分别吸取阴性对照溶液、对照品溶液与供试品溶液各1 μL，采用GC法按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。阴性对照溶液、对照品溶液与供试品溶液的色谱图见图1。

图1 阴性对照溶液、对照品溶液与供试品溶液的色谱图

3 讨论

复方猪油膏属于我国地道的民族民间药物。在100 余年的使用过程中，复方猪油膏被证实具有续筋接骨、活血化瘀、祛腐生肌的功效，同时对水、火烫伤也有一定的治疗作用。本文建立了复方猪油膏的质量控制方法。复方猪油膏处方中的冰片（合成龙脑）为君药，具有开窍醒神、清热止痛之功效，其主要药物活性成分为异龙脑[6-8]。GC法是一种以气体为流动相的色谱分析方法，主要用于分离分析易挥发的物质。本研究在采用GC 法测定复方猪油膏中异龙脑的含量时，在上述色谱条件下阴性样品在异龙脑吸收峰位置无干扰峰，这说明采用GC 法测定复方猪油膏中异龙脑含量的重现性良好，结果准确度高。

综上所述，用GC 法测定复方猪油膏中异龙脑的含量具有精密性、重复性、稳定性良好及加样回收率高等优点，可用于对复方猪油膏进行质量控制。