GC法测定十四味连黄烧伤软膏中龙脑和异龙脑的含量

周秀红 李成网 刘增辉 白娟 朱倩云

GC法测定十四味连黄烧伤软膏中龙脑和异龙脑的含量

周秀红 李成网 刘增辉 白娟 朱倩云

目的 建立十四味连黄烧伤软膏中龙脑和异龙脑的含量测定方法。方法 采用聚乙二醇(PEG)-毛细血管柱(30 m×320 μm×0.25 μm), 以萘为内标物, 流速：0.8 ml/min, 柱温：140℃,进样口温度210 ℃, FID检测器, 检测器温度为250 ℃。结果 龙脑和异龙脑分别在19.22~192.2、15.19~151.90 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9994、r=0.9993, n=6)；平均加样回收率分别为98.42%和97.80% (RSD为0.80%、1.21%, n=9)。结论 本法简便、准确、灵敏度高、重复性好, 可用于测定十四味连黄烧伤软膏的质量控制。

十四味连黄烧伤软膏；龙脑；异龙脑；萘；气相色谱法

十四味连黄烧伤软膏由冰片、黄连、紫草等十四味药制成, 具有清热解毒、收敛、生肌、止痛之功, 用于各种烧、烫、灼伤。其中冰片来源于龙脑香科植物龙脑香的树脂, 味辛、苦、微寒, 具有开窍醒神、清热散毒的功效［1］, 为方中使药。冰片中含有龙脑和异龙脑, 为更好的控制制剂的质量, 采用气相色谱法测定十四味烧伤软膏中龙脑和异龙脑的含量［2,3］。结果表明：本法简便、准确、重现性好。

1 仪器与试药

1.1仪器 HP-6890气相色谱仪(美国惠普公司)。

1.2试药 龙脑、异龙脑对照品(中国生物制品检定所, 批号：110881-201107、110881-200802, 供含量测定用)；萘(Aladdin Chemistry Co.Ltd, 批号:14328)；十四味连黄烧伤软膏和阴性制剂(安庆市石化医院提供)；试剂：均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：聚乙二醇(PEG)-毛细管柱(30 m×320 μm×0.25 μm)；柱温：140℃；载气流量(N2)：0.8 ml/min (不分流模式)；进样口温度：210℃；检测器温度：250℃；氢气流速： 40 ml/min；空气流速： 400 ml/min；符合药典规定。供试品中异龙脑、龙脑所对应的峰保留时间与对照品峰保留时间一致, 而阴性空白无干扰。见图1~3。

2.2内标溶液的制备 称取萘约0.003 g, 精密称定, 置100 ml容量瓶中, 加环己烷定容至刻度, 得每1 ml含0.03 mg的内标溶液。

图1 对照品溶液(A异龙脑 ；B 龙脑；C 萘)

图2 样品溶液(A异龙脑 ；B 龙脑；C 萘)

图3 阴性空白溶液（C 萘）

2.3对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的龙脑和异龙脑对照品各约2 mg, 精密称定, 置10 ml量瓶中, 加内标溶液定容至刻度, 得每1 ml含龙脑0.192 2 mg和异龙脑0.151 9 mg的混合对照品溶液。

2.4供试品溶液的制备 取样品约2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中。精密加入萘内标溶液20 ml, 密塞, 称定重量, 超声处理10 min, 放冷, 再称定重量, 用内标溶液补足减失的重量,滤过, 取续滤液, 即得。

2.5阴性样品的制备 按“2.4供试品溶液的制备”项下方法制备阴性对照溶液。

2.6校正因子的测定 精密吸取混合对照品溶液0.6 ml置于1 ml量瓶中, 加内标溶液稀释至刻度, 摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液各2 μl, 依次注入气相色谱仪中, 按上述色谱条件测定。计算龙脑校正因子为f=1.422 2(n=6), RSD=0.57%；异龙脑校正因子为f=1.399 6, RSD=1.33%。

2.7线性范围的考察 精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml, 分别置1 ml量瓶中, 加内标溶液稀释至刻度, 摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液各2 μl, 依次注入气相色谱仪中, 按上述色谱条件测定, 以对照品的浓度(X)为横坐标, 对照品的峰面积值与内标峰面积之比(Y)为纵坐标, 求得龙脑线性回归方程为：Y=24.715 4X+0.016 4, r=0.999 4(n=6), 异龙脑线性回归方程为：Y=25.133 1X+0.007 8, r=0.999 3(n=9)。结果表明, 龙脑和异龙脑分别在19.22~192.2 μg/ml和 15.19~151.90 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。

2.8精密度试验 精密吸取混合对照品溶液0.6 ml置于1 ml量瓶中, 加内标溶液稀释至刻度, 摇匀。连续6次进样,每次2 μl, 得龙脑和异龙脑与内标萘峰面积比值的RSD分别为0.78%和0.95%。结果表明, 该方法测定精密度良好。

2.9稳定性试验 精密吸取供试项下的溶液2 μl, 分别在0、2、4、6、8 h时进行测定, 得对照品峰面积与内标峰面积的比值RSD, 龙脑为2.95%, 异龙脑为2.06%。结果表明, 该方法条件下样品中龙脑和异龙脑的含量在8 h内基本稳定。

2.10重复性试验 取同一批号(批号：20131214)的十四味连黄烧伤软膏样品6份, 按“2.4供试品溶液的制备”项下方法制备供试液, 精密吸取该溶液2 μl, 依法进样, 得龙脑和异龙脑含量值的RSD分别为2.0%和1.05%。结果表明,该法重复性良好。

2.11加样回收率试验 取重复性项下已知含量的十四味连黄烧伤软膏样品约1.0 g, 精密称取9份, 分别加入龙脑和异龙脑混合对照品溶液适量, 按“2.4”项下供试品溶液的制备方法制备, 按上述色谱条件, 依法进样, 计算加样回收率。结果见表1, 2。

表1 龙脑加样回收率测定结果(mg, %)

表2 异龙脑加样回收率测定结果(mg, %)

2.12样品的含量测定 再取3份不同批号(批号为20131218、20131226和20140110)的样品, 按含量测定项下供试品溶液的制备方法及色谱条件测定, 计算3批样品的龙脑和异龙脑含量, 龙脑为0.435 2 mg/g、0.461 2 mg/g和0.477 6 mg/g, 异龙脑为0.359 8 mg/g、0.350 7 mg/g和0.317 1 mg/g。

3 讨论

采用聚乙二醇-毛细管柱内标法测定十四味连黄烧伤软膏中龙脑和异龙脑的含量并对色谱条件进行了优选, 结果表明：FID检测器、柱温140℃, 进样口温度为210℃、检测器温度250 ℃时分离效果最佳, 灵敏度高。

试验中分别考察了水蒸气蒸馏法提取、超声提取、冷浸等方法, 结果表明, 超声提取方法效果较好, 因此采用较为简便的超声提取方法, 且提取时间为10 min时已充分溶解。同时对提取溶剂也进行了选择, 结果环己烷的提取效率大于无水乙醇, 且制剂基质略溶于环己烷, 过滤后溶液澄清, 易于操作。

在参考的文献中大多只是对冰片中的龙脑进行了定量分析, 即以龙脑的量来代表冰片的含量。本实验分别对冰片中的2个主要成分进行了分析, 结果表明本方法方便、快速、准确、重现性好, 可作为十四味连黄烧伤软膏制剂中冰片含量的质量控制方法。

［1］ 国家药典委员会.中国药典(一部).北京：中国医药科技出版社, 2010:136.

［2］ 和海龙, 暴梅佳, 梁海春, 等.GC法测定喉疾灵胶囊中龙脑的含量.中国新药与临床药理, 2010, 21(6):649-651.

［3］ 刘吉金, 王晓炜, 黄服喜, 等.气相色谱法测定菊花挥发油中桉油精、樟脑、龙脑、醋酸龙脑酯.中草药, 2006, 37(9):1352-1353.

2014-06-25］

230061 安徽省医学科学研究院