紫丹银屑颗粒联合阿维A胶囊对银屑病小鼠皮肤组织及外周血VEGF表达的影响

孙国强

(河北省中医药科学院附属医院 皮肤科，河北 石家庄 050001)

银屑病俗称牛皮癣，是皮肤科临床常见的一种炎症性、增生性皮肤疾病，以皮肤表面出现红斑，覆盖银白色鳞屑并伴有不同程度的瘙痒为主要临床表现，该病病程迁延，易反复发作，严重影响患者日常工作及生活[1-2]。目前，该病的病因及发病机制尚不完全明确，临床治疗上也缺乏特异性的治疗药物和手段[3]。血管内皮生长因子(VEGF)是促进血管内皮细胞分化和增殖的重要刺激因子，有研究表明，VEGF可能与银屑病的发病机制有关[4-5]。紫丹银屑颗粒是由紫硇砂、决明子、桂枝等多味中药组成的一种中成药，具有养血祛风、润燥止痒的功效[6]。阿维A胶囊是细胞增殖、分化及免疫调节剂，临床上常用于治疗脓疱型、红皮病型及其他顽固性银屑病[7]。本研究通过探讨紫丹银屑颗粒联合阿维A胶囊对银屑病小鼠皮肤组织及外周血VEGF表达的影响，以期为银屑病的临床治疗提供一定指导，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料及建模

选择30只人源化BALB/c 雌性小鼠(由河北医科大学实验动物中心提供)为研究对象。随机将其分为对照组和观察组，各15只。所有小鼠使用电动剃毛刀将小鼠背部毛发剃除干净后，采用5%咪喹莫特乳膏(珠海联邦制药股份有限公司中山分公司，国药准字H20040283)涂抹于小鼠背部裸露皮肤处建立银屑病动物模型，每只涂抹50 mg。评价建模结果，与正常小鼠比较，小鼠涂抹咪喹莫特乳膏1 d后皮肤出现红斑，2～3 d后皮肤即出现鳞屑，之后加重并增厚，同时病理切片显示有类似人类银屑病的组织学改变，即为建模成功。

1.2 给药方法

参照人与动物间体表面积折算的等效剂量比值表及紫丹银屑颗粒(烟台东诚大洋制药有限公司，国药准字Z20090133，规格：4 g/袋)、阿维A胶囊(重庆华邦制药有限公司，国药准字H20010126，规格：10 mg/粒)的给药剂量，对观察组小鼠进行灌胃给药，紫丹银屑颗粒剂量为1.3 g/次，3次/d；阿维A胶囊剂量为3.3 mg/次，3次/d。对照组小鼠采用同等剂量的生理盐水灌胃，两组持续给药1周后处死全部小鼠，并采集背部皮肤组织及血液标本。

1.3 观察指标

①对比两组小鼠治疗前后背部皮肤组织切片情况，采集观察组小鼠皮肤组织，使用4%中性甲醛溶液固定15 h，接着再用流水冲洗2 h，然后分别采用50%、70%、95%及无水乙醇进行梯度脱水各2 h，60 ℃恒温箱中，将其浸泡在液体石蜡中4 h，包埋，按照4～5 μm的厚度进行切片，经甲苯脱蜡20 min后，再依次经无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇水化3～4 min，然后采用苏木素-伊红染色法(HE染色法，试剂盒购于达科为生物技术股份有限公司)，经再脱水及透明化处理后中性树胶片封片，光学显微镜下观察；②测定治疗前后两组小鼠血清IL-4及IFN-γ水平，均严格按照试剂盒说明书进行操作；③测定治疗前后两组小鼠外周血VEGF表达情况，采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别对治疗前、治疗后两组小鼠血清的IL-4及IFN-γ水平进行测定，均严格按照试剂盒说明书进行操作；③测定治疗前后两组小鼠外周血VEGF表达情况，分别于治疗前后取小鼠血液约1 mL，3 000 r/min离心10 min后，收集血清，-80 ℃低温冰箱保存待用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中VEGF表达浓度，VEGF试剂盒购自上海抚生实业有限公司，严格按照试剂说明书要求操作。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组小鼠治疗前后皮肤组织变化情况

对照组小鼠治疗前后皮肤表面性状及组织切片均无明显变化；观察组小鼠治疗后大量银白色鳞屑消失，浸润面积明显减少，背部皮肤潮红，有少量光泽，皮损显著好转；组织病理切片检测结果显示，治疗后小鼠角质层内多形核细胞浸润基本消失。见图1。

注：A为治疗前模型小鼠皮肤表面性状；B为治疗后模型小鼠皮肤表面性状；C为正常皮肤组织切片(空白对照)；D为治疗前皮下组织切片；E为治疗后皮下组织切片。C、D、E：HE×200

2.2 两组小鼠治疗前后IFN-γ和IL-4水平比较

治疗后，两组小鼠IFN-γ水平比治疗前升高，且观察组明显高于对照组，两组IL-4水平比治疗前下降，且观察组下降更明显(P<0.05)。见表1。

2.3 两组小鼠治疗前后血清VEGF浓度变化情况

治疗前，两组小鼠血清VEGF浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，对照组小鼠血清VEGF浓度无明显变化(P>0.05)；观察组小鼠治疗后VEGF浓度显著降低，且低于对照组(P<0.05)。见表2。

表1 两组小鼠治疗前后IFN-γ和IL-4水平比较

表2 两组小鼠治疗前后血清VEGF浓度比较

3 讨论

银屑病是一种由自身T淋巴细胞介导的特异性免疫疾病，研究表明，银屑病的发病与感染、遗传、代谢、免疫以及微血管异常增生有关[8-9]。临床普遍认为，多种细胞及其相关活性分泌因子共同参与了该病的发生和发展过程。研究显示，由于受到嗜中性粒细胞的影响，在银屑病的皮损区及外周血液中，中性粒细胞蛋白酶会出现明显升高，这是导致银屑病皮损区细胞明显增殖和角质形成的重要原因[10]。我国传统中医将银屑病称为“白庀”，又称“松皮癣”“干癣”“蛇风”等，其发病机制为饮食不节、脾胃失调、气机壅滞，导致郁久化热伏于营血；情志内伤、气郁化火，导致毒热伏于营血；久病血亏、气血失和，导致肌肤失养[11]。因此需要给予养血解毒治疗。

VEGF是临床公认的具有高度特异性的促血管生成因子，具有促进内皮细胞生成及血管形成的作用；此外，VEGF还可通过调节细胞旁途径，提高血管内皮通透性，进而起到促进内皮细胞迁移及新生血管生成的作用。近年来的相关研究表明，血管生成增多是银屑病临床主要特征病理改变之一[12]。目前，银屑病的治疗药物及方法有多种，但疗效均不够理想。以往以高效价的糖皮质激素外用进行治疗，可起到迅速改善症状的作用，但糖皮质激素的长期、反复使用可导致局部毛细血管扩张、皮肤萎缩、水肿性红斑等诸多并发症[13]。紫丹银屑颗粒是由紫硇砂、决明子、桂枝等多味中药组成的中成药颗粒制剂，具有养血祛风、润燥止痒的功效。现代药理学证实，紫丹银屑颗粒可抑制多种细胞白介素(IL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、VEGF等多种炎症因子的表达[14]。而阿维A胶囊在银屑病的临床治疗中应用较为普遍，其作用机制是通过调节表皮细胞分化和增殖等起到治疗银屑病的作用[15]。本研究联合紫丹银屑颗粒、阿维A胶囊对银屑病小鼠的作用结果显示，观察组治疗后银白色鳞屑基本消失，浸润面积明显减少，背部皮肤潮红，有少量光泽出现，皮损显著好转，组织病理切片显示小鼠角质层内多形核细胞浸润基本消失；同时，治疗后外周血VEGF浓度显著降低，且低于对照组。结果提示，紫丹银屑颗粒联合阿维A胶囊对银屑病小鼠疗效显著，同郇玉超等[16]的相关报道结果相近。

综上所述，紫丹银屑颗粒联合阿维A胶囊可有效改善银屑病小鼠皮肤组织症状及性状，降低血清VEGF因子表达，临床疗效满意。