五倍子凝胶剂制备及质量标准研究

余 立

(麻城市人民医院，湖北 黄冈 438399)

五倍子是我国传统中药，药用历史悠久，其中富含鞣质，具有多种药理活性。鞣质对蛋白质有沉淀作用，皮肤、黏膜或溃疡部位接触鞣酸后，组织蛋白即被凝固，形成一层薄膜而呈收敛作用，同时组织中的血管也被迫收缩，使血液凝结而发挥止血功效，因此五倍子具有收敛、止血和抗菌等药理作用[1]，是治疗皮肤烧伤烫伤的有效药物。由于鞣酸易水解成为没食子酸，且没食子酸在人体内易被吸收和代谢[2]，因此其含量难以得到有效控制。近年来，五倍子在外用制剂中的研究日益受到重视，其中五倍子凝胶剂是由五倍子单味药材制成的新型外用凝胶制剂，为有效控制制剂中有效成分鞣酸的含量，提高制剂质量，本研究中采用薄层色谱法鉴别五倍子中的没食子酸，并通过高效液相色谱法测定其含量，以期为五倍子凝胶剂质量标准研究提供依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪(LC-10ATvp溶剂输送泵(分主/A泵和副/B泵)、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器)；JA2003N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；CH-PJJ-1 型精密增力电动搅拌器(常州澳华仪器有限公司)；HH-21数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)。

没食子酸对照品 (中国食品药品检定研究院，批号110831-201305)；五倍子(三九药业)经武汉理工大学刘小平教授鉴定符合药典标准[3]。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

2.1.1 处方 五倍子5 g，卡波姆9 401 g，甘油10 g，羟苯乙酯1 g，乙醇、丙二醇各5%，三乙醇胺适量，重蒸水，制成凝胶剂100 g。

2.1.2 制备 将卡波姆940粉末均匀地撒于甘油表面[4]，使卡波姆充分润湿，之后加入60 mL 水使卡波姆充分溶胀，再加入五倍子提取液15 mL；将羟苯乙酯溶于乙醇、丙二醇后 缓慢加入到上液中；再将吐温-80和三乙醇胺溶于10 mL水中，在搅拌条件下加入上液中，搅拌至均匀，得到淡黄色凝胶，其质地均匀细腻，无气泡。

2.2 定性鉴别

取本品1 g，置于10 mL量瓶中，加入50%甲醇10 mL，超声处理5 min后，离心，取上清液作为供试品溶液[5]。同法处理空白凝胶，作为阴性对照溶液。取五倍子对照药材0.5 g，加甲醇5 mL，超声处理15 min，滤过，制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成1.0 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(附录VI B)进行试验[6]，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，展开后取出并晾干，置于紫外灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在对照药材和对照品色谱中高度相当的位置上，显现出相同颜色的斑点，见图1。

图1 五倍子TLC鉴别

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件 固定相：ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%的磷酸溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：273 nm。

2.4.2 线性关系考察 将没食子酸对照品干燥至恒重，精密称取12.00 mg，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得0.48 mg/mL对照品溶液。分别移取对照品溶液1 mL、3 mL、5 mL、7 mL、9 mL分别置于25 mL容量瓶中，用50%甲醇将上述溶液稀释至刻度，其浓度分别为19.2 μg/mL、57.6 μg/mL、96.0 μg/mL、134.4 μg/mL、240.0 μg/mL。分别进样10 μL，在“2.4.1”项色谱条件下进行测定[7]，以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程：Y=38 389X+79 336，R2=0.999 6。结果显示没食子酸对照品溶液在19.2～240.0 μg/mL范围内呈现良好的线性关系[8]。

2.4.3 供试品溶液制备 称取五倍子凝胶供试品约10 g，置于100 mL烧杯中，精密加入4 mol/mL的盐酸溶液使其溶化成水状，将液体转移至50 mL容量瓶中，用重蒸水定容，摇匀，离心15 min，取上清液用0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4.4 空白干扰试验 按处方中各成分比例，制备不含五倍子的空白凝胶，按“2.4.3”项下方法制备空白溶液[9]，依法测定，结果无干扰，见图2。

图2 五倍子凝胶HPLC色谱

2.4.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，按“2.4.1”项下色谱条件重复进样5次，测定峰面积平均值为2 859 892，RSD为0.44%，表明本试验精密度良好。

2.4.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，按“2.4.1”项下色谱条件在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h分别进样10 μL，记录峰面积，计算供试品中没食子酸的峰面积的RSD为3.03%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.7 重复性试验 称取凝胶样品5份，每份约10 g。按上述方法制备供试品溶液，重复平行测定。结果发现，五倍子凝胶中没食子酸峰面积的RSD为1.91%，表明该方法重复性较好。

2.4.8 回收率试验 称取凝胶10 g，置于100 mL容量瓶中，加入定量的没食子酸对照品，按“2.4.1”项下色谱条件测定没食子酸的含量，记录色谱图，并计算平均加样回收率为99.53%，RSD为0.33%(n=5)。结果见表1。

表1 凝胶回收率试验结果

2.4.9 样品测定 分别按照“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下分别测定3批样品。结果显示，3批样品的平均含量分别为1.31 mg/g、1.30 mg/g、1.31 mg/g。

2.5 样品稳定性试验

2.5.1 离心试验 取3批凝胶样品各5 g，置于离心管中，以3 000 r/min转速离心30 min后，凝胶未见分层现象，且倒置均不滑落。

2.5.2 耐热试验 取3批凝胶样品各5 g，置于55 ℃恒温水浴箱中8 h，凝胶未见分层现象。

2.5.3 耐寒试验 取3批凝胶样品各5 g，-15 ℃放置24 h，未见分层现象。

3 讨论

本实验所制备凝胶为淡黄色的半固体，其质地均匀细腻，在3 000 r/min转速下未出现分层和结块现象，载药量以没食子酸计，平均每克凝胶含1.31 mg。温度试验表明本凝胶应储存于阴凉处。本实验中的制备工艺操作简单，制得的制剂稳定。

本实验还选择了卡波姆、海藻酸钠、泊洛沙姆3种水溶性凝胶基质进行比较[10]，结果表明，使用这3种基质制备的凝胶外观性状均较好，但是经过热恒温、低温和离心试验后，以卡波姆940作为基质制成的五倍子凝胶剂的外观性状和稳定性要高于海藻酸钠和泊洛沙姆407作为基质的凝胶剂。

卡波姆溶胀过程中适当搅拌可以促进其溶胀，采用酸碱法工艺，可随意搅拌，不必顾忌气泡多少，调整pH后，胶体的黏度极大降低，气泡将会全部消失，此时可很方便简单地将有关药物溶入其中，需要时还可滤过。进行酸碱中和后，液体会随即变成凝胶状[11]，故加碱时应引流，不能带入气泡，搅拌动作要均匀，可得到不含气泡的清晰透明的凝胶，若调整pH后进行滤过，可使凝胶更加细腻。当以NaOH为中和剂时，使用稀HCl调pH时应控制其用量，越少越好，因为生成的NaCl会一定程度上降低凝胶黏度，实验发现，2.6% (w/v)的NaCl可使凝胶变成液体，故在本次凝胶配方中使用了有机胺三乙醇胺作为中和剂。