高级别浆液性卵巢癌患者血清miR-1246和miR-2278检测水平的临床诊断价值

赵 莉，曹阳阳，宋秀英，樊阳阳

(1.西安高新医院妇科，西安710075; 2.陕西省人民医院产科，西安 710068)

卵巢癌(ovarian cancer,OC)的死亡率高居妇科恶性肿瘤之首，其中晚期的高级别浆液性卵巢癌(high-grade serous ovarian cancer,HGSOC)患者约占70%[1-2]。临床上HGSOC 的标准治疗方案是术后辅以铂类为基础的化疗，但是大量研究指出半年内HGSOC 患者复发率高达25%，5年总体生存率(overall survival,OS)仅为31%[3-4]。目前对HGSOC的治疗方案均欠佳，寻找潜在的生物标志物是进一步提高HGSOC 临床疗效的新的研究方向。

MicroRNA 是一类由21～25 个核苷酸组成的非编码小RNA 家族。miR-1246 是一种肿瘤标志物，已有报道指出miR-1246 在宫颈鳞癌和食管癌等[5-6]中呈异常高表达。miR-2278 是肿瘤抑制因子，具有抑制白血病细胞增殖和恢复化疗药物应答等作用[7]。目前关于miR-1246 和miR-2278 在HGSOC临床诊断中的价值研究尚不深入，本研究拟考察miR-1246 和miR-2278 可否作为检测HGSOC 的候选血清生物标志物，旨在为HGSOC 的临床合理诊疗提供新的思路和参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2015年1月～2019年1月西安高新医院妇科收治的且经病理证实的55 例HGSOC 患者为试验组，年龄37～76 岁，平均年龄52.3±2.9 岁。另选择同期我院51 例体检健康者为对照组，年龄31～69 岁，平均年龄51.8±3.2岁。本研究经由我院伦理委员会审核并通过，受试者自愿参加且均签署知情同意书。分别收集两组的年龄、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)和国际妇产科协会 (Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期，试验组的FIGO 分期患者例数显著高于对照组，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。

排除标准：① 心、肝、肺等器官功能障碍者；②并发其他肿瘤者；③入院前未接受任何肿瘤相关性手术，放化疗。

1.2 仪器与试剂 RNA 提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司，miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit 试剂盒和miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 试剂盒均购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。

1.3 方法 受试者于入院后2 周内进行采血，采集清晨空腹静脉血10 ml，2 000 r/min 离心20 min，弃去上清液，置于-80℃冰箱待测。采用RNA 提取试剂盒提取总RNA，用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit 试剂盒进行逆转录，然后用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 试剂盒对miRNA进行实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,rt-qPCR)分析，以U6 为内参。Ct值计算miR-1246和miR-2278 的绝对浓度。以miR-1246 和miR-2278 绝对浓度的中位值进行划分，大于中位值视为表达上调，反之为表达下调。miR-1246 引物序列：AGGGGCAATGGATTTTTGG；miR-2278 引物序列：GGGAGAGCAGTGTGTGTT。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0 统计学软件分析数据。满足正态性分布及方差齐性的计量资料以±s表示，采用t检验。不满足正态性分布和(或)方差齐性，采用Mann-Whitney 秩和检验。多组比较采用单因素方差分析(ANOVA)，采用LSD 检验。P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料的比较 见表1。试验组患者的CA125，miR-1246 和miR-2278 水平均显著高于对照组，差异具有统计学意义(均P=0.00)。

表1 两组临床资料的比较

2.2 血清CA125，miR-1246 和miR-2278 单独和联合检测的诊断价值 见表2。血清CA125，miR-1246 和miR-2278 联合检测的敏感度和特异度分别为98.7%和79.5%，诊断符合率为89.1%，高于单一检测指标。

表2 血清CA125，miR-1246 和miR-2278 单独和联合检测的诊断价值

2.3 血清miR-1246 和miR-2278 的表达上调与HGSOC患者临床病理特征的关系 见表3。血清miR-1246和miR-2278 上调在FIGO 分期、有无淋巴结转移和有无复发比较差异无统计学意义(均P＞0.05)，血清miR-1246 和miR-2278 上调在远处转移患者中的比例显著高于无远处转移患者，差异具有统计学意义(P=0.00)。

表3 血清miR-1246 和miR-2278 的表达上调与HGSOC 患者临床病理特征的关系[n(%)]

3 讨论

卵巢癌是导致女性恶性肿瘤死亡的主要原因[8]，其较高的死亡率与早期症状不明显、诊断延迟和缺乏诊断标志物等有关[9-10]。在诊断标准物方面，CA125 是妇科领域应用较广泛的血清肿瘤标志物，然而，有研究结果指出其对早期OC 的检测作用有限，仅有约50%的早期OC 患者血清CA125 水平高于正常水平[11]。另外，CA125 在子宫内膜异位症、子宫腺肌症和盆腔炎等良性疾病中也会升高。因此，寻找高准确度和特异度的血清标志物对OC 的早期诊断意义重大。

microRNA 是一类非编码单链RNA 分子，主要参与生物转录后基因表达的负向调节，通过调节靶基因和下游信号通路发挥癌基因或抑癌基因的作用。大量研究结果指出失调的microRNA 与卵巢恶性肿瘤的发生、发展密切相关[12-14]。miR-1246 于2008年发现于人胚胎干细胞，其在多种肿瘤中呈高表达，被认为是一种癌基因[15]。miR-1246 可促进肺上皮祖细胞的快速增殖和未分化表型，在肺癌患者组织中呈高表达且发挥促进非小细胞肺癌进展的作用。此外，近期有报道亦指出miR-1246 在食管鳞癌中呈异常高表达。miR-2278 可作为肿瘤抑制因子，上调miR-2278 的表达可抑制耐药白血病细胞的增殖并诱导细胞凋亡。目前关于miR-1246和miR-2278 在HGSOC 临床诊断中的价值研究尚不深入，本研究拟考察miR-1246 和miR-2278 可否作为检测HGSOC 的候选血清生物标志物，旨在为HGSOC 的临床合理诊疗提供新的思路和参考。

本研究结果表明miR-2278 是预测HGSOC 最好的单一标志物，敏感度为90.9%，miR-1246 特异度最高76.3%。当miR-1246，miR-2278 和CA125联合使用时，敏感度达到98.7%。因此，血清miR-1246 和miR-2278 可能成为诊断HGSOC 的有前途的生物标志物，并克服CA125 局限性。

综上所述，miR-1246 和miR-2278 是鉴别HGSOC较敏感和特异的标记物，其表现优于CA125。miR-1246，miR-2278 和CA125 的三重组合是高敏感度鉴定HGSOC 强有力的标记物。接下来，我们会进一步扩大研究的规模来证实miR-1246 和miR-2278 作为诊断HGSOC 的生物标志物的作用。