卵巢癌患者血液NLR，CA125，HE4水平联合检测的实验诊断和预后价值研究

刘 检，李 敏，陆明洋，徐 斌，郑 晓，周 怡

(苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心，江苏常州 213003)

卵巢癌(ovarian cancer，OC)是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，发病率居妇科恶性肿瘤的第三位，仅次于宫颈癌和宫体癌，但病死率却是第一位[1]。我国宫颈癌五年生存率近60%，但晚期OC 患者五年生存率仅为39%。另外据国家癌症中心最新发布的数据显示，我国恶性肿瘤五年生存率已从10年前的30.9%提升到40.5%，而OC 患者五年生存率仅提高0.4%[2]。早期OC 症状不明显，大部分患者确诊OC 时已发展为中晚期。目前临床开展的OC相关肿瘤标志物主要有糖类抗原125（CA125），血清人附睾蛋白4（HE4）等[3-5]，在OC 的诊断中具有一定的价值和意义，但灵敏度和特异度不高，同时在OC 的病情及治疗效果评价中有一定局限性。因此，我们迫切需要发现新的OC 生物标记物。众所周知，炎症反应与肿瘤有着密切的关系[6]。炎症反应通过上调炎症促进肿瘤血管生成和抑制抗肿瘤活动，在肿瘤的增殖、侵袭和迁移中发挥重要的作用[7]。中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）是一种白细胞相关的炎症标志物，被证明与肺癌、肝癌、胃肠道癌和结直肠癌等多种肿瘤的进展和预后相关[8-11]。卵巢恶性肿瘤风险判定(risk of ovarian malignancy algorithm，ROMA)检测是通过联合HE4，CA125 检测以及患者月经情况，评估术前有盆腔包块的女性罹患OC 的风险[12]。因其灵敏度高、准确性好在临床得到广泛应用。本研究通过NLR 联合血清CA125，HE4 检测以及ROMA 比值，探讨其在卵巢疾病诊断、病情评估及预后判断中的应用价值，为临床提供更多的诊疗参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年5月～2020年2月苏州大学附属第三人民医院收治的OC 患者、卵巢良性疾病患者和健康体检者。其中OC 患者58例，均经过病理诊断为OC；卵巢良性疾病患者57 例，均为子宫肌瘤患者；我院健康体检者49例为健康对照组。同时分析研究对象的NLR 数值，所有临床、实验室以及病理数据均从妇科、检验科和病理科获得，肿瘤分期依据国际抗癌联盟（Unionfor International Cancer Contorl，UICC)第8 版肿瘤TNM 分期。本研究经医院伦理委员会批准同意。

1.2 试剂与仪器 HE4 和CA125 试剂盒购自瑞士，NLR 比值(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数)试剂盒购自日本，全自动电化学发光免疫分析仪(Roche Cobas E602，瑞士Roche 公司)，全自动血液分析仪(XN-9000日本SYSMEX 公司)，低速离心机(LC-4012，安徽中科中佳公司)，低温冰箱(BCD-52WB，日本Panasonic 公司)。

1.3 方法

1.3.1 血清检测:采集受试者清晨空腹静脉血3ml，室温(22℃～25℃) 下静置30～60min 自发凝集，析出血清，3 000 r/min 离心10min 收集血清(排除溶血和脂血样本)，分装于2 个离心管中，置于-20℃或以下冰箱备检。HE4 和CA125 采用Roche Cobas E602 全自动电化学发光免疫分析仪分析。严格按照仪器SOP 标准和试剂说明书分析待测标本，相同条件下测定质控样品。试剂说明书标准参考范围是CA125：0～35.0U/ml；HE4：绝经前0～68.96pmol/L、绝经后0～114.90pmol/L，计算ROMA 指数(卵巢癌风险预测值)：0～11.4( 绝经前)，0～29.90(绝经后)，以大于参考值上线判断为阳性样本。

1.3.2 全血检测: NLR 比值(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数) 采用日本SYSMEX XN-9000 全自动血液分析仪检测外周血中的中性粒细胞数量和淋巴细胞数量，并计算比值。NLR 的判断标准为：绘制ROC 曲线，取约登指数最大值时对应的NLR 值作为cut-off 值。

1.4 统计学分析 采用SPSS 23.0 和GraphPad Prism5.0 统计分析软件进行数据分析。采用中位数及最小最大值表示计量资料，采用百分比表示计数资料。率的比较采用卡方检验；计量资料组间比较采用秩和检验。ROC 曲线确定NLR，CA125，HE4 以及ROMA 比值在OC 中的诊断效率和价值。拟合Logistic 回归模型分析，将NLR，CA125，HE4 纳入模型，生成回归方程，并预测每个样本的预测概率，并计算其敏感度、特异度及准确度。P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢组、卵巢良性疾病组和健康对照组NLR，CA125 和HE4 水平 见表1。NLR，CA125和HE4 在OC 组中的表达水平显著高于卵巢良性疾病组和健康对照组，差异均具有统计学意义(χ2=60.22～93.23，均P<0.0001)。

表1 NLR，CA125，HE4 在卵巢组、卵巢良性疾病组和健康对照组的水平[中位数（最小值，最大值）]

2.2 NLR，CA125 和HE4 水平对卵巢癌的诊断价值比较 见图1，表2。根据OC 患者NLR，CA125，HE4 检测结果绘制ROC 曲线，得出各项指标的曲线下面积(AUC) 及95% 置信区间(95% CI)。不同标志物检测诊断OC 的ROC 曲线面积结果：AUCNLR=0.828，95%CI(0.761～0.895)， AUCCA125=0.923，95%CI(0.876～0.971)， AUCHE4=0.960， 95%CI(0.929～0.990)。

表2 NLR，CA125，HE4 在卵巢癌中的诊断价值(%)

图1 NLR，CA125，HE4 对卵巢癌诊断的ROC 曲线

NLR，HE4 和CA125 对OC 诊断截点的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分析，其中绘制ROC 曲线取约登指数最大值对应的NLR 值2.175 作为cut-off 值，NLR>2.175 为阳性诊断标准。NLR 的敏感度最高，而HE4 的特异度和准确度最高。

2.3 NLR，CA125，HE4 表达与OC 患者病理特征的相关性 见表3。结果发现NLR 比值与OC 患者的肿瘤数量和患者年龄显著相关(P<0.05)，与其他参数不相关(P>0.05)。血清CA125，HE4 的水平以及ROMA 比值与OC 患者的肿瘤数量、盆腔有无黏液显著相关(P<0.01)，与年龄和肿瘤直径不相关(P>0.05)。CA125，HE4 的表达以及ROMA 比值和NLR 比值OC 患者的TNM 分期显著相关(P<0.01)。

表3 NLR，CA125，HE4 表达与卵巢癌相关病理参数关系[中位数（最小值，最大值）]

2.4 卵巢癌手术前后CA125，HE4，NLR 水平变化 见表4。58 例OC 患者中47 例患者有术后CA125，HE4，NLR 的结果。CA125，HE4，NLR 水平术后组均显著低于术前组，差异均有统计学意义（P<0.05）。

表4 OC 组术前术后NLR，CA125，HE4 的水平变化[n =47，中位数（最小值，最大值）]

3 讨论

卵巢癌是一种发生于卵巢表面体腔上肢和其下方卵巢间质的恶性肿瘤。其发病年龄是妇科肿瘤中最宽的，可发生在妇女一生中的任何时期，年轻化趋势加剧，OC 的防治形势严峻，因此发现和推广好的OC 标志物具有重要的临床价值。有研究发现，恶性肿瘤中NLR 水平明显高于良性肿瘤组，同时多因素分析显示NLR 与肿瘤患者的TNM 分期显著相关[13]，提示NLR 与患者的肿瘤进展密切相关。TOKMAK A 等[14]分析了NLR 和CA125 在OC 中的表达，结果发现联合检测敏感度和特异度较单个指标明显提高，提示联合检测可以提高OC 诊断的准确度。

肿瘤与全身性的慢性炎症密切相关，尤其是在早期肿瘤转移时，少量的癌细胞转移，无法通过影像学检查出来，但是可以通过全身性的炎症指标来反映出来，在肺癌、胆管癌等肿瘤中得到证实[15-16]。本研究发现OC 患者血液中NLR 的水平显著高于良性疾病组及健康对照组，同时良性疾病组中的表达与健康对照组相比差异有统计学意义。NLR 诊断OC 的敏感度高于CA125 和HE4，表明NLR 具有诊断OC 及相关疾病的价值。肿瘤发生后，人体的免疫功能下降，表现出淋巴细胞数值可能下降。另外肿瘤的出现包括少量的肿瘤细胞转移必然导致了全身性的炎症反应，这也会导致中性粒细胞相对升高。中性粒细胞相对升高与淋巴细胞相对下降，必然导致NLR 的升高。同时发现NLR 在OC 患者术前术后的比较中差异显著。推测如果患者NLR 持续性升高，则意味着肿瘤在进展，术后预后较差，可以成为OC 独立的危险预后因子。结果还显示NLR 在OC 患者的年龄、肿瘤数量、TNM 分期中差异有统计学意义；与患者肿瘤的直径、是否产生黏液不相关。说明肿瘤的数量和年龄影响NLR，数量越多、年龄越大，NLR 值越高。

CA125 与HE4 的表达相互独立，两者在OC患者中的分布具有显著差异。本研究分析发现血清CA125 对OC 诊断的敏感度(81.0%) 高于HE4(70.7%)，但特异度低于HE4(88.7% vs 100%)，国内外多数研究与本研究结果相一致，也有研究结果不相同的[17]。HE4 和ROMA 比值对OC 的诊断特异度最高(100.0%)，诊断效率最佳，但敏感度较低。结果还发现血清CA125，HE4 的表达以及ROMA 比值在OC 中的表达显著高于良性疾病组和健康对照组(P<0.001)。同时CA125，HE4 的表达以及ROMA比值与OC患者的肿瘤数量、TNM分期、盆腔有无黏液密切相关，与年龄和肿瘤直径不相关，与相关文献报道相一致[18-19]。同时在OC 患者术前术后的比较中具有更加显著的差异。CA125 与HE4的联合检测，尤其是在两项指标基础上算出的风险预测模型(ROMA 比值)结合了两者的优势，具有更好的诊断效率，与NLR 在诊断OC 及OC 患者预后中具有一定的互补性。

综上所述，NLR，血清CA125，HE4 以及ROMA比值的检测在早期OC 患者中具有较高的诊断效率，进一步完善早期OC 的辅助诊断；同时在OC 患者病情的进展以及OC 患者临床治疗效果的评估中具有重要价值。本研究纳入的样本数量不足，结果可能存在偏差，后续进一步扩大样本，开展更深入和更严谨的研究。