固相萃取高效液相色谱法检测芝麻油中的苯并[a]芘

周宏霞，王 妙，臧汝瑛，王秀丽，周 青

（威海市食品药品检验检测研究院，山东威海264200）

芝麻油是我国传统特色的食用油品种之一，高温炒籽过程得到香油独特的色香味，同时也很容易导致强致癌物苯并芘含量超标[1]。苯并芘（Benzopyrene）是一种含苯环的稠环芳烃。按苯环的稠合位置不同，苯并芘分为2种，苯并[a]芘（1,2-苯并芘）和苯并[e]芘（4,5-苯并芘），常见的是苯并[a]芘。常温下状态为黄色粉末，熔点为179℃，难溶于水，微溶于甲醇、乙醇，易溶于苯、甲苯、二甲苯、丙酮等有机溶剂，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原，是世界上公认的三大强致癌物之一[2-3]。GB 2762—2017《食品安全国家标准 食品中污染物限量》规定了植物油中苯并[a]芘的限量为10 μg/kg[4]。目前，食品中苯并芘检测的前处理方法有中性氧化铝柱法、分子印迹法和凝胶色谱法等[5]。芝麻香油生产过中的炒籽温度通常要达到160℃以上，甚至局部温度能到达200℃[6]，高温炒制条件为芝麻油中苯并芘含量的升高埋下了隐患[7]。对国内外食用油中苯并芘含量进行的调查研究表明，芝麻香油中苯并芘含量较其他油脂要高[8]。高温炒籽给芝麻香油品质带来的另一个问题是色泽过深[9]。因此，对芝麻油中的苯并芘进行检测显得尤为重要。但是，由于芝麻香油中的颜色比较深，含有的干扰杂质比一般食用油要多，采用一般植物油的前处理方法，效果不太理想。王广会等人[10]采用氧化铝层析柱对芝麻油进行净化，该方法需用有机试剂多、操作比较复杂。试验采用硅胶柱串联分子印迹柱的方法对芝麻油进行前处理净化，经过高效液相色谱荧光检测器检测。该方法具有能去除杂质干扰、有机试剂用量少、稳定性好、回收率高等特点。目前，未见有硅胶柱串联分子印迹柱应用于芝麻油中苯并芘的检测。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料与试剂

芝麻油，市售；正己烷、二氯甲烷、乙腈（色谱纯，Thermo），苯并[a]芘标准品（100 mg/L），上海安谱公司提供；试验用水为经超纯水仪处理的一级水。

1.1.2 仪器与设备

Agilent1260型高效液相色谱仪（配荧光检测器），美国安捷伦公司产品；Cleanert BAP-3（混合分子印迹材料，500 mg/6 mL）；Cleanert Silica柱（500 mg/6 mL）；固相萃取装置，美国莱伯泰科公司；超纯水仪，美国密理博公司产品。

1.2 试验方法

1.2.1 液相色谱条件

色谱柱为Venusil XBP C18柱（150 mm×4.6 mm×5 μm）；流动相为乙腈-水（体积比88∶12），流速1 mL/min；进样量20 μL，柱温35℃，荧光检测器，激发波长384 nm；发射波长406 nm。

1.2.2 标准贮备液及标准溶液的配制

准确移取1 mL的苯并[a]芘标准溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得到10 μg/mL的标准储备液，用乙腈逐级稀释，得到0.2，0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 μg/L标准工作液。

1.2.3 样品前处理

称取0.5 g芝麻油样品于玻璃管中，加5 mL正己烷涡旋振荡溶解，作为净化液。将Cleanert Silica柱与Cleanert BAP-3串联，先用5 mL二氯甲烷，再用5 mL正己烷活化柱子。柱子活化后，加入净化液过柱，用3 mL正己烷润洗样品瓶，上样到净化柱上。待样液流出，先用6 mL正己烷淋洗串联柱，后弃去硅胶柱，再用6 mL正己烷淋洗Cleanert BAP-3柱，弃去流出液。用8 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。净化液在40℃下氮气吹干，用1 mL乙腈溶解定容，涡旋，过0.22 μm有机滤膜，待上机。

2 结果与分析

2.1 提取液的选择

苯并[a]芘脂溶性好，溶解在芝麻油中。参照GB 5009.27—2016[11]的方法选择正己烷作为提取的溶剂。正己烷对于油脂具有很好的溶解性，目标物苯并[a]芘也能溶解在里面，有利于后期的纯化。

2.2 提取柱的选择

芝麻油比一般的油脂颜色深、干扰杂质多。因此，单用分子印迹柱处理后，样品的基线比较高，检测结果受到干扰。采用硅胶柱和分子印迹柱串联处理后，硅胶柱能去除芝麻油中的色素等杂质，待测样品的基线降低，杂质干扰消除。

2.3 色谱图

在1.2.1色谱条件下得到标准溶液的图谱。苯并[a]芘标准品色谱图见图1。

2.4 校准曲线和检出限

校准曲线见图2。

图2 校准曲线

在1.2.1的仪器条件下，按照1.2.2配制的标准序列上机检测。以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制回归曲线，得线性回归方程Y=4.177 975 2X+0.080 873，相关系数（R）为0.999 9，表明苯并芘在0.2~20.0 μg/L质量浓度内与色谱峰面积线性关系良好。以信噪比（S/N）的3倍计算检出限，在取样为0.5 g时，苯并芘的检出限为0.4 μg/kg。

2.5 精密度和加标回收试验

取空白的芝麻油样品进行加标试验，加标质量浓度为0.4，5.0，10 μg/kg 3个水平，按照1.2.3样品前处理方法对加标样品进行前处理，按照1.2.1色谱条件进行测定，每个加标质量浓度水平平行测定6次。

加标回收试验结果见表1。

表1 加标回收试验结果

3 结论

建立了硅胶柱串联分子印迹柱净化芝麻油，净化效果好、操作简单、回收率高。结果表明，苯并[a]芘在0.2~20.0 μg/L质量浓度内线性关系好。相关

系数R2=0.999 9；在0.4~10.0 μg/kg加标水平时，回收率为91.3%~98.1%，相对标准偏差为1.37%~3.96%（n=6），方法的检出限为0.4 μg/kg。该方法适用于芝麻油中苯并[a]芘的检测。