固相萃取高效液相色谱法检测芝麻油中的苯并[a]芘

2021-10-15 10:30周宏霞臧汝瑛王秀丽
农产品加工 2021年18期
关键词:苯并芘芝麻油正己烷

周宏霞,王 妙,臧汝瑛,王秀丽,周 青

(威海市食品药品检验检测研究院,山东威海264200)

芝麻油是我国传统特色的食用油品种之一,高温炒籽过程得到香油独特的色香味,同时也很容易导致强致癌物苯并芘含量超标[1]。苯并芘(Benzopyrene)是一种含苯环的稠环芳烃。按苯环的稠合位置不同,苯并芘分为2种,苯并[a]芘(1,2-苯并芘)和苯并[e]芘(4,5-苯并芘),常见的是苯并[a]芘。常温下状态为黄色粉末,熔点为179℃,难溶于水,微溶于甲醇、乙醇,易溶于苯、甲苯、二甲苯、丙酮等有机溶剂,是一种常见的高活性间接致癌物和突变原,是世界上公认的三大强致癌物之一[2-3]。GB 2762—2017《食品安全国家标准 食品中污染物限量》规定了植物油中苯并[a]芘的限量为10 μg/kg[4]。目前,食品中苯并芘检测的前处理方法有中性氧化铝柱法、分子印迹法和凝胶色谱法等[5]。芝麻香油生产过中的炒籽温度通常要达到160℃以上,甚至局部温度能到达200℃[6],高温炒制条件为芝麻油中苯并芘含量的升高埋下了隐患[7]。对国内外食用油中苯并芘含量进行的调查研究表明,芝麻香油中苯并芘含量较其他油脂要高[8]。高温炒籽给芝麻香油品质带来的另一个问题是色泽过深[9]。因此,对芝麻油中的苯并芘进行检测显得尤为重要。但是,由于芝麻香油中的颜色比较深,含有的干扰杂质比一般食用油要多,采用一般植物油的前处理方法,效果不太理想。王广会等人[10]采用氧化铝层析柱对芝麻油进行净化,该方法需用有机试剂多、操作比较复杂。试验采用硅胶柱串联分子印迹柱的方法对芝麻油进行前处理净化,经过高效液相色谱荧光检测器检测。该方法具有能去除杂质干扰、有机试剂用量少、稳定性好、回收率高等特点。目前,未见有硅胶柱串联分子印迹柱应用于芝麻油中苯并芘的检测。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料与试剂

芝麻油,市售;正己烷、二氯甲烷、乙腈(色谱纯,Thermo),苯并[a]芘标准品(100 mg/L),上海安谱公司提供;试验用水为经超纯水仪处理的一级水。

1.1.2 仪器与设备

Agilent1260型高效液相色谱仪(配荧光检测器),美国安捷伦公司产品;Cleanert BAP-3(混合分子印迹材料,500 mg/6 mL);Cleanert Silica柱(500 mg/6 mL);固相萃取装置,美国莱伯泰科公司;超纯水仪,美国密理博公司产品。

1.2 试验方法

1.2.1 液相色谱条件

色谱柱为Venusil XBP C18柱(150 mm×4.6 mm×5 μm);流动相为乙腈-水(体积比88∶12),流速1 mL/min;进样量20 μL,柱温35℃,荧光检测器,激发波长384 nm;发射波长406 nm。

1.2.2 标准贮备液及标准溶液的配制

准确移取1 mL的苯并[a]芘标准溶液于10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度得到10 μg/mL的标准储备液,用乙腈逐级稀释,得到0.2,0.5,1.0,5.0,10.0,20.0 μg/L标准工作液。

1.2.3 样品前处理

称取0.5 g芝麻油样品于玻璃管中,加5 mL正己烷涡旋振荡溶解,作为净化液。将Cleanert Silica柱与Cleanert BAP-3串联,先用5 mL二氯甲烷,再用5 mL正己烷活化柱子。柱子活化后,加入净化液过柱,用3 mL正己烷润洗样品瓶,上样到净化柱上。待样液流出,先用6 mL正己烷淋洗串联柱,后弃去硅胶柱,再用6 mL正己烷淋洗Cleanert BAP-3柱,弃去流出液。用8 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。净化液在40℃下氮气吹干,用1 mL乙腈溶解定容,涡旋,过0.22 μm有机滤膜,待上机。

2 结果与分析

2.1 提取液的选择

苯并[a]芘脂溶性好,溶解在芝麻油中。参照GB 5009.27—2016[11]的方法选择正己烷作为提取的溶剂。正己烷对于油脂具有很好的溶解性,目标物苯并[a]芘也能溶解在里面,有利于后期的纯化。

2.2 提取柱的选择

芝麻油比一般的油脂颜色深、干扰杂质多。因此,单用分子印迹柱处理后,样品的基线比较高,检测结果受到干扰。采用硅胶柱和分子印迹柱串联处理后,硅胶柱能去除芝麻油中的色素等杂质,待测样品的基线降低,杂质干扰消除。

2.3 色谱图

在1.2.1色谱条件下得到标准溶液的图谱。苯并[a]芘标准品色谱图见图1。

2.4 校准曲线和检出限

校准曲线见图2。

图2 校准曲线

在1.2.1的仪器条件下,按照1.2.2配制的标准序列上机检测。以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制回归曲线,得线性回归方程Y=4.177 975 2X+0.080 873,相关系数(R)为0.999 9,表明苯并芘在0.2~20.0 μg/L质量浓度内与色谱峰面积线性关系良好。以信噪比(S/N)的3倍计算检出限,在取样为0.5 g时,苯并芘的检出限为0.4 μg/kg。

2.5 精密度和加标回收试验

取空白的芝麻油样品进行加标试验,加标质量浓度为0.4,5.0,10 μg/kg 3个水平,按照1.2.3样品前处理方法对加标样品进行前处理,按照1.2.1色谱条件进行测定,每个加标质量浓度水平平行测定6次。

加标回收试验结果见表1。

表1 加标回收试验结果

3 结论

建立了硅胶柱串联分子印迹柱净化芝麻油,净化效果好、操作简单、回收率高。结果表明,苯并[a]芘在0.2~20.0 μg/L质量浓度内线性关系好。相关

系数R2=0.999 9;在0.4~10.0 μg/kg加标水平时,回收率为91.3%~98.1%,相对标准偏差为1.37%~3.96%(n=6),方法的检出限为0.4 μg/kg。该方法适用于芝麻油中苯并[a]芘的检测。

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