白血病患儿的免疫复合物与疾病特征及BCG免疫治疗后患者抗体反应的相关性

赵惠娅 高 慧 郭 雯

据报道[1-2]，急性淋巴细胞白血病患儿血清中循环肿瘤相关抗原和抗体的发生率很高。本研究旨在分析急性非淋巴细胞白血病患儿血清中免疫复合物的发生率及其与疾病特征及BCG免疫治疗后患者抗体反应的相关性，以期对该疾病患儿预后进行评估。所有儿童均接受标准化疗，许多儿童也接受卡介苗免疫治疗。对循环免疫复合物进行了两种试验：放射标记C1q结合试验，定量测定血清中C1q与免疫复合物的结合，以及聚乙二醇(PEG)沉淀免疫复合物的能力。在整个研究过程中，我们试图了解白血病患儿血清中免疫复合物的连续测定和卡介苗受者的免疫反应评估是否能够提供对这种疾病的临床特征的洞察[3]。因此本文选取我院2017年6月到2020年6月共收治的60例白血病患儿作为研究对象，探讨白血病患儿的免疫复合物与疾病特征及BCG免疫治疗后患者抗体反应的相关性，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年6月到2020年6月共收治的60例白血病患儿作为研究对象，经诊断有41例患儿为急性淋巴细胞白血病，19例为T细胞白血病，年龄2～18岁，平均(7.84±1.63)岁；其中男性35例、女性15例。60名患儿均有在诊断时的研究数据，随访6个月以上的38例，12个月以上的23例。另取同期73例无血液疾病的患儿作为对照组，年龄3～14岁，平均(7.65±1.54)岁，男性32例、女性28例。2组患儿性别、年龄等一般资料无明显差异(P>0.05)。

1.2 方法

125C1q的制备：取患儿空腹静脉血，离心取血清，然后立即从新鲜血清中分离出C1q，并将其储存在pH7.5的0.3 M NaCl，0.005 M乙二胺四乙酸二钠(EDTA)中。用乳过氧化物酶对C1q进行放射标记，C1q结合活性的程序(C1q-BA)进行检测，检测结果表示为Iz5IClqin实验沉淀物与125IC1q在含有25 C1qA和50 p1正常人血清(用20%三氯乙酸沉淀)的沉淀物中的百分比[4]。

PEG沉淀分析：将40 μl试验血清用硼酸盐缓冲液(0.1 m，pH8.4)稀释至1.0 ml，并在硼酸缓冲液中加入1.0 ml 8% PEG。混合物在4 ℃下培养18 h，然后在2000×g、4 ℃下离心1 h。用2 ml 4% PEG洗涤沉淀，用改良的Lowry法测定测试IB，为了溶解沉淀物，向每个管中添加50 pl 0.1 mol/l NaOH和550 pl蒸馏水，并进行涡流处理。然后添加500 p1的Fohn试剂[由10 ml 0.2 mol/lNaOH(含4%Na，CO)和0.2 ml 0.5% CuSO4，.5 H2O(含1%柠檬酸钠)制成]。在37 ℃孵育15 min后，将试管转移到冰浴中。然后加入在蒸馏水中稀释为1∶3的200pI-Folin苯酚试剂，试管立即旋转。在37 ℃下培养30 min，在2000×g下离心30 min，并在500 nm下测定上清液的光学密度(OD)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 不同患儿血清中免疫复合物情况对比

41例急性淋巴细胞白血病患儿血清平均结合125I-C1q为(12.46±1.64)%，19例T细胞白血病患儿血清中125I-C1q的结合率为(17.47±2.69)%，而73例对照组患儿血清平均结合125I-C1q为(6.52±1.25)%。73名对照组患儿中没有1例高于15%(超过15%的125I-C1q结合被认为是阳性)。3组差异有显著性(P<0.05)，如表1所示。

表1 不同患儿血清中免疫复合物情况对比

2.2 PEG沉淀试验结果

在PEG沉淀试验中，41例急性淋巴细胞白血病患儿的诊断血清的外径读数平均为0.273±0.097，73例对照组的血清平均为0.188±0.054，差异有统计学意义(P<0.001)。C1q与PEG结果之间有很强的相关性(P<0.001)，尽管个别血清中Clq的升高偶尔与PEG值的升高不相匹配。由于这种强相关性，本研究仅根据Clq-BA进一步分析结果。

2.3 13例诊断血清结合率超过15%患儿的基本信息

13例诊断血清结合率超过15%的患儿中3例来自41例急性淋巴细胞白血病患儿，10例来自19例T细胞白血病患儿。13例患儿中有2例在16个月和20个月时出现骨髓复发，其余11例在治疗后8～18个月仍处于缓解状态。初发白细胞计数高但C1q-BA正常的8例患者中有2例复发。如表2所示。

表2 13例诊断血清结合率超过15%患儿的基本信息

3 讨论

大量癌症患者血清中循环免疫复合物的高发病率已被报道[5-7]。在某些癌症中，这种复合物似乎与疾病的程度有关，预示着预后不良。免疫复合物的检测已由不同的研究者以多种方式进行研究，不同实验室的检测结果常常存在差异。这可能是由于患者材料的选择和所用分析方法的不同[8]。在本研究中，我们对急性白血病患儿血清中的免疫复合物进行了一系列的测定，评估比先前报道的年龄更小的人群中是否存在免疫复合物。在一些研究中[9]，血清来自不同机构的患者，而我们的患者来自单一的肿瘤服务机构。所有患者均由同一名医务人员按照统一方案进行治疗。

在诊断时，急性白血病患者作为一个群体，其血清结合卡介苗抗原的能力低于正常儿童的血清[10]。以前在循环抗原、可溶性抗原时，抗体水平较低抗原：抗体复合物或抗独特型抗体。很容易推测，在其他肿瘤中报道的细菌和肿瘤相关抗原的交叉反应性也可能在这方面发挥作用。在大多数患者中，用卡介苗进行免疫治疗可增加结合卡介苗抗原的能力。与卡介苗结合能力的增加、免疫复合物的存在或任何类型的临床反应之间没有关系。需要在较长时间内进行额外的测定，以验证这些结果所产生的印痕。所采用的分析方法是检测的敏感技术抗原：抗体复合物。此外，还有许多其他方法基于免疫复合物的各种性质。虽然免疫复合物的检测已经为许多疾病的发病机制提供了见解，但满意复合物可在无病人士的循环中形成，以帮助消除微生物等异物[11-12]。肿瘤患者和健康人的循环复合体可能部分被网状内皮系统的吞噬细胞清除。因为癌症患者未清除的免疫复合物可以阻止细胞介导的恶性细胞毒性破坏，了解它们的组成及其对肿瘤生长的影响是很重要的[13]。

本研究结果表明，60份白血病患儿的诊断血清中有13份含有免疫复合物。这一发现与最近的一份报告相一致，在所有儿童的诊断血清中免疫复合物的发生率很低。值得注意的是，其中10例患有T细胞白血病，这种类型被认为比无细胞白血病预后更差。分析其原因可能在于：白血病患儿白细胞计数较高，这是T细胞白血病的特征，因此可观察到的白细胞计数增加与免疫复合物之间存在的关系[14-15]。诊断时的免疫复合物并不表明预后不良。在这项研究中，13名患者在一段时间或另一段时间有免疫复合物，其中2人(28%)复发，11例没有复发，但在统计学上，复发率没有差异。这些数据表明，无论是在治疗期间还是在诊断时，免疫复合物对白血病患儿都没有预后价值。

综上所述，免疫复合物在不同类型白血病中的发生率存在差异，但在白血病患儿中，其可能与进行性疾病或预后不良无关。