鲍俊竹,俞何锋,彭 祺
(1.品测(上海)检测科技有限公司,上海 201108;2.绍兴文理学院生命科学学院,浙江绍兴 312000)
食用天然色素是从动植物组织中提取出来的,一般对人体无害。食用合成色素属于食用人工合成色素。诱惑红等人工合成色素的着色力强,价格低廉,对于商家来说能很好地提高食品的外观性质,因此被广泛使用。但人工合成色素及其代谢物均具有毒性和致癌性,因此使用诱惑红等人工合成色素一定要控制其使用量,避免过量使用对人体造成危害[1-3]。
1.1.1 试剂
诱惑红标准物质;甲醇(色谱纯);0.02 mol/L乙酸铵溶液(pH=4);聚酰胺粉(200目);20%柠檬酸;去离子水;甲酸-甲醇溶液;乙醇-氨水溶液。
1.1.2 仪器
美国戴安P680高效液相色谱仪;电子天平;PDA-100二极管阵列检测器(检测波长190~900 nm);变色龙色谱工作站;恒温水浴锅;烧杯。
1.2.1 标准溶液的制备
准确称取0.100 g诱惑红置50 mL的烧杯中,加水溶解,并把溶液于100 mL容量瓶中定容,得含量1 mg/mL标准储备液。从中吸取适量配成1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列标准溶液。
1.2.2 样品前处理
称取10.0 g腐乳样品,加30 mL水,于恒温水浴锅中温热溶解。用20%柠檬酸溶液调至酸性(pH=4),取0.5~1.0 g聚酰胺粉(200目)搅拌片刻,置于60 ℃水浴中加热,使色素完全吸附。将溶液中的聚酰胺粉通过漏斗过滤,剩下溶液用酸性热水洗涤去糖。经甲酸-甲醇溶液洗涤至洗液无色,70 ℃的水多次洗涤至洗液中性,乙醇-氨水液分次解吸色素,收集解吸液于水浴锅中蒸发浓缩后定容至2 mL,转入25 mL比色管中,去离子水定容至刻度,经0.45 μm滤膜过滤后上机待测[4-5]。
1.2.3 定量测定
用标准物质的保留时间定性,采用外标法定量。以质量浓度(μg/mL)为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。根据试样峰面积,从标准曲线上查出试样中组分的实际浓度。
1.2.4 色谱条件
色 谱 柱:Hypersil ODSC18(5 μm,4.6 mm×200 mm),不锈钢柱;流动相:甲醇、0.02 mol/L乙酸铵溶液(pH=4);梯度洗脱:甲醇10%~15%,3 min;15%~98%,9 min;98%,6 min;流速:1 mL/min;检测波长:510 nm;柱温:40 ℃;进样量:10 μL。
色谱条件下,在190~900 nm波长处扫描,得诱惑红的紫外吸收波谱见图1。图1表明诱惑红在可见光范围内在506 nm波长下有最大吸收。
图1 诱惑红的紫外吸收波谱
(1)提取液的选择。本实验提取诱惑红的方法分别试用了去离子水、氨水溶液与乙醇氨水溶液。实验表明各提取液属乙醇氨水溶液提取诱惑红色素的效果最好。
(2)提取液浓缩温度的选择。氨水的沸点是78 ℃,在这个温度下氨水容易挥发,因此提取液的温度选择在80 ℃。
(3)提取液浓缩体积的选择。样品中的目标组分经提取后,提取液浓缩体积定在2 mL左右后定容所溶解的色素较完全而且回收率较好,因此选择2 mL。
根据选择好的色谱条件下,诱惑红标准物质(5~50 μg/mL)线性范围内以1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列标准溶液进样分析,以诱惑红峰面积Y(mAU•min)为纵坐标、进样浓度X(μg/mL)为横坐标作图,计算出线性回归方程为:Y=506.8X+0.099 7,r=0.999 9,表明诱惑红浓度与峰面积具有良好的线性关系。以S/N=3计得到方法的最低检测限为10 μg/kg。
配制不同浓度诱惑红标准溶液(2.0 µg/mL、4.0 µg/mL和6.0 µg/mL);腐 乳 样 品 溶 浓 度 分 别 为5.24 µg/mL和10.20 µg/mL。加标回收以1.2.4方法处理进样,据此计算回收率。由表1可知,不同浓度的样品添加不同浓度的诱惑红标准溶液,诱惑红的回收率为92.00%~103.25%,其相对标准偏差为0.89%~1.53%,本方法是准确可靠的。
表1 诱惑红回收率(n=6)
样品重复测定6次,测得诱惑红峰面积的RSD为1.06%,表明本方法的精密度良好。
胭脂红与诱惑红的理化性质相同,因此选择胭脂红为代表进行抗干扰实验。对腐乳样品处理后,利用同样的色谱条件,分别对胭脂红和诱惑红进行分离检测。结果表明对各自的检出无影响,见图2。
图2 胭脂红、诱惑红的色谱图
本文运用高效液相色谱技术对腐乳中诱惑红进行了快速测定。优化样品前处理条件,有效提取样品诱惑红。依据诱惑红的特性选择了乙醇氨水溶液作为提取液,效率高且可以直接上机,快速方便。对诱惑红标准溶液进行了全扫描光谱分析,并确定检测最适合波长为506 nm。本文方法的检出限10.0 mg/kg,回收率在92.00%~103.25%,RSD值均<5%。本方法测定诱惑红,其线性、精密度和回收率等指标良好,可作为检测食品中诱惑红的推广方法。