TCT联合HPV、P16检测对早期宫颈癌病变诊断效能的影响

李瑞青（河南省安阳市卫生计生监督局,河南 安阳 455000）

宫颈癌为子宫阴道部或宫颈管出现恶性肿瘤，目前发病机制尚未明确，我国宫颈癌发病及死亡人数约占全世界的1/3。相关研究表明，早期宫颈癌治愈率高达80%-90%，因此，及早发现、诊断对患者治疗及防治具有重要意义[1]。宫颈液基薄层细胞学检测（TCT）、人乳头状瘤病毒（HPV）检测在宫颈癌检测中具有重要价值，而P16蛋白免疫组化染色异常表达与HPV感染及宫颈癌均关系密切[2]。基于此，本研究探讨TCT联合HPV、P16检测对早期宫颈癌病变诊断效能的影响，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我门诊收治的324例疑似早期宫颈癌患者（2017年3月-2019年3月），年龄20-68岁，平均（43.16±9.10）岁。

1.2 纳入及排除标准 ①纳入：均行TCT、HPV、P16检查；均行阴道镜下组织活检；存在宫颈溃疡、糜烂、接触性出血等病情；签署知情同意书。②排除：宫颈癌病史；子宫切除史；妊娠期妇女。

1.3 方法

1.3.1 TCT检查 患者均禁止性生活、阴道塞药，3d后先使用棉球清洁阴道，擦拭过多分泌物，再使用特制毛刷紧贴宫颈口与黏膜交界处，顺同一方向旋转5圈，采集毛刷上细胞置于保存液中备用。采用TCT检测仪（宁波美生公司），严格按照操作说明进行制片。由本院2名经验丰富妇科医师按照国际癌症协会制定的TBS分类标准进行诊断。其中阴性：正常或炎症（NILM）；阳性：意义不明非典型鳞状细胞（ASC-US）、低密度鳞状上皮内瘤变（LSIL）、高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）。剩余标本置于-20℃冰箱中保存。

1.3.2 HPV检查 取TCT样本，采用美国Digene公司第二代杂交捕获技术行HPV技术检查，结果显示标本荧光度值（RLU）/阳性定标阈值（CO）≥1.0pg/ml即为阳性。

1.3.3 P16免疫组化检查 P16免疫组化使用鼠抗人单克隆抗体P16（上海酶联生物研究所提供）与SP免疫组化试剂盒（上海研卉生物科技有限公司提供）检测，将TCT、HPV检测剩余标本制成细胞薄片，经95%乙醇固定30min、蒸馏水漂洗后，抗原热修复。P16蛋白表达定位于细胞质或细胞核，黄色或棕黄色染色为免疫组化阳性检出结果，后通过阳性细胞占比及分布情况分级。细胞染色数为单个，阳性细胞数＜5%为阴性；细胞染色数呈散状或小细胞团，阳性细胞数5%-24%为弱阳性；细胞染色数呈片状或簇状，阳性细胞数25%-50%为阳性；细胞染色数呈弥散性细胞着色，阳性细胞数＞50%为强阳性。

1.3.4 阴道镜检查与宫颈活检 对患者宫颈疑似病变位置检查，若镜下无明显病灶或图像不满意，可再取宫颈组织检查，所有病理学检查均由本院2名经验丰富的病理医生进行诊断。

1.4 观察指标 ①观察TCT、HPV与阴道镜活检病理诊断情况。②对比P16蛋白表达与阴道镜活检病理诊断结果。③以阴道镜活检病理诊断结果为“金标准”，比较TCT、HPV、P16蛋白及三者联合诊断宫颈癌病变准确率、敏感性、特异度。

1.5 统计学分析 采用SPSS22.0对数据进行分析，计数资料以n（%）表示，χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TCT、HPV与病理检查诊断情况 本组324例疑似早期宫颈癌患者经阴道镜活检病理检查阴性102例，阳性222例（CIN Ⅰ 111例，CIN Ⅱ 82例，CIN Ⅲ 20例，SCC 9例）；TCT检查真阴性89例，真阳性（CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC）共157例；HPV检查真阴性90例，真阳性（CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC）共163例，见表1。

表1 TCT、HPV与病理检查诊断情况

2.2 P16蛋白表达与阴道镜活检病理诊断结果 P16蛋白表达检查真阴性92例，真阳性129例（弱阳性、阳性、强阳性CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC），见表2。

表2 P16蛋白表达与阴道镜活检病理诊断结果

2.3 诊断效能 TCT+HPV+P16诊断早期宫颈癌准确率93.21%、敏感性96.85%高于TCT的75.93%、70.72%，HPV的78.09%、73.42%，P16的68.21%、58.11%（P＜0.05）；TCT+HPV+P16诊断早期宫颈癌特异度85.29%与TCT的87.25%、HPV的88.24%、P16的90.20%比较，差异不显著（P＞0.05），见表3。

表3 不同检查方式的诊断效能比较(%)

3 讨论

宫颈癌为常见恶性肿瘤，其死亡率居于我国女性癌症第2位，严重影响人们生活质量，宫颈癌为渐进性癌前病变过程，因此及早诊断、早治疗对提高患者治愈率尤为重要[3]。

TCT为典型宫颈癌细胞学检测技术，具有无创、迅速等特点，相较于病理活检等有创检查，更易被患者接受。然而，据相关研究统计，TCT检测宫颈癌及癌变情况准确率仅51%，与病理活检结果检测准确率70%-80%存在差异[4]。本研究结果显示，TCT检测早期宫颈癌准确率75.93%、敏感性70.72%，与上述结果一致。可能因TCT属形态学检查，虽能有效分辨不同时期宫颈癌，但易受取样、制片、染色及医师阅片水平等主观因素影响，且由于宫颈癌属多中心病变，仅采用TCT筛查则易降低检测准确率、敏感性，导致漏诊、误诊率较高。HPV为宫颈癌病变主要病原体，因此采用HPV检测早期宫颈癌病变为有效筛查方式。本研究结果显示，HPV检测早期宫颈癌准确率78.09%，敏感性73.42%。现代分子生物学研究表明，高危型HPV检测宫颈癌病变较为敏感，但仅高危型HPV持续性感染才可导致宫颈癌及病变情况发生，且多数患者为一过性感染，与宫颈癌关联性较弱，因此，HPV单独检测早期宫颈癌具有一定局限性，尚不能应用于初筛工作中[5]。P16基因为NK4家族重要成员，其编码产物为P16蛋白，而P16基因突变在许多肿瘤产生、发展中起重要作用，相关研究报道，P16表达阳性率可伴随病变程度增加而升高，表达强度也呈逐渐递增式，因此，P16可作为诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的重要指标[6-9]。本研究结果显示，P16检测早期宫颈癌准确率68.21%、敏感性58.11%，可见伴随病变程度增加，P16阳性表达率逐渐升高。相对于单种方式诊断而言，TCT+HPV+P16联合诊断早期宫颈癌准确率93.21%、96.85%高于单一诊断，三者联合可有效提高检测准确率、敏感性，取长补短，利于及早制定治疗措施。

综上所述，TCT联合HPV、P16蛋白免疫组化利于提高临床筛查早期宫颈癌准确率、敏感性，可有效降低漏诊情况发生，有助于早发现、早诊断、早治疗宫颈病变，具有较高临床价值，值得临床应用推广。