中药复方合剂对脱毛小鼠毛发生长的影响

麦五久代·吐尔逊，曹少宇，朱娇娇，陈沙沙，王玺涵，吕蕊花，贺太平，史琳娜

(陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046)

0 引言

脱发为皮肤科常见病，现代医学认为脱发与遗传、免疫、病源微生物感染、内分泌紊乱、营养不良、血管机能障碍等因素有关[1]。现有治疗药物存在不同程度的副作用，如非那雄胺和米诺地尔是美国FDA批准的治疗用药，临床疗效显著，但易造成性功能受损及皮肤过敏症状等不良反应[2]。我国中草药资源丰富，许多中药材具有养发、生发的作用，且有安全高、无毒副作用等优点[3-4]。本实验选用维吾尔族民间传统的养眉、生眉草药乌斯玛草，配伍何首乌、生姜、侧柏叶和女贞子，组合成中药复方合剂，通过实验观察其对小鼠毛发生长的影响，为进一步研发生发药剂提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验用品

(1)药品：乌斯玛草，购自新疆·伊犁州乌斯玛草种植园。中药材何首乌、生姜、侧柏叶和女贞子，均购自陕西中医药大学附属医院。(2)实验动物：昆明小鼠20只，雄性，6～8周龄，体重(20±10)g，由成都达硕实验动物有限公司提供。(3)试剂与仪器：石蜡、甲醛、无水乙醇、二甲苯、伊红染液、苏木精染液均购自博泰化玻仪器公司，薇婷丝滑泌香脱毛膏(利洁时家化有限公司)。Leica RM 2235切片机(德国徕卡公司)，ZEISS显微镜(德国蔡司公司)，数显游标卡尺(霍特电子有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 中草药有效成分提取及配比

水提法分别制备侧伯叶、女贞子、何首乌水提物。生姜和乌斯玛草捣成汁液，将过滤后的汁液与侧伯叶、女贞子、何首乌水提物混合制备成中药复方合剂，每毫升混合液含侧柏叶0.4mg、女贞子0.2mg、何首乌0.4mg、生姜1mg、乌斯玛草6mg，4℃保存备用。

1.2.2 小鼠脱毛模型构建

昆明小鼠20只，背部先用剃毛刀剃除毛发，去毛面积约2cm×2cm，再用脱毛膏去除残留毛发，确保局部皮肤毛发完全脱掉而呈粉红色。

1.2.3 分组及给药

脱毛次日，选取脱毛区光滑且无损伤的小鼠随机分为对照组和中药组，每组10只。中药组小鼠以棉签直接蘸取中药复方合剂涂抹脱毛区，每天1次，每次1 mL，连续28d。对照组涂抹蒸馏水。

1.2.4 小鼠毛发生长情况观察

分别于造模后第7、14、21、28d，对小鼠背部脱毛区进行拍照，并从小鼠原脱毛部位用镊子拔取5根毛发，用数显游标卡尺测量毛发长度，用光学显微镜测微尺测量毛发粗细。

1.2.5 小鼠皮肤组织形态学观察

涂药第28d时，颈椎脱臼法处死小鼠后切取小鼠原脱毛区皮肤组织，采用10%甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋后切片，HE染色，纤维镜下观察小鼠皮肤组织形态学变化。观察指标包括：①一般组织学检查：观察皮肤完整性，有无充血、水肿、炎细胞浸润等；②皮肤毛囊计数。

1.2.6 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用(±s)表示，比较采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 小鼠脱毛区毛发生长情况肉眼观察结果

由图1可见，与对照组相比，中药组小鼠脱毛区毛发生长速度显著增快。涂药第14d，中药组小鼠脱毛区皮肤已基本被毛发覆盖，而对照组小鼠脱毛区皮肤尚可观察到粉红色皮肤底层。涂药第21d，中药组小鼠脱毛区已全部长满毛发，对照组小鼠脱毛区毛发才开始覆盖粉红色皮肤底层。

图1 不同时间点小鼠脱毛区毛发生长情况观察

2.2 小鼠脱毛区新生毛发长度和粗度测定

中药复方合剂可显著促进小鼠脱毛区新生毛发长度的增长，用药第7、14、21、28d，中药组小鼠毛发长度均显著大于对照组(见表1)。此外，中药复方合剂也可显著促进小鼠脱毛区新生毛发粗度的增长，用药第7和28d，中药组小鼠毛发粗度显著大于对照组，尤其在毛发生长速度最快的前7天，促生长效果最显著(见表2)。

表1 小鼠脱毛区毛发长度测量结果(±s，mm)

表1 小鼠脱毛区毛发长度测量结果(±s，mm)

注：*P＜0.05表示有显著性；**P＜0.01表示有极显著性。

用药天数 毛发长度对照组 中药组7d 3.917±0.371 4.291±0.750*14d 4.776±0.295 5.639±0.165**21d 5.110±0.392 6.536±0.207**28d 5.536±0.207 6.700±0.231**

表2 小鼠脱毛区毛发粗细测量结果(±s，μm)

表2 小鼠脱毛区毛发粗细测量结果(±s，μm)

注：*P＜0.05表有显著性；**P＜0.01表示有极显著性。

用药天数 毛发粗细对照组 中药组7d 3.715±0.928 4.686±0.236**14d 4.609±0.155 4.729±0.306 21d 4.771±0.426 4.971±0.271 28d 5.143±0.237 5.383±0.176*

2.3 小鼠脱毛区皮肤组织形态学观察结果

脱毛区皮肤组织形态学观察结果显示，两组小鼠皮肤结构均完整，真皮内无血管扩张充血和炎细胞浸润。中药组小鼠毛囊分布稠密、毛乳头较大、毛根鞘较厚，对照组小鼠毛囊分布稀疏、毛乳头较小、毛根鞘较薄(图2)。毛囊计数结果显示，中药组小鼠皮肤组织内毛囊数显著大于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)(见表3)。

图2 小鼠脱毛区皮肤组织HE染色结果(HE10×10)

表3 小鼠脱毛区皮肤毛囊计数结果

3 讨论

中医认为毛发与五脏皆有关系，发为肾精之外候，脾主运化充养皮毛，肺主宣发同时助心行血，肝主疏泄，血生气，气生精，气血充沛则毛发生长旺盛[5]。侧柏叶性味苦、涩，寒，归肺、肝、脾经，凉血止血，生发乌发。现代研究证实侧柏叶具有促进毛发生长、止血、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等作用[6]。侧柏叶的挥发油可诱导了小鼠毛囊细胞中的β-catenin蛋白的表达，进而促进了毛囊的再生[7]。何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂之功效[8]。实验证实何首乌提取物能诱导C57BL/6J小鼠毛发由休止期进入生长期，从而促进毛发生长[9]。中医认为女贞子性味甘、苦、凉，归肝、肾经，具有滋补肝肾，明目乌发之功效。研究发现女贞子提取物可促进人黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成[10]。生姜味辛，具有解表发散、行气活血作用，外涂有助于舒张血管，改善受损皮肤的局部血液循环，促使毛发更生，对治疗肝肾不足型斑秃有显著效果[11]。乌斯玛草为中国新疆特有的一种菘蓝，是维吾尔族民间传统的养眉、生眉药草。现代研究证实乌斯玛草可显著促进雄激素性脱发模型小鼠毛发的生长[12]。本实验以乌斯玛草配伍4味具有生发功效中草药制备成中药复方合剂，观察其对小鼠毛发生长的影响，实验结果显示中药组小鼠毛发生长速度、长度、粗度、皮肤毛囊数目均显著大于对照组，表明中药复方合剂具有显著促进毛发生长和毛囊再生的作用，具有临床应用价值，也可进一步开发为生发养发保健产品。