DNA倍体定量分析、TCT及HR-HPV检测在宫颈上皮病变中的应用评估*

卢 葵，徐艳超，姚俊霞

(复旦大学附属中山医院青浦分院病理科，上海 201799)

宫颈上皮病变是常见的妇科疾病，宫颈癌是宫颈病变最严重的情况，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌，且呈逐年上升趋势。有调查显示[1]，子宫颈癌呈现发病年龄日趋年轻化的新特点。但宫颈癌前病变到宫颈癌有较长的过程，因此，早期筛查能降低宫颈癌的发病率及死亡率。目前DNA倍体定量分析作为一种新的光电自动检测技术在宫颈癌筛查中具有优越性，与一般细胞形态学的检测相比，更加敏感、客观。本研究旨在探讨DNA倍体定量分析单独或联合液基薄层细胞学(thinprep cytologic test，TCT)、高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus，HR-HPV)检测在宫颈病变诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年1月至2020年1月于医院门诊或住院行宫颈病变筛查并行阴道镜活检的妇女资料，选择608例有DNA倍体分析、TCT、HR-HPV检测结果的病例为研究对象，年龄22～70岁，平均(42.3±7.3)岁，本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 薄层液基细胞学

采集标本前24h内禁止性生活、阴道镜检查、阴道灌洗或上药，采用特制的颈管刷在子宫颈管内旋转5圈，收集宫颈口及宫颈管的脱落上皮细胞，并将收集到标本的毛刷放入保存瓶中，在振荡仪上混匀，将混匀的标本缓慢倒入盛有约4mL清洁液的离心管，使用1 000g离心力的离心机离心10min，快速弃除上清液保留试管底部上皮细胞团，再加入适量细胞基液，充分混匀成细胞悬液，用微量加样器吸50mL细胞悬液，加到清洁载玻片上涂片，制成直径15mm 的均匀薄层细胞涂片。自然干燥或恒温箱烘干，95%乙醇固定，巴氏染色，封片。判读方法采用2014版TBS诊断报告系统，TCT结果为ASCUS及以上为阳性。

1.2.2 DNA倍体定量分析

制片同上，采用Feulgen染色、封片。经Motisavant全自动细胞图像分析系统(麦克奥迪医疗诊断系统有限公司生产)，进行宫颈细胞DNA倍体分析，每张片上所有细胞核进行扫描测定，并进行细胞核积分光密度值(IOD)及核面积的测定、DNA指数(DNA index，DI)分析，DNA倍体分析异常是指发现DI值≥2.5的细胞。

1.2.3 HPV检测

使用安徽同科生物科技公司的HPV分型检测试剂盒检测(国械注准20183400412)，采用PCR多色荧光法，可检测15种高危HPV亚型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。检测结果只要任一亚型阳性即作为HPV阳性。

1.2.4 阴道镜活检及病理诊断

阴道镜检查依据改良Reid评分标准进行评分[2]，0分在3、6、9、12点活检，1分及以上者，在阳性区活检，病理诊断标准依据第四版《女性生殖器官肿瘤分类》(2014)的分类诊断原则[3]，分为慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌。

1.3 观察指标

以病理诊断为标准，分别计算DNA倍体定量分析、TCT、HR-HPV检测的灵敏度、特异度。灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%，特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%。

1.4 统计学方法

应用医学统计软件SPSS 22.0进行统计分析，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 宫颈组织活检结果

在608例活检组织中，病理诊断为正常或慢性宫颈炎183例(30.1%)；LSIL 354例(58.2%)；HSIL 46例(7.6%)；宫颈癌25例(4.1%)。

2.2 DNA倍体定量分析、TCT和HR-HPV检测在宫颈LSIL病变及以上的诊断结果

在608例活检结果中，LSIL及以上病变共425例(69.9%)，TCT诊断为ASCUS及以上为385例(63.3%)，DNA倍体定量分析阳性412例(67.8%)，HR-HPV阳性434例(71.4%)。见表1。

表1 DNA倍体定量分析、TCT和HR-HPV检测与LSIL病变及以上的结果

2.3 DNA倍体定量分析、TCT和HR-HPV检测对LSIL以上宫颈病变的诊断价值比较

DNA倍体定量分析诊断宫颈LSIL及以上病变的灵敏度是85.8%(365/425)，特异度74.3%(136/183)，TCT检测的灵敏度是73.8%(314/425)，特异度为61.2%(112/183)，HR-HPV检测的灵敏度是83.7%(356/425)，特异度57.3%(105/183)。根据统计分析，DNA倍体定量分析灵敏度比TCT高，有统计学意义(P<0.05)，与HR-HPV相比，差异无统计学意义(P>0.05)，特异度比TCT、HR-HPV检测都高，差异有统计学意义(P<0.05)，而HR-HPV检测灵敏度比TCT高，差异有统计学意义(P<0.05)，两者检测特异度差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4 DNA倍体分析联合其他检测对LSIL以上宫颈病变的诊断价值评估

DNA倍体分析+TCT、DNA倍体分析+ HR-HPV检测、TCT+ HR-HPV检测、DNA倍体分析+TCT+ HR-HPV检测在诊断LSIL以上宫颈病变的灵敏度分别是90.5%(385/425)、91.3%(388/425)、87.7%(373/425)、92.4%(393/425)，特异度分别是62.8%(115/183)、63.4%(116/183)、60.1%(110/183)、65.6%(120/183)。DNA倍体分析联合TCT或HR-HPV检测在灵敏度上与DNA倍体分析+TCT+ HR-HPV联合检测差异无统计学意义(P>0.05)，特异度上与DNA倍体分析+TCT+ HR-HPV联合检测差异无统计学意义(P>0.05)，TCT+ HR-HPV检测在灵敏度上与DNA倍体分析+TCT+HR-HPV联合检测差异有统计学意义(P<0.05)，特异度上差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

宫颈上皮内病变的常用筛查方法有TCT、HR-HPV检测、DNA倍体定量分析、阴道镜、宫颈活检等。TCT检查原理基于细胞形态改变，具有取材方便、无创等特点，但灵敏度及特异度受制片及阅片技术等影响大，故常与其他检测方法结合。我们研究结果也提示TCT的灵敏度低于DNA倍体分析技术及HR-HPV检测的灵敏度，特异度低于DNA倍体分析技术。HPV感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生发展的明确病因，目前研究认为高危型HPV的持续感染与宫颈病变及癌变有密切关联，高危型HPV检测具有高灵敏度，被世界卫生组织推荐用于宫颈癌的筛查。我们的研究提示HR-HPV检测有较高的灵敏度，但特异度较低只有57.3%，并且HR-HPV检测只能提示目前状态，无法鉴别一过性或持续性感染，也无法鉴别是否为致病性感染[4]。这时可以考虑将DNA倍体定量分析作为HR-HPV阳性患者的进一步筛查手段[5]。

DNA倍体定量分析是通过对细胞核内 DNA含量或染色体倍数测定来判断细胞生理状态和病理改变，在细胞大体形态无明显改变即可发现病变细胞，因此，可对宫颈癌及癌前病变做出早期诊断[6]。我们的研究提示DNA倍体定量分析在诊断宫颈上皮内病变中灵敏度85.5%、特异度74.3%，与TCT或HR-HPV检测联合，灵敏度可以达到90%以上，但特异度无改进，可能因该方法在临床应用时干扰因素较多，如HPV感染、维生素B12缺乏、放射线干扰、激素紊乱的老年妇女可出现异倍体细胞，导致其特异性降低[7]。尽管如此，研究多倾向于DNA倍体定量分析作为其他筛查的必要补充[8]。

综上，DNA倍体定量分析在宫颈上皮内病变的筛查有较高的临床应用价值，如果联合TCT或HR-HPV检测能提高灵敏度，减少漏诊率，受各种条件影响，在临床工作需选择合适的筛选方法，另一方面需要不断总结经验，提高对宫颈上皮内病变的诊断水平。