超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红

陈英

摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0?g/kg。本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

关键词：超高效液相-串联质谱法;苏丹红;非法添加

苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。

目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）;配有电喷雾离子源（ESI）;LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）;MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）;Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）;MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。

1.2 药品及试剂

实验用苏丹红Ⅰ～Ⅳ标准品，纯度均大于95%，购自Dr.Ehrenstorfer GmbH;甲醇、乙腈（色谱纯，美国Mreda公司）;甲酸（色谱纯，美国Fisher Scientific公司）;水为超纯水。

样品辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血均为市售。

1.3 标准溶液的配制

分别各精密量取适量标准溶液，加乙腈制成每1 mL中各约含1.0 mg的溶液，为标准储备液密封，于4 ℃保存。分别量取上述苏丹红Ⅰ～Ⅳ标准储备液适量，用甲醇稀释成约0.5 mg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液适量，加空白样品基质提取液配制系列混合基质标准溶液。

1.4 样品处理方法

提取。取待测试样适量混匀，研细，称取粉末5.0 g（准确至0.001 g），置50 mLpvc离心管中，加15 mL乙腈超声提取（功率300 W，频率50 kHz）30 min，以6000 r/min离心5 min，取上清有机液，残渣加15 mL乙腈复提一次，合并两次有机液于鸡心瓶，旋转蒸发近干，备用。

净化。将上述提取的样品用1 mL的乙腈溶解，混匀，转移到氧化铝层析柱上，用正己烷洗脱，氮吹浓缩置近干，1 mL乙腈复溶，过0.22 μm滤膜，备用。

1.5 色谱条件和质谱条件

色谱柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 ?m，2.1mm×100 mm）;柱温：35 ℃;进样量：5 μL;流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈溶液，进行梯度洗脱，流速：0.6 mL/min。

电离源模式：电喷雾离子化;电离源极性：正离子模式;雾化气：氮气;掃描方式：正离子扫描;检测方式：多反应监测（MRM）;电喷雾电压：4000 V;离子源温度：150 ℃、碰撞电压（CE）为20～30 V、去簇电压（DP）30～40 V。具体待测物的准确质量数及碎片离子为：苏丹红Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2;苏丹红Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1;苏丹红Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0;苏丹红Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。

2 结果和分析

2.1 质谱方法的建立

将苏丹红Ⅰ～Ⅳ标准品储备液分别稀释成浓度约为200 ?g/L，按照上述色谱和质谱条件进样检测，在7 min内苏丹红Ⅰ～Ⅳ能得到很好分离，方法条件满足辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ的测定。

2.2 标准曲线和检出限

在上述本实验色谱和质谱条件下，取1.3混合系列标准溶液0～500 μg/L，绘制标准曲线，以定量离子峰面积y对质量浓度x（μg/L）做线性回归，得到苏丹红Ⅰ～Ⅳ的线性方程和相关系数。苏丹红Ⅰ：y=1 271.7x+3 854.8，苏丹红Ⅱ：y=1 540.1x+4 678.5，苏丹红Ⅲ：y=1 383.2x+2 432.3，苏丹红Ⅳ：y=1 262.1x+2 743.3，r2均大于等于0.999。将混合系列溶液的最低浓度点溶液稀释后进样分析，测定信噪比，取信噪比约为3的溶液浓度作为定性检测限，信噪比约为10的溶液浓度作为定量检测限。检出限和定量限为1.0～6.0 ?g/kg。

2.3 精密度和重复性试验

按本实验条件，在5种不同基质样品中进行3个添加水平（0.1 ?g/mL、0.2 ?g/mL、0.5 ?g/mL）的加标回收实验，每个添加水平平行实验6次。苏丹红Ⅰ的平均回收率为89.3%、93.5%、91.9%;苏丹红Ⅱ的平均回收率为92.2%、91.4%、104.9%;苏丹红Ⅲ的平均回收率为87.9%、88.0%、90.5%;苏丹红Ⅳ的平均回收率为85.1%、86.9%、91.5%，平均相对标准偏差分别为4.05%、3.2%、6.18%，表明该方法具有良好的精密度和准确度。可满足食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ的分析要求。

2.4 样品测定

应用建立的本方法，对市场销售的50批次辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血样品进行了筛查，所测样品中均未检出苏丹红Ⅰ～Ⅳ。

3 结论

本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率质谱检测方法，可同时测定食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ，样品没有复杂的处理过程，操作简便，可在7 min内完成整个分析，提高了检验效率。采用液相色谱-串联质谱的MRM模式进行定性和定量检测，灵敏度、准确度高，适用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检测。

参考文献

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